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前列腺癌诊断标志物的研究进展
前列腺癌是老年男性常见疾病,近几年前列腺癌患病率在中国的呈显著增高趋势,前列腺癌的早期诊断成为目前临床上关注的焦点.临床诊断一直依据患者的临床症状和体征、肛门指检、B型超声,由于前列腺癌的生物学特性比较复杂,其早期的临床症状不显著,因此诊断敏感度仍不满意,漏误诊率高.随着医学技术的不断发展与完善,生物诊断技术的日臻成熟,前列腺的诊断及辅助诊断跨上了一个崭新的台阶.
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抗PSMA全人源单链抗体制备、鉴定及初步应用
目的 构建抗PSMA全人源单链抗体库,筛选抗PSMA人源单链抗体(ScFv)并鉴定,应用人源ScFv进行分子显像.方法 从健康人外周血淋巴细胞中提取总RNA,用RT-PCR方法扩增人轻链和重链可变区基因,重叠PCR拼接轻重链可变区基因,构建ScFv的表达载体pDF-ScFv,电转染大肠杆菌XL1 Blue,获得噬菌体单链抗体库,酶切鉴定及测序分析,用PSMA抗原进行富集筛选,阳性克隆用Western-Blot 和DNA指纹图谱鉴定.应用直接标记法将125I标记在ScFv上,通过尾静脉注入前列腺癌动物模型体内,2h后进行小动物SPECT/CT显像,观察人源ScFv对前列腺癌的定位性能.结果 成功构建抗PSMA全人源单链抗体库,库容约2.16×108,插入片段经酶切及DNA测序证实为人抗体轻链和重链可变区基因.筛选出6株ScFv阳性克隆,Western-Blot证实6株ScFv均能与PSMA抗原特异性结合,DNA指纹图谱鉴定6株ScFv可变区基因具有多样性.动物模型的分子显像:人源ScFv能与前列腺癌PSMA抗原特异性结合,并使肿瘤显像.结论 成功构建了一个全人源噬菌体单链抗体库,并筛选出了抗PSMA单链抗体,单链抗体在动物模型体内能靶向结合前列腺癌细胞,从而为前列腺癌的靶向诊断和治疗奠定了基础.
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PSMA靶向性小分子谷氨酸尿素类似物Glu-urea-Lys的合成
[目的]探索前列腺特异性膜抗原(PSMA)靶向性谷氨酸尿素小分子的合成.[方法]按照标准的无水无氧操作技术进行实验操作；应用核磁共振光谱仪与高分辨质谱仪进行化合物成分测定分析.[结果]经核磁共振波普法与质谱法分析,确认得到以谷氨酸尿素为结构基础的小分子化合物Glu-urea-Lys.[结论]以Glu-urea-Lys为基础结构的研究,将为前列腺癌分子影像学诊断及靶向治疗领域提供理论依据与实验基础.
关键词： PSMA Glu-urea-Lys 前列腺癌 -
RT-qPCR技术在前列腺癌诊断中的应用
实时荧光定量PCR技术，具有特异性强、灵敏度高、重复性好、定量准确、速度快、全封闭反应等优点。本文就RT-qPCR技术在检测与前列腺癌关系较密切的三个肿瘤标志物：前列腺特异性膜抗原（ PSMA）、α-甲基酰基辅酶A消旋酶（AMACR）及前列腺癌基因3（PCA3）中的应用进行如下综述。
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多肽负载DC联合CIK治疗激素难治性前列腺癌的疗效
目的:研究多肽负载树突状细胞( dendritic cell,DC)联合细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer cell,CIK)对激素难治性前列腺癌(hormone refractory metastatic prostate cancer,HRPC)患者免疫治疗的效果.方法:选择无锡市第四人民医院中西医结合科收治的HLA-A2+ HRPC患者26例,分离外周血单个核细胞,其中贴壁细胞经GM-CSF、IL-4联合诱导培养为成熟DC,负载前列腺癌特异性抗原(prostate specific antigen,PSA)、前列腺酸性磷酸酶(prostatic acid phosphatase,PAP)、前列腺特异性膜抗原(prostate specific membrane antigen,PSMA)三个多肽,制备成DC疫苗,经患者腹股沟皮内注射；未贴壁细胞经IFN-γ、IL-2、抗CD3单抗、IL-1体外诱导培养成CIK,经静脉回输给患者.在治疗后l周进行迟发型超敏反应(delayed type hypersensitivity,DTH)检测,在患者治疗前后进行血清中细胞因子和PSA检测,治疗结束后4周进行短期疗效评价.结果:26例HRPC患者对DC联合CIK治疗的耐受良好.治疗后患者血清中IL-2、IL-12、IFN-γ水平较治疗前显著升高(上升幅度分别为65.07％、67.69％和125.38％,P＜0.05或P＜0.01),TNF-α和IL-10水平变化不大；DTH的阳性率为43.5％ (10/23)；7例患者的CD8+ IFN-γ+T细胞比例较治疗前显著提高[(8.95±2.74)％vs(0.39±0.15)％,P＜0.01]；8/26例患者的PSA下降,降幅为13％ ～66％.26例患者短期疗效评价,3例PR、4例PD、19例SD,所有患者治疗中未出现明显不良反应.结论:多肽负载DC联合CIK治疗HRPC能激发患者的免疫应答、诱导Th1型细胞因子的分泌,近期疗效良好,是一种安全的治疗方法.
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PSMA配体的前列腺癌PET显像
近年来,用68Ga和18F标记PET显像剂靶向前列腺特异膜抗原(PSMA)逐渐受到重视.多项回顾性研究指出,与常规影像相比,PSMA配体前列腺癌PET/CT显像具有较高的检测效能,前列腺癌生化复发已被世界多个地区确立为PSMA配体前列腺癌PET/CT显像的临床适应证.对于高危原发前列腺癌,越来越多的证据表明该显像方式有助于探测隐匿性淋巴结和前列腺癌骨转移;对于原发和复发性前列腺癌的临床适应证,初步研究证实其对临床管理有着重要影响;另有证据表明,其对前列腺内的肿瘤定位、治疗分期和特定临床情况下的晚期病灶治疗监测将成为未来的适应证.随着有关生理性和病理性摄取模式和误区文献数量的剧增,PSMA配体PET显像报告的标准也在不断改进.文章旨在对PSMA配体PET显像的现状进行概述,包括显像程序和解释、临床适应证、诊断潜力及其对治疗计划的影响.
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不同肿瘤标志物在前列腺癌中的诊断价值
目的 探讨不同肿瘤标志物在前列腺癌中的诊断价值.方法 选取2013年6月至2016年12月拟诊断前列腺癌的患者共76例,对患者进行穿刺活检确诊后,分为前列腺癌组(26例)和非前列腺癌对照组(50例),采用ELISA方法检测两组患者血清中PSA、PSMA、Spondin-2含量,并评价各指标与前列腺癌发的相关性,以及对前列腺癌的诊断效果.结果 前列腺癌组和非前列腺癌对照组患者血清中PSA、PSMA、Spondin-2的含量具有显著性差异(P<0.01);PSA、PSMA及Spondin-2分别与前列腺癌发生均呈正相关(r=0.306,r=0.499,r=0.299),且PSMA的诊断敏感性和特异性高,分别达到80.8％和60.0％.结论 PSMA有助于提高前列腺癌诊断敏感性及特异性,具有重要的诊断价值.
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前列腺癌抗原标志物的研究进展
前列腺癌(PC)是泌尿系常见的恶性肿瘤,也是当前威胁全世界老年男性健康的主要恶性肿瘤.不但是欧美发达国家常见恶性肿瘤之一,而且在我国的发病率也呈明显上升趋势.关于前列腺癌的诊断,尤其是早期诊断,日益受到人们的重视.在众多的检测方法中,利用抗原抗体的特异性结合的免疫学方法无疑是备受关注的.尤其是ELISA方法,因其无损害、操作简单、易获取、易推广已在临床上广泛应用于肿瘤的筛查和早期诊断中.并且在生物工程的特异性识别和靶向治疗中,免疫学方法起着不可替代的作用.
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前列腺癌中PSMA、PSCA的表达与病理分级、骨转移和预后的关系及其临床意义
前列腺癌是欧美国家男性常见的恶性肿瘤,病死率仅次于肺癌,居男性肿瘤第二位[1-2].近年来在我国中老年男性中,前列腺癌发病率呈迅速上升趋势.由于早期多无症状或症状不明显,大约50％～80％的前列腺癌患者就诊时已发生广泛转移、失去了根治性手术的机会[3].由于前列腺癌的骨转移绝大多数是成骨性转移,SPECT全身骨显像是目前早期诊断前列腺癌骨转移灵敏和简便的方法,较X线检查可提前3～6个月发现骨转移病变[4],因此,全身骨显像对早期诊断骨转移有很高的临床价值.
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前列腺特异性膜抗原与前列腺癌的关系及其临床应用
前列腺特异性膜抗原(PSMA)是位于前列腺细胞膜上的Ⅱ型跨膜糖蛋白,特异地表达于上皮细胞,在前列腺癌及其转移灶中表达增高,特别是在晚期患者及对激素治疗不敏感的患者中其表达升高尤为明显.因此可作为靶蛋白,在前列腺癌的早期诊断、判断病情进展及预后,以及在前列腺癌的靶向治疗中具有重大意义.
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前列腺特异性膜抗原基因片段在酿酒酵母中的诱导表达及意义
[目的]分析前列腺特异性膜抗原(PSMA)基因片段在酿酒酵母中的诱导表达情况,以便进一步探讨重组人PSMA的免疫活性并完成抗前列腺癌PSMA蛋白疫苗的制备.[方法]应用基因重组技术将人PSMAcDNA序列克隆入酿酒酵母穿梭诱导表达载体pYES2/NT,构建重组酵母真核表达质粒pYES2/NT-PSMA,转化酿酒酵母菌株INVSc1,尿嘧啶筛选出阳性克隆转化子,经半乳糖诱导表达后进行菌体全蛋白的Western blot检测.[结果]成功构建了PSMA的酵母真核表达重组子pYES2/NT-PSMA,并在酿酒酵母INVSc1中得到有效表达,Western blot显示两个特异性的人重组PSMA全蛋白片段,相对分子质量分别为Mr=100×103及Mr=85×103.[结论]人PSMA基因片段能够在酿酒酵母中表达并进行翻译后糖基化修饰,为下一步进行抗前列腺癌PSMA疫苗的研制奠定了良好基础.
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过表达前列腺特异性膜抗原和荧光素酶的PC3稳定细胞系的建立及成瘤性鉴定
目的 利用慢病毒感染的方法建立能稳定表达前列腺特异性膜抗原(PSMA)和荧光素酶的PSMA+-PC3细胞系,并将其接种到裸鼠皮下检测其成瘤能力.方法 包装表达PSMA的慢病毒和表达荧光素酶的慢病毒,将其感染PC3细胞后,用嘌呤霉素进行筛选,建立能够稳定表达PSMA和荧光素酶的PSMA+-PC3细胞和仅表达荧光素酶的PSMA--PC3细胞;利用流式细胞术检测PSMA的表达情况.将PSMA+-PC3和PSMA--PC3细胞接种于裸鼠皮下建立荷瘤模型,利用生物发光成像法观察其在体内的成瘤情况,利用免疫组织化学染色法检测PSMA+-PC3和PSMA--PC3肿瘤组织中PSMA的表达情况.结果 成功建立了能够稳定表达PSMA和荧光素酶的PSMA+-PC3细胞和仅表达荧光素酶的PSMA--PC3细胞,流式细胞术检测证实PSMA+-PC3细胞上PSMA呈阳性表达,小动物活体成像结果显示PSMA+-PC3和PSMA--PC3细胞均可有效成瘤,免疫组织化学染色检测证实PSMA+-PC3肿瘤上PSMA的表达为阳性.结论 成功建立了能稳定表达PSMA和荧光素酶的PSMA+-PC3细胞系,并在裸鼠体内证实其可有效成瘤,为靶向PSMA的研究提供了有用的细胞和动物模型.
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P504s、P63、PSMA及Ck34βE12在前列腺良恶性病变鉴别中的意义
目的 探究P504s、P63、PSMA及Ck34βE12在前列腺良恶性病变鉴别中的意义.方法 选取2014年1月-2016年12月收治的直肠B超引导下的手术切除标本112例作为研究对象,所获标本均进行石蜡切片,检测切片中P504S、P63、PSMA及Ck34βE12,根据阳性细胞比例分级.对单独和联合检测P504S、P63、PSMA及Ck34βE12诊断前列腺癌的准确度,灵敏性及特异性进行统计.结果 P504S在Pca患者中阳性率为100.00％,弥散阳性率高达62.75％,显著高于AAH、BCH和BPH的表达量;P63和Ck34βE12在Pca的阳性率为0％,而在HGPIN、AAH、BCH和BPH中的表达量均为100.00％;PSMA在Pca、HGPIN的阳性率为98.04％和90.91％,在AAH、BCH和BPH中的阳性率分别为13.33％、11.11％和9.52％;P504S、P63、PSMA及Ck343E12联合检测对前列腺癌诊断的准确度,灵敏性及特异性分别达到100.00％、97.85％和98.24％,具有一定的临床诊断价值.结论 对于前列腺癌的诊断,P504S、P63、PSMA及Ck34βE12联合检测能够显著增加对前列腺癌诊断的准确度,特异性和灵敏度.
