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白血病抑制因子对人牙周膜细胞成骨向分化的影响
目的:探究白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor,LIF)对人牙周膜细胞(human periodontal ligament cells,HPDLCs)成骨分化能力的影响.方法:分离培养HPDLCs,分别为空白对照组、标准骨诱导组和加入重组人白血病抑制因子(recombinant human leukemia inhibitory factor,rhLIF)的骨诱导组.7 d后碱性磷酸酶(alkalinephos-phatase,ALP)染色及活性检测,21 d后矿化结节染色和定量分析,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测第5 d HPDLCs中成骨相关基因ALP、骨涎蛋白(bone sialoprotein,BSP)和骨钙蛋白(osteocalcin,OCN)的mRNA表达量.结果:7 d后,标准骨诱导组ALP染色呈深蓝色,LIF刺激后,染色明显变浅,活性显著下降(P<0.01).21 d后,标准组HPDLC有大量矿化结节形成,而LIF组明显减少(P<0.05),qRT-PCR结果显示标准组ALP、BSP和OCN的表达显著提高(P<0.01),而LIF刺激后,表达明显降低(P<0.01).结论:LIF可抑制HPDLC的成骨向分化.
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结缔组织生长因子增强BMP-2诱导的牙周膜细胞成骨分化
目的:探究结缔组织生长因子(Connective tissue growth factor,CTGF)对骨形成蛋白-2(Bone morphogenetic protein-2,BMP-2)诱导PDLCs(periodontal ligament cells,PDLCs)成骨分化能力的影响.方法:采用组织块法分离培养人PDLCs,分3组进行培养:空白组(普通培养基)、对照组(含100 ng/mL BMP-2)和实验组(含100 ng/mL BMP-2+50 ng/mL CTGF).CCK-8实验检测第1、3、5 d细胞增殖;碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性实验检测第5 d ALP活性;qRT-PCR检测第5 d PDLCs中成骨相关基因Runx2、ALP、BSP的mRNA表达量.结果:第3 d实验组细胞数量高于空白组和对照组,第5 d实验组细胞数量显著高于空白组和对照组(P<0.05);实验组ALP活性显著高于对照组和空白组,qRT-PCR结果显示3个成骨相关基因表达实验组均高于空白组和对照组(P<0.05).结论:CTGF可提高BMP-2诱导PDLCs成骨能力.
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PELP1在炎性牙周膜细胞中的表达及与细胞增殖和成骨分化的相关性研究
目的:探讨PELP1与牙周膜细胞骨向分化的相关性.方法:通过对正常人牙周膜细胞与炎症人牙周膜细胞的分离、培养、鉴定,采用RT-PCR、免疫细胞化学、免疫荧光化学及Western blot技术,分别从基因和蛋白水平检测PELP1在两组细胞中的表达及其在细胞增殖和骨向分化过程中的表达变化.结果:在H-hPDLCs和Ⅰ-hPDLCs中均存在PELP1 mRNA及蛋白的表达.PELP1参与调节hPDLCs的生长与增殖,在H-hPDLCs中与细胞增殖呈正相关,在Ⅰ-hPDLCs中与细胞增殖呈负相关.PELP1的表达水平在两组hPDLCs骨向分化中亦表现出不同的变化趋势,在H-hPDLCs骨向诱导分化后升高,在Ⅰ-hPDLCs骨向诱导分化后降低.结论:PELP1在炎症人牙周膜细胞中表达并参与调节细胞的生长增殖及骨向分化.
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复合聚己内酯静电纺丝膜的制备与细胞相容性的研究
目的：研究复合聚己内酯（PCL）静电纺丝膜的制备，比较3种纺丝膜的细胞相容性。方法：通过加入胶原（COL）和羟基磷灰石（HA），并按一定比例制成纯PCL膜、PCL＋5％COL膜和PCL＋5％COL＋1％HA膜。扫描电镜观察膜片形貌，接触角实验检测材料亲水性。MTT法检测牙周膜细胞在3组膜片上的增殖情况。活－死细胞染色法比较牙周膜细胞与膜片复合培养9 d时细胞存活情况。DAPI染色观察牙周膜细胞在3组纺丝膜上的分布情况。结果：扫描电镜结果显示，纯PCL膜纤维表面光滑平整，PCL＋5％COL膜纤维表面存在微小凹坑，PCL＋5％COL＋1％HA膜纤维表面有突起结节，结节表面光滑连续。 PCL＋5％COL＋1％HA膜水接触角显著小于纯PCL膜和PCL＋5％COL膜。牙周膜细胞在PCL＋5％COL＋1％HA膜上的细胞增殖和活性显著优于其他两种膜片（P＜0．01），细胞分布更密集。结论：将COL、HA与PCl混纺，可以获得在微观形貌上与纯PCL纺丝膜存在差异的纳米纤维膜。PCL＋5％COL＋1％HA膜表现出较好的细胞相容性。
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红芪多糖对人牙周膜细胞增殖及分泌IL－1β、IL－6的影响
目的：研究红芪多糖（HPS）对人牙周膜细胞（hPDLCs）增殖及分泌IL－1β、IL－6的影响。方法：采用改良组织块酶消化法培养人牙周膜细胞，经免疫组化SP法进行鉴定，MTT法检测细胞增殖情况，荧光实时定量PCR和酶联免疫法检测红芪多糖对LPS作用的hPDLCs分泌IL－1β、IL－6的影响。结果：10μg／mL HPS能够促进人牙周膜细胞增殖（P＜0．05）；10μg／mL LPS可显著刺激人牙周膜细胞分泌IL－1β、IL－6（P＜0．01），而给予10μg／mL HPS能抑制LPS刺激人牙周膜细胞分泌IL－1β、IL－6，且与LPS组具有显著性差异（P＜0．01）。结论：适宜浓度的红芪多糖能够促进体外培养的人牙周膜细胞增殖，并抑制LPS作用的人牙周膜细胞分泌IL－1β、IL－6。
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淫羊藿苷对内毒素抑制牙周膜细胞ALP表达的影响
目的:探讨淫羊藿苷对人牙周膜细胞(periodontal ligament cells,PDLC)增殖及对内毒素(Lipopolysaccharide,LPS)干扰下碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)的影响.方法:原代培养PDLC,MTT法检测不同浓度(0、10-5～10-9 mol/L)淫羊藿苷对PDLC增殖的影响；RT-PCR、对硝基苯酚法测定淫羊藿苷对LPS抑制PDLC的ALP mRNA表达和分泌的影响.结果:淫羊藿苷在一定浓度下(10-6～10-7 mol/L)可促进PDLC增殖；10 μg/mL LPS可抑制PDLC的ALP活性；加入10-6 mol/L淫羊藿苷干扰后,对LPS抑制PDLC的ALP有拮抗作用,可提高其mRNA表达和活性.结论:淫羊藿苷在一定浓度时可促进PDLC增殖；可能通过拮抗LPS抑制其ALP的活性.
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BMP-2、bFGF和Dex联合应用对犬牙牙周膜细胞成骨分化能力的影响
目的:观察骨形成蛋白(BMP-2)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和地塞米松(Dex)联合应用对犬牙周膜细胞(PDLCs)成骨分化能力的影响.方法:将第4代犬PDLCs分为5组:bFGF+Dex、BMP-2+bFGF、BMP-2+Dex、BMP-2+bFGF+Dex、对照组.检测各组碱性磷酸酶(ALP)活性,并应用RT-PCR检测各组PDLCs成骨关键基因OPN、COL-1的表达.结果:第7、14 d,各组ALP表达均较空白组显著增强(P＜0.05),其中200 μg/L BMP-2+10 μg/LbFGF+1O-8 mol/L Dex诱导组犬PDLCs的ALP活性显著高于其他各组(P＜0.05).RT-PCR显示,200 μg/L BMP-2+10 μg/L bFGF+10-8 mol/L Dex诱导组OPN、COL-1基因表达为显著.结论:3种诱导因子两两结合均能增强犬PDLCs成骨能力,但在佳浓度下3种因子联合应用诱导能力强(P＜0.05).
关键词： 牙周膜细胞 骨形成蛋白-2 碱性成纤维细胞生长因子 地塞米松 -
聚乳酸根管钉浸提液对人乳牙牙周膜细胞生物学性能的影响
目的:观察聚乳酸根管钉浸提液对人乳牙牙周膜细胞生物学性能的影响,为其临床应用奠定基础.方法:分离、鉴定人乳牙牙周膜细胞,制备聚乳酸根管钉浸提液,加入乳牙牙周膜细胞培养基中,观察其对细胞增殖和凋亡的影响.结果:分离并获得了人乳牙牙周膜细胞.聚乳酸根管钉浸提液对乳牙牙周膜细胞的增殖和凋亡与正常培养液组相比,无明显细胞毒性,不引起细胞的凋亡.结论:制备的聚乳酸根管钉具有良好的生物相容性,可用于进一步的临床研究.
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rhBMP-2微球温敏型凝胶剂的药剂学特征及对人PDLCs增殖的影响
目的:观察rhBMP-2微球温敏型凝胶的药剂学特征及对人牙周膜细胞(PDLCs)增殖的影响.方法:采用W/O/W型乳化溶剂挥发法以聚乳酸-乙醇酸共聚物(PLGA)为材料制备空白微球,通过吸附法制各rhBMP-2载药微球.以单甲基聚乙二醇-羟基乙酸共聚物(MPEG-PLGA)为材料制备凝胶,采用夹心酶联免疫吸附法测定释药速度.采用四唑盐比色法(MTT)及酶动力学法测定细胞增殖和碱性磷酸酶活性.结果:rhBMP-2微球呈规则球形,表面多孔,粒径为(19.6±2.3)μm,微球凝胶剂相转变温度为36℃左右,微球凝胶剂体外释药曲线符合Higuchi方程,28 d的累积释放度为80%.rhBMP-2微球凝胶剂能明显促进牙周膜细胞的增殖和提高ALP活性,随时间推移在第10 d时rhBMP微球凝胶促PDLCs生长的作用明显强于rhBMP溶液.结论:rhBMP-2微球温敏型凝胶剂具有明显的缓释特征,与溶液剂相比促进PDLCs增殖作用更持久.
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小鼠重组OSF-2对人牙周膜细胞附着和伸展的影响
目的:观察小鼠重组牙周膜细胞特异性因子2(OSF-2)对牙周膜细胞附着和伸展的作用.方法:采用固相结合分析实验及四唑盐比色等细胞生物学技术,观察牙周膜细胞在OSF-2基质上的附着能力和伸展率.结果:牙周膜细胞在OSF-2基质上附着和伸展良好,当浓度在20 μg/ml以上时,作用尤其显著(P＜0.01),与在FN基质的生长结果相似.结论:小鼠重组OSF-2可有效促进牙周膜细胞的附着和伸展.
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持续静压力对人牙周膜细胞OPG及ODFmRNA表达的影响
目的:研究持续静压力(continuously compressive pressure, CCP)作用下人牙周膜细胞(human periodontal ligament cells ,HPDLCs) 护骨素(osteoprogerin,OPG)和破骨细胞分化因子(osteoclast differentiation factor,ODF)的表达,探讨其在正畸骨改建中的作用机制.方法:组织块酶消化法原代培养HPDLCs,建立压力模型,分别对细胞施以1 g/cm2、2 g/cm2、3 g/cm2顶-底轴向压力0.5 h、1.5 h、6 h、12 h、24 h和48 h,利用逆转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction , RT-PCR)法检测OPG及ODF 信使RNA(mRNA)的表达.结果:随着CCP作用时间的增加,HPDLCs ODF mRNA表达增强(P<0.01);OPG mRNA 在加力后期明显升高(P<0.05).随力值增加,ODF及OPG mRNA表达均增强,力值为2 g/cm2时,改变明显(P<0.05).结论:CCP可上调HPDLCsOPG及ODF mRNA 表达.而OPG mRNA 表达升高则明显滞后.
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PcDNA3.1(+)-sTNFRⅠ真核表达载体在牙周膜细胞中的表达研究
目的:构建真核表达质粒PcDNA3.1(+)-sTNFRⅠ,并转染人牙周膜细胞观察是否有目的产物的表达,研究其是否具有生物学活性,为进一步研究其在牙周治疗中的作用提供实验基础.方法:RT-PCR方法筛选目的基因,并构建质粒;ELISA方法检测牙周膜细胞转染PcDNA3.1(+)-sTNFRⅠ后培养上清中目的基因的表达;MTT检测目的产物是否在牙周膜细胞中有抑制TNF-α的作用.结果:成功重组构建了质粒PcDNA3.1(+)-sTNFRⅠ,转染牙周膜细胞后,培养上清中目的产物sTNFRⅠ表达量实验组显著高于对照组, MTT检测表明表达产物具有生物学活性.结论:质粒PcDNA3.1(+)-sTNFRⅠ可以在牙周膜细胞中高效表达,并且可以抑制肿瘤坏死因子(TNF-α)的活性.为进一步研究TNFR在牙周病中的致病作用提供依据.
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bFGF和rhBMP对牙周膜细胞胶原酶水平的影响
目的:研究bFGF、rhBMP分别及联合作用对人牙周膜细胞(periodontal ligament cells,PDLCs)胶原酶Ⅱ、Ⅳ(CollagenaseⅡ、Ⅳ)水平的影响并探讨其内在相关性;优选佳显效浓度.方法:选取因正畸拔除的第一前磨牙,刮取根中1/3牙周膜组织作为标本,采用牙周膜细胞体外培养技术,免疫组化方法和图像分析技术动态观察bFGF、rhBMP梯度含量分别及联合作用对人PDLCs胶原酶Ⅱ、Ⅳ水平的影响.结果:①免疫组化定量分析, bFGF(10)浓度组能显著抑制PDLCs胶原酶Ⅳ的表达(P<0.01);rhBMP(200)浓度组能诱导PDLCs胶原酶Ⅳ的表达(P<0.05);bFGF(10)、rhBMP(25)浓度组均能显著诱导PDLCs胶原酶Ⅱ的表达(P<0.01);动态观察bFGF(10)+rhBMP(200)连续7 d对胶原酶Ⅱ、Ⅳ水平的抑制效应呈现连续的递增趋势(P<0.05).②rhBMP与人PDLCs胶原酶Ⅱ水平呈显著负相关性(P<0.01);rhBMP与人PDLCs胶原酶Ⅳ水平呈显著正相关性(P<0.01).结论:bFGF、rhBMP联合作用能更显著地抑制人PDLCs胶原酶Ⅱ、Ⅳ的表达,两者具有协同作用;其中bFGF(10)+rhBMP(200)为佳显效浓度.
关键词： 碱性成纤维细胞生长因子 重组人骨形成蛋白 牙周膜细胞 胶原酶 -
周期性牵张力对人牙周膜细胞MMP-3及TIMP-1表达的影响
目的:探讨周期性牵张力对人牙周膜细胞MMP-3及TIMP-1蛋白表达的影响,进一步阐明正畸牙牙周组织改建过程中ECM代谢调节的分子机制.方法:通过体外细胞培养加载系统,选择频率为6周/min,弹性基底膜发生12%形变率的周期性牵张力,利用免疫组化及夹心ELISA检测技术,观察HPDLC表达MMP-3及TIMP-1的相对强度.结果:HPDLC在体外表达MMP-3及TIMP-1.加载3 d后,MMP-3表达明显增强,与对照组相比具有显著性差异.而TIMP-1对机械力无应答.结论:在一定条件下,周期性牵张力可显著影响HPDLC MMP-3蛋白的表达.为机械力作用下MMP-3参与牙周组织ECM代谢提供了直接证据.
关键词： 细胞外基质 基质金属蛋白酶-3 金属蛋白酶组织抑制因子-1 牙周膜细胞 机械张力 -
大黄抑制内毒素对牙周膜细胞作用的研究
目的:探讨大黄蒽醌类抑制大肠杆菌内毒素(escherichia coli lipopolysaccharide E-LPS)对人牙周膜细胞(periodontal ligament cells, PDLC)的作用.方法:采用原代培养人PDLC技术和四唑盐(MTT)显色分光光度法.结果:20,50 μg/ml大黄素明显抑制E-LPS对人PDLC的影响,与对照组相比有显著性差异.结论:大黄素能阻断内毒素对人PDLC的毒性.提示应用大黄素治疗牙周炎在临床上可行.
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老年人牙周膜细胞碱性磷酸酶活性研究
目的观察老年人牙周膜细胞碱性磷酸酶活性的变化.方法利用原代培养的老年人牙周膜细胞,测定其碱性磷酸酶活性,并与青年人进行比较.结果老年组牙周膜细胞碱性磷酸酶活性明显低于青年组( P< 0.001);且对小牛血清刺激增殖的反应也明显低于青年组( P< 0.001).结论由于衰老的影响,老年人牙周膜细胞成骨活性降低,对外源性促细胞生长因素的敏感性降低,提示了老年人牙周膜细胞再生能力降低.
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IL-1β对牙龈成纤维细胞和牙周膜细胞上ICAM-1表达调节的免疫组化研究
目的: 了解牙龈成纤维细胞(human gingival fibroblast,HGF)、牙周膜细胞(periodontal ligament fibroblast,PDLF)上细胞间粘附分子1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)的表达以及白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)作用后ICAM-1的表达.方法: 取正畸拔牙,体外培养牙龈成纤维细胞和牙周膜细胞,检测其未受和受IL-1β作用后ICAM-1的表达情况,图像分析结果.结果: 正常牙龈成纤维细胞、牙周膜细胞上ICAM-1表达阴性或弱阳性,IL-1β作用后,ICAM-1表达强阳性,和对照组相比,有显著性差异(P＜0.01).结论: 牙龈成纤维细胞、牙周膜细胞受IL-1β作用后ICAM-1的表达增强,提示ICAM-1参与牙周炎的病理过程.
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持续静压力对人牙周膜细胞RANKL mRNA表达的影响
目的:研究在持续静压力(continuously compressive pressure,CCP)作用下人牙周膜细胞(human periodontal ligament cells,HPDLCs)核因子KB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor kappa B ligand,RANKL)的表达变化,探讨其在正畸性骨改建中的作用机制.方法:用组织块酶消化法原代培养HPDLCs,建立压力模型,分别对细胞施以1,2,3 g/cm2顶-底轴向压力0.5,1.5,6,12,24和48h,利用逆转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)法检测RANKL mRNA的表达变化.结果:随着CCP作用时间的增加,HPDLCs RANKL表达增强(P＜0.01);随力值增加,RANKL mRNA表达增强,力值为2 g/cm2时,改变明显(P＜0.05).结论:CCP可上调HPDLCs RANKLmRNA表达.
关键词： 压力 牙周膜细胞 细胞核因子KB受体活化因子配体 逆转录聚合酶链反应 -
全反式维甲酸对人牙周膜细胞向成骨分化的影响
目的 检测全反式维甲酸(AT-RA)对人牙周膜细胞(hPDLCs)向成骨分化的影响.方法 原代培养hPDLCs,用噻唑盐(MTT)方法检测AT-RA作用于细胞hPDLCs及对其增殖的影响,用酶动力方法检测对其碱性磷酸酶(ALP)活性的影响,用茜素红染色方法检测对其形成钙盐沉积的影响.结果 AT-RA不影响hPDLCs的增殖活性,但能增强hPDLCs的ALP活性,并明显促进钙盐沉积.结论 AT-RA可以促进hPDLCs向成骨分化.
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白细胞介素-1β对人牙周膜细胞生物活性的影响
目的探讨白细胞介素-1β(IL-1β)对体外培养人牙周膜(PDL)细胞生物活性的影响.方法体外培养人PDL细胞,分别与0.1、0.5、1、5和10ng/ml的IL-1β作用3d,或在10ng/ml的IL-1β作用1、2、3、4、5d后,用噻唑盐(MTT)法检测PDL细胞增殖的情况;在10ng/ml的IL-1β作用4d后用ELISA法检测纤维连接蛋白(Fn)的含量,用酶动力学方法检测碱性磷酸酶(ALP)活性.结果 IL-1β以浓度依赖的方式抑制PDL细胞的增殖,小抑制浓度为1ng/nl(P＜0.05).在IL-1β作用下,PDL细胞合成Fn的水平明显下降(P＜0.001),并强烈抑制PDL细胞的ALP活性(P＜0.001).结论 IL-1β可能通过抑制PDL细胞的增殖以及抑制ALP活性和Fn的合成,影响牙周病的发生和修复.
