首页 > 文献资料
-
Ad5-hOPG-EGFP转染对比格（Beagle）犬牙周膜细胞生物学活性的影响
目的：利用在体外进行重组后的重组腺病毒（Ad5-hOPG-EGFP）载体对犬牙周膜细胞进行转染，观察牙周膜细胞（PDLCs）的生物学活性是否受影响。方法利用在体外重组后的腺病毒载体（本身携带有hOPG基因）对犬牙周膜细胞进行转染，并利用生物形态学和生物化学技术对其细胞活性进行检测。结果转染了重组腺病毒Ad5-hOPG-EGFP的Beagle犬PDLCs在形态学上与对照组没有明显差异，仍保持了较强的增殖能力。结论腺病毒载体转染后的Beagle犬PDLCs仍保持了良好的生物学活性。
-
Rho GTP酶及其在口腔领域的研究
Rho GTP酶小鸟苷酸三磷酸酶,是一种单体G蛋白,它在肌动蛋白细胞骨架的组装、细胞粘附、细胞运动、胞质分裂和基因表达等方面与临床上多种口腔疾病的发生有关.如空腔溃疡,正畸,牙周疾病的发生有密切关系.动物实验和临床研究均证实Rho激酶抑制剂对多种空腔疾病有较好的疗效.因此,对Rho GTP酶的研究可能为当前空腔病药物治疗提供一个新的思路.
-
人牙周膜细胞在左旋聚乳酸/羟基磷灰石生物材料上的生长观察
目的 观察电纺左旋聚乳酸,羟基磷灰石(PLLA/HA)生物材料(简称生物材料)的生物相容性,并以人牙周膜细胞作为种子细胞与生物材料复合培养,探索该生物材料用于人牙周组织再生的可能性.方法 用电纺法制备PLLA/HA纤维生物材料;组织块法分离培养人牙周膜细胞,并用免疫组织化学方法鉴定;MTT法评价生物材料的生物相容性;将人牙周膜细胞与生物材料复合培养,用扫描电镜进行观察;将转染人腺病毒介导的绿色荧光蛋白的人牙周膜细胞与生物材料复合培养,用激光扫描共焦显微镜观察.结果 成功分离了人牙周膜细胞.波形蛋白染色阳性确定该细胞来源于中胚层;MTT法检测人牙周膜细胞在生物材料上的增殖状况与正常培养基本一致;扫描电镜下可见细胞在生物材料上生长旺盛、充分伸展;激光扫描共焦显微镜下可见人牙周膜细胞沿生物材料呈纤丝生长,表现出一定的三维结构.结论 电纺PLLA/HA生物材料具有三维空间网状结构和良好的生物相容性,与人牙周膜细胞复合培养有利于细胞的生长、贴附和增殖,并呈现一定的立体结构,为人牙周组织再生提供了实验依据.
-
牙周膜细胞在网格型与无纺型聚乳酸纳米纤维支架材料上体外培养的研究比较
研究对比牙周膜细胞在无纺型和网格型聚乳酸纳米纤维膜上的生长行为,探讨支架结构对细胞生长的影响.采用静电纺丝技术,用金属平板或金属网分别接收,得到无纺型和网格型聚乳酸纳米纤维膜;通过SEM观察两种支架形貌差异,并测试比较它们的力学性能.通过MTT测试和SEM观察,比较无纺型和网格型纳米纤维膜对细胞生长的影响.实验结果:网格型膜的纤维直径平均为500～600 nm;无纺型膜的纤维直径大于网格型膜,平均直径约为700 nm,但网格型膜的拉伸断裂应变略大.牙周细胞与支架联合培养的MTT结果显示,与在聚苯乙烯(TCPS) 培养板上的培养比较,两种纳米纤维膜都显示出促进细胞增殖的效果,其中网格膜的促进效果比无纺膜更加明显.SEM观察的结果显示,细胞无法进入无纺型膜内部生长,而网格型膜中由疏松纤维堆积形成的大孔结构则非常有利于细胞进入支架内部,细胞在后者上生长良好.因此,网格型纳米纤维支架是一种优于纤维为完全无纺排布的支架,更适用于组织工程研究.
-
低强度脉冲超声对人牙周膜细胞增殖及碱性磷酸酶活性的影响
目的 探讨低强度脉冲超声(low intensity pulsed ultrasound,LIPUS)对人牙周膜细胞(human periodontal ligament cells,hPDLCs)增殖和碱性磷酸酶(alkali phosphatase,ALP)活性的影响.方法 不同参数(按辐照强度IsATA 30、60、90 mW/cm2,时间10、20、30 min/d分组)LIPUS辐照干预hPDLCs培养,四甲基偶氮唑盐比色法检测hPDLCs增殖率,流式细胞仪检测细胞增殖周期,酶化学法测定ALP活性.结果 LIPUS辐照时间20 min/d、强度90 mW/cm2时可促进hPDLCs增殖；辐照后hPDLCs增殖指数较对照组显著提高.各组ALP活性较对照组均有不同程度提高；不同辐照强度组间及不同辐照时间组间的ALP活性差异显著(Fi=226.391,P＜0.05,Ft=145.572,P＜0.05)；不同辐照强度和辐照时间的交互作用也有统计学意义(F=448.540,P＜0.05)；其中90 rmW/cm2、20 min/d组促进作用强.结论 LIPUS具有促进hPDLCs增殖及成骨分化作用,90 mW/cm2、20min/d为促进hPDLCs增殖和成骨分化的适宜参数.
-
小型猪牙周膜细胞体外培养及与三维支架材料的生物相容性研究
目的建立小型猪牙周膜细胞的体外培养方法,研究其与三维支架材料的生物相容性,为牙齿再生和牙周组织工程研究提供依据.方法无菌条件下,拔除12月龄小型猪上颌尖牙,剥离牙根外牙周组织,用3g/LⅠ型胶原酶和4g/L Dispase 37℃消化1 h,用70μm滤网收集细胞,1000 r/min离心10 min,培养液重新悬浮成单细胞悬液,α-MEM(α-modification of Eagle's medium)培养基培养.每天用倒置显微镜观察细胞生长情况,流式细胞仪检测抗Stro-1抗体的表达情况.取第3代牙周膜细胞接种于HA/TCP上,扫描电镜观察培养3天和5天后细胞在三维支架材料上的生长情况.结果原代培养的小型猪牙周膜细胞生长良好,呈多角形或梭性.流式细胞仪结果显示,分离培养的牙周膜细胞中有7.6%抗Stro-1抗体表达阳性.扫描电镜观察结果表明,牙周膜细胞在HA/TCP三维支架上生长良好.结论小型猪牙周膜细胞可被成功的分离培养,在三维支架材料HA/TCP上表现出良好的生长状态,有望为牙齿再生和牙周组织工程研究提供有用的细胞来源.
-
体外评估不同根管充填材料对牙周膜细胞的毒性
目的 通过体外实验评估4种根管充填材料对牙周膜细胞的毒性.方法 体外培养牙周膜细胞,取AH Plus、Cortisomol、RoekoSeal和氧化锌丁香油糊剂4种材料的新鲜和陈旧样本,新鲜样本在材料固化后即刻提取浸提液,陈旧样本于37℃恒温水浴箱内放置7d提取浸提液,并分别制成50%稀释液,与人牙周膜细胞接触24h、48h,通过二甲基噻唑二苯基四唑溴盐比色法,比较不同时期、不同浓度、不同材料对牙周膜细胞的毒性.结果 新鲜样本:RoekoSeal对牙周膜细胞无毒性,AH Plus有轻度毒性,Cortisomol和氧化锌丁香油糊剂有重度毒性;陈旧样本:RoekoSeal对牙周膜细胞有轻度毒性,AH Plus,Cortisomol有中度毒性,氧化锌丁香油糊剂仍为重度毒性;随着浸提液与细胞作用时间延长,RoekoSeal 和AH Plus的毒性增强,统计学上有显著意义;而Cortisomol和氧化锌丁香油糊剂的毒性与细胞作用时间长短无相关性.4种材料浸提液原液和50%稀释液之间无显著差异.结论 RoekoSeal不论在何种情况下,是4种材料中对牙周膜细胞影响小的材料.
关键词： 根管充填材料 牙周膜细胞 二甲基噻唑二苯基四唑溴盐比色法 -
牙周膜细胞松质骨基质支架复合移植促进牙周组织再生的研究
目的 观察牙周膜细胞(PDLCs)接种松质骨基质(CBM)支架复合移植对牙周组织再生修复的影响和意义.方法 将体外培养的狗自体PDLCs接种到CBM三维支架上,体外进行细胞计数和扫描电镜观察,并植入狗人工牙周组织缺损处,表面覆盖聚四氟乙烯膜(e-PTFE),以单纯翻瓣组和只覆盖e-PTFE组作为对照.术后8周对动物组织标本进行组织学观察和测量,分析比较各组牙周组织的再生情况.结果 PDLCs在CBM支架材料上形成良好的贴附并增殖,扫描电镜可见CBM具有良好的多孔网状结构,细胞在CBM上生长旺盛,伸展充分.自体PDLCs/ CBM / e-PTFE膜复合植入组较单纯翻瓣组和e-PTFE组有更多的新生牙槽骨、新生牙周膜和新生牙骨质生成,且未见上皮长入.结论 PDLCs接种松质骨基质支架复合移植能更有效地促进牙周组织再生和重建,CBM有望用作牙周组织工程的支架材料.
-
Leptin对人牙周膜细胞骨向分化作用的实验研究
目的 探讨瘦素( leptin)对人牙周膜细胞增殖和骨向分化的作用.方法 采用酶消化法体外培养人牙周膜细胞,用不同浓度梯度的leptin处理细胞,通过四唑盐(MTT)比色试验和碱性磷酸酶活性测试,检测leptin对细胞体外增殖分化的影响.将人牙周膜细胞与羟基磷灰石/磷酸三钙材料作为复合体,植入BALBc免疫缺陷裸鼠,12周后采用组织学和免疫组化法检测裸鼠体内生成物.结果 体外实验leptin对人牙周膜细胞增殖有明显抑制作用,但leptin能促进人牙周膜细胞碱性磷酸酶的活性表达.体内试验中leptin可提高牙周膜细胞生成类骨质的能力.结论 leptin抑制牙周膜细胞的增殖活性,但可明显促进牙周膜细胞骨向分化.
关键词： 瘦素 牙周膜细胞 增殖 羟基磷灰石/磷酸三钙 骨向分化 -
碱性成纤维细胞生长因子对人牙周膜细胞增殖与ALP活性表达的影响
目的:探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对人牙周膜细胞的增殖与碱性磷酸酶(ALP)活性表达的影响,为bFGF应用于牙周组织的再生与修复提供实验依据.方法:采用MTT和ALP活性检测法,观察不同浓度(0.1～10 ng/ml)的bFGF第24、48和72小时对5%和10%胎牛血清(FBS)体外培养的第3代人牙周膜细胞(PDLCs)的作用.结果:与对照组比较,①10%FBS,5ng/ml和10ng/ml的bFGF在第24、48、72小时,可显著促进PDLCs的增殖(P＜(0.01～0.05),5%FBS,10ng/ml的bFGF在24、48小时,5ng/ml的bFGF在24小时对PDLCs有显著促增殖作用(P＜0.01).②10%FBS,1ng/ml的bFGF在48、72小时,5ng/ml的bFGF在24、48、72小时,10ng/ml bFGF在48小时对PDLCs有显著增强ALP活性的作用P＜0.01-0.05);5%FBS,10ng/ml的bFGF在24、72小时对PDLCs有显著增强ALP活性的作用(P＜0.05).结论:以上结果提示:在一定的作用时间内和一定条件下,5ng/ml和10ng/ml的bFGF可促进人PDLCs的生长和分化.
关键词： 牙周膜细胞 碱性成纤维细胞生长因子 MTT 碱性磷酸酶 -
胰岛素在高糖环境诱发牙周膜细胞凋亡过程中的调节作用
目的:探讨胰岛素在高糖环境下牙周膜细胞凋亡过程中的调节作用.方法:本实验采用含有不同葡萄糖浓度的培养基培养人牙周膜细胞,并采用胰岛素作治疗对照,作用24小时后,立即使用流式细胞仪对各组凋亡细胞进行计数,后进行统计学分析.结果:葡萄糖浓度增至15mmol/L时,牙周膜细胞凋亡比例无显著增加(3.47±0.78 VS 3.03±0.40,P＞0.05),当葡萄糖浓度增至25mmol/L和35mmol/L时,牙周膜细胞凋亡比例显著增加(5.07±0.611 VS 3.03±0.40,P＜0.01;7.13±0.72 VS 3.03±0.40,P＜0.01),加入胰岛素后,牙周膜细胞凋亡比例显著下降(7.13±0.72 VS 5.23±0.85,P＜0.01),但仍然高于正常糖浓度组(5.23±0.85 VS3.03±0.40,P＜0.01).结论:胰岛素能够部分抑制高糖环境诱发的牙周膜细胞凋亡.
-
MAPK信号通路抑制剂对内皮素-1诱导牙周膜细胞分泌白介素-6的影响
目的:研究丝裂原激活蛋白激酶(Mitogen-activated protein kinases,MAPKs)信号途径对内皮素-1(endothelin-1,ET-1)诱导牙周膜细胞分泌白介素-6(interleukin-6,IL-6)的调控作用,为探讨ET-1在牙周炎发病机制中的作用奠定基础.方法:体外培养牙周膜细胞,于加ET-1处理前30min分别向培养基中加入ERK通路抑制剂PD98059(10μM),JNK通路抑制剂SP600125(10μM),p38α通路抑制剂SB203580(10μM).再加入100nM ET-1,以未作任何处理的牙周膜细胞为空白对照.刺激12h后提取细胞培养上清液和细胞裂解物,采用实时定量PCR及ELISA检测各组牙周膜细胞IL-6基因及蛋白表达的改变.结果:与对照组相比,ET-1对牙周膜细胞IL-6 mRNA(1.3615±0.0137)及蛋白(352.1252±6.7851 ng/ml)分泌具有显著促进作用,PD98059和SB203580可抑制ET-1对牙周膜细胞IL-6 mRNA及蛋白表达的促进效应,但SP600125的抑制作用不明显.结论:ET-1可激活多条MAPKs信号通路调控牙周膜细胞IL-6的表达.
-
电纺左旋聚乳酸和左旋聚乳酸羟基磷灰石纳米纤维细胞相容性的比较研究
目的:用MTT法检测电纺左旋聚乳酸和左旋聚乳酸/羟基磷灰石PLLA和PLLA/HA纳米纤维材料,对人牙周膜细胞生长曲线的影响,评价两种材料的细胞相容性.方法:通过电纺技术制备PLLA、PLLA/HA纳米纤维材料,体外分离、培养并鉴定人牙周膜细胞,用MTT法检测人牙周膜细胞在两种材料上的生长曲线,评价两种材料的细胞相容性及其用于口腔组织工程的可能性.结果:成功分离、培养了人牙周膜细胞,通过免疫组织化学染色鉴定细胞来源于中胚层,为牙周膜细胞.电纺法制备的PLLA、PLLA/HA纳米纤维材料具有三维网状空间结构,与人牙周膜细胞共培养,MTT检测结果显示,细胞能够在材料上生长增殖,在第七天时PLLA/HA组细胞增殖好于PLLA组和对照组.结论:电纺PLLA和PLLA/HA纳米纤维材料生物相容性良好,PLLA/HA组较单纯PLLA组能够促进细胞的增殖,有望成为良好的新型口腔组织工程支架材料.
-
体外培养的人牙周膜细胞在机械力作用下骨保护因子mRNA的表达
目的研究机械力对体外培养的人牙周膜细胞骨保护因子(osteoprotegerin,OPG)信使RNA(messenger RNA,mRNA)表达的影响.方法应用细胞加力装置对体外培养的人牙周膜细胞施予间歇性牵张力48小时,原位杂交检测细胞加力前后OPG mRNA的表达.结果机械力作用下人牙周膜细胞OPG mRNA表达下降.结论正畸骨改建过程中,机械力引起牙周膜细胞OPG表达的变化.这一结论为进一步研究人牙周膜细胞在机械力作用下参与骨改建的机理打下基础.
-
自体牙周膜细胞移植对狗牙周组织再生的影响
目的 对应用自体牙周细胞移植结合e-PTFE膜引导的牙周组织再生的动物实验进行评价.方法 将6只成年狗的36颗牙分为实验组和对照组,每组18颗牙.在人工制造的牙周缺损中,进行体外培养的自体牙周细胞移植结合GTR法为实验组,单纯应用GTR法为对照组.6周后切片行牙周组织学观察.结果 实验组新生牙槽骨、牙周膜组织及牙骨质的修复再生效果明显好于对照组 ( P＜ 0.05);实验组牙槽骨再生高度平均为(4.00±0.13)mm,对照组为(3.09±0.28)mm.结论 应用自体牙周膜细胞移植结合e-PTFE膜引导牙周组织再生可促进狗牙周组织的再生.
-
rhBMP-2对人牙周膜细胞骨桥蛋白表达的影响
目的 深入了解牙周膜细胞(periodontal ligament cells,PDLC)的成骨样细胞特性,以及非胶原蛋白在牙周组织矿化中的作用.方法 在体外培养条件下,观察重组人骨形成蛋白2(recombinant human bone morphogenetic protein-2,rhBMP-2)作用前后是否对矿化相关蛋白之一的骨桥蛋白(osteopontin,OPN)在人PDLC中的存在及表达情况产生影响.在小玻片上培养第5代PDLC,分为加rhBMP-2(50 μg/L)刺激的实验组和不加任何因子的空白对照组,以地高辛标记的OPN cDNA探针,采用原位杂交技术对PDLC中OPN的表达情况进行检测;同时做PBS替代探针和RNA酶预处理的方法学对照.结果 对照组、替代对照和RNA酶预处理的PDLC均显示为阴性反应, 没有显示出OPN的阳性表达信号;实验组PDLC的胞浆中可见明显的OPN阳性反应,表达信号较强.结论 rhBMP-2的刺激作用可使PDLC表达出较强的OPN阳性信号;表明在一定条件和外界因子的诱导下,PDLC具有向成骨特性方向转变的潜能,对牙周组织再生有促进效应.
-
人重组骨形成蛋白2对成牙骨质细胞DNA合成能力的影响
骨形成蛋白可以促进牙周组织的再生.其中骨形成蛋白2的诱骨活性强.为观察人重组骨形成蛋白2(recombinant human bone morphogenetic protein-2, rhBMP-2)对牛成牙骨质细胞(cementoblast, CB)DNA合成能力的影响,并与牙周膜细胞(periodontal ligament cell, PDLC)相比较,我们做了如下研究,以期为其临床应用提供实验基础.
-
两种细胞膜片对牙生物性种植体牙周再生影响的动物实验
目的 应用牙周膜细胞(periodontal ligament cells,PDLC)膜片、骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSC)膜片与自体牙根体外构建牙生物性种植体,研究构建具有新生牙周组织支持的生物性牙根的可行性.方法 拔除2只比格犬下颌两侧双尖牙制作缺牙区,将比格犬自体牙根预备成近似圆柱状.培养犬第3代PDLC和BMSC成细胞膜片,体外将PDLC和BMSC膜片单独或共同包裹于牙根表面构建自体牙根种植体,将种植体分为4组:①双膜片组(每只犬2颗),将PDLC、BMSC先后包裹于同一牙根表面;②PDLC膜片组(每只犬2颗),将PDLC单膜片包裹于牙根表面;③BMSC膜片组(每只犬2颗),将BMSC单膜片包裹于牙根表面;④无膜片组(空白对照组)(每只犬1颗),无膜片牙根.制作缺牙区手术8周后,将种植体植入自体缺牙区牙槽嵴,12周时取材制作石蜡切片行HE和Masson三色染色,观察各组切片的组织学结果.结果 PDLC膜片组种植体根面可见包括牙骨质、牙周膜及牙槽骨的牙周组织样结构,其中可见类似牙周穿通纤维样组织垂直插入根面及骨面;双膜片组种植体和BMSC膜片组种植体根面多为骨性结合;空白对照组亦未见牙周组织样结构形成.结论 PDLC膜片能促进牙生物性种植体的牙周再生,可部分再生出包括牙骨质、牙周膜和牙槽骨的复杂牙周组织.
-
釉基质蛋白对牙周膜细胞增殖和牙骨质相关蛋白基因表达的影响
目的 通过研究釉基质蛋白(enamel matrix proteins,EMP)对人牙周膜细胞增殖及牙骨质相关蛋白基因表达的影响,探讨EMP促进牙骨质形成的机制.方法 分别用质量浓度为0(对照组)、50、100、200、300 mg/L的EMP作用于培养的人牙周膜细胞(periodontal ligament cells,PDLC),在培养的第1、3、5、7天用甲基噻唑基四唑法检测细胞增殖活性；在培养的第7天用荧光实时定量反转录聚合酶链反应法检测各组细胞牙骨质附着蛋白(cementum attachment protein,CAP)和牙骨质蛋白23(cementum protein-23,CP-23)mRNA表达量.结果 EMP质量浓度在50 ～ 200 mg/L范围内可以促进人PDLC增殖,在300 mg/L时抑制细胞增殖；EMP质量浓度为100、200 mg/L时可以显著促进CAP mRNA(分别为4.661 ±0.154、5.923±0.788)和CP-23mRNA的表达(分别为1.222±0.089、3.795±0.640)与对照组(CAP:1.006±0.062,CP-23:1.012±0.163)相比差异均有统计学意义(P＜0.05),且以200 mg/L EMP的促表达效果佳.结论 EMP在一定浓度范围内能促进人PDLC增殖及CAP和CP-23基因表达,提示EMP可能通过促进细胞增殖和牙骨质相关蛋白的表达促进牙骨质的形成.
-
白藜芦醇对体外人牙周膜细胞凋亡的保护作用
制与减轻细胞氧化应激损伤、促进Bcl-2蛋白、减少Bax蛋白表达有关.
