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P物质-聚乳酸-聚乙醇酸共聚物纳米缓释微粒的制备及其对人牙周膜细胞的作用的研究
目的 制备P物质-聚乳酸-聚乙醇酸共聚物(PLGA)纳米缓释微粒,考察纳米粒一般性质、P物质生物活性保存情况,以及它对人牙周膜细胞(PDLCs)的作用.方法 以PLGA为载体,运用复乳-溶剂挥发法制备P物质缓释纳米粒,将其加入PDLCs的培养液中,运用四甲基偶氮吐盐微量反应比色法(MTT)测定细胞增殖情况.实验分为P物质组、缓释纳米粒组以及对照组.结果 P物质缓释纳米微粒球体均匀度好,平均粒径(114.56±21.42) nm.培养第1天时,各组吸光度(A)值差异均无显著性;第3天时,P物质组A值大于另外两组,5 d后缓释纳米粒组A值高于另外两组.结论 建立了较好的P物质PLGA纳米缓释微粒粉制备工艺,纳米粒中P物质生物活性保存良好,能持续释放P物质,较长时间促进成纤维细胞增殖.
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1,25-(OH)2D3作用下人牙周膜细胞破骨细胞分化因子及破骨细胞发生抑制因子的表达及意义
目的 观察1,25-二羟基维生素D3 [1,25-(OH)2D3]对体外人牙周膜细胞(HPDLC)破骨细胞分化因子(ODF)mRNA及破骨细胞发生抑制因子(OCIF)mRNA表达的影响,探讨正畸牙周组织改建的分子机制.方法 以不同浓度的1,25-(OH)2D3(0、1×10-10、1×10-8、1×10-6 mol/L)作用于体外培养的人牙周膜细胞,利用原位杂交染色及RT-PCR检测技术,检测不同浓度的1,25-(OH)2D3作用于体外培养人牙周膜细胞ODF、OCIF mRNA表达的强度变化.结果 随1,25-(OH)2D3浓度的升高,人牙周膜细胞ODF mRNA的表达升高,而OCIF mRNA的表达降低.结论 1,25-(OH)2D3在体外可影响人牙周膜细胞ODF mRNA和OCIF mRNA的表达,从而通过调节ODF和OCIF相对含量的变化,影响牙周组织改建过程.
关键词： 破骨细胞分化因子 破骨细胞发生抑制因子 牙周膜细胞 1 25-二羟基维生素D3 -
转化生长因子-β1和甲壳胺联合作用对老年人牙周膜细胞生长分化功能的影响
目的 探讨转化生长因子(TGF)-βl和甲壳胺(chitosan,Chi)联合作用对老年人牙周膜细胞增殖和碱性磷酸酶(ALP)活性的影响.方法 用原代培养的老年人牙周膜细胞,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法和酶动力学方法检测Chi 0.1g/L、TGF-β1 1 μg/L和Chi(0.1g/L)加TGF-β1(1μg/L)对老年人牙周膜细胞增殖和ALP的作用.结果 ①与对照组比较,3 d和5 d时Chi加TGF-β1组和TGF-β1组及7d时Chi加TGF-β1组和Chi组均能明显增强老年人牙周膜细胞的增殖能力(P＜0.05,P＜0.01),Chi加TGF-β1组的促增殖能力明显强于Chi组和TGF-β1组;②3个实验组的细胞裂解液和Chi加TGF-β1组和TGF-β1组细胞培养液中牙周膜细胞ALP活性均高于对照组(P＜0.05,P＜0.01),以Chi加TGF-β1组高(P＜0.01).结论 Chi和TGF-β1单独都能增加老年人牙周膜细胞增殖的能力和ALP活性,Chi和TGF-β1联合使用增强老年人牙周膜细胞增殖和ALP活性的能力强于单独使用Chi和TGF-β1.
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茶多酚抑制过氧化氢诱导的牙周膜细胞损伤
目的：探讨茶多酚（Tea polyphenols，TP）对过氧化氢（H2O2）诱导的牙周膜细胞损伤的保护作用及其机制。方法构建H2 O2诱导牙周细胞损伤模型。细胞随机分为正常对照组、H2 O2组、H2 O2＋TP组。 MTT检测细胞活力，流式细胞仪检测细胞凋亡。试剂盒检测各组细胞中丙二醛（ MDA）含量和超氧化物歧化酶（ SOD）活性。 Western blot 检测细胞中 caspase?3、caspase?12、Bcl?2和Bax的表达。 Elisa检测细胞中IL?1β和IL?6的表达情况。结果 H2 O2处理会降低牙周膜细胞的活性，并且浓度越高，细胞活性降低越明显。茶多酚可抑制在H2 O2介导下牙周膜细胞的活性降低、凋亡升高，MDA含量增加，SOD活性降低，caspase?3、caspase?12和Bax的表达升高，Bcl?2的表达降低，以及IL?1β和IL?6的表达增高。结论茶多酚对H2 O2诱导的牙周膜细胞损伤有明显的保护作用，其机制与减轻细胞氧化应激损伤、抑制线粒体凋亡通路和降低细胞炎性水平有关。
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红景天苷对LP S刺激人牙周膜细胞增殖和分泌表达的影响
目的：研究红景天苷（ salidroside， SAL）对大肠杆菌脂多糖（ lipopolysaccharide，LPS）刺激后体外培养人牙周膜细胞（human periodontal ligament cells，hPDLCs）的增殖及对分泌表达 Toll 样受体（Toll?like receptor 4，TLR 4）、肿瘤坏死因子?α（ tumor necrosis factor?α， TNF?α）、白介素?1β（ interleukin?1β， IL?1β）、白细胞介素?6（ interleukin?6， IL?6）、骨保护素（ osteoprotegerin，OPG）及核因子?κB受体活化因子配体（ receptor activator of NF?κB ligand，RANKL）的影响，为红景天苷在牙周炎治疗方面提供初步的实验依据。方法组织块法原代培养正常hPDLCs；以2 mg／L LPS刺激第4代细胞，加入不同浓度的红景天苷作用12、24、48 h；采用MTT方法检测细胞的增殖；采用Western blot、ELISA、qRT?PCR等方法检侧TLR?4、TNF?α、IL?1β、IL?6、OPG及RANKL的表达水平，并进行统计学分析。结果 MTT结果显示低浓度的红景天苷（≤10μmol／L）均能促进细胞增殖，并存在浓度依赖性，其中0．5μmol／L对hPDLCs增殖作用明显（P＜0．05），高浓度的红景天苷（＞10μmol／L）不能促进牙周膜细胞增殖；Western blot、ELISA及qRT?PCR结果显示：0．5μmol／L红景天苷可使 LPS刺激的 hPDLCs的 TLR4、TNF?α、IL?1β、IL?6及RANK表达水平随时间延长而逐渐降低，其中48 h降低的为明显，存在显著性差异（ P＜0．05）；另外， LPS刺激对OPG的表达几乎没有影响，而0．5μmol／L红景天苷作用可以显著上调OPG的表达水平。结论红景天苷可减轻LPS刺激后hPDLCs的细胞损伤，其机制可能通过调节与TLR4相关信号通路，降低炎症因子TNF?α、IL?1β、IL?6及与骨吸收相关因子RANKL、OPG的表达，从而抑制炎症反应和骨吸收。
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p38信号通路在牙周膜细胞成骨分化中的调控作用
目的：研究p38信号通路在人牙周膜细胞成骨分化中的调控作用。方法体外培养人牙周膜细胞，取第三代细胞进行成骨诱导培养，实验组加入p38信号通路抑制剂（SB203580），诱导培养4周后通过定量PCR 和茜素红染色检测其成骨能力。结果成骨诱导可促进牙周膜细胞中p38的磷酸化（p － p38）。抑制p38的磷酸化可降低成骨标记物Runx 相关基因（Runx2）、碱性磷酸酶（ALP）、骨桥蛋白（OPN）和骨钙素（OCN）的表达，减少钙结节形成。结论 p38信号通路在体外培养的牙周膜细胞成骨分化中具有重要的调控作用。
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双黄补对牙周病中牙周膜细胞的增殖分化的调控
目的:探讨中药双黄补对体外培养的人牙周膜细胞(PDLC)增殖和分化的影响.方法:通过体外培养人PDLC,应用双黄补提取液作为辅助因子分成8组:A.黄连;B.黄芩;C.骨碎补;D.黄连加黄岑;E.黄连加骨碎补;F.黄岑加骨碎补;G.黄连、黄芩、骨碎补;H.对照组.采用MTT比色法测定细胞增殖情况,羟脯氨酸法测定胶原蛋白比值.结果:各组药物提取液均有促进PDLC增殖和提高胶原蛋白比值的作用,与对照组比较,差异有显著性,其中以双黄补组的效果明显.不同孵育时间培养中以第5天的作用强.结论:双黄补水提液可明显促进人PDLC增殖,明显提高胶原蛋白在总蛋白中的比值,可作为PDLC增殖的理想的辅助因子.
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抗菌药物不同给药时间对行手工刮治重度慢性牙周炎短期疗效与牙周膜细胞增生的影响
目的:探讨抗菌药物不同给药时间对行手工刮治重度慢性牙周炎短期疗效与牙周膜细胞增生的影响.方法:选择2015年1月至12月在我院接受治疗的90例重度慢性牙周炎患者作为本研究对象,并将其随机分成A、B和C组,每组各30例.A组患者在首次接受龈下刮治治疗开始之前的0.5～1 h之内给予甲硝唑片联合阿莫西林胶囊口服治疗,B组患者在刮治治疗后给予甲硝唑片联合阿莫西林胶囊口服治疗,C组患者给予口服安慰剂.分别检查并比较3组患者治疗前和治疗后2个月的平均探诊深度(PD)、平均邻面探诊深度(pPD)、探诊出血位点的百分数(BOP％)、探诊深度大于5 mm位点百分数(PD＞5mm％)、邻面探诊深度大于5 mm位点百分数(pPD＞5mm％)及平均出血指数(BI).结果:各组患者治疗后PD、pPD、BOP％、PD＞5mm％、pPD＞5mm％及BI改善均十分明显,差异有统计学意义(P＜0.05);A组患者治疗后PD和pPD显著低于B组和C组,差异有统计学意义(P＜0.05);B组患者PD和pPD显著低于C组,但差异无统计学意义(P＞0.05);此外,3组患者治疗后BOP％、PD＞5mm％、pPD＞5mm％及BI等指标之间比较,差异无统计学意义(F=3.015、2.327、2.983、1.861,P＞0.05);A组患者牙周膜细胞增殖情况明显优于B组和C组,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论:重度慢性牙周炎患者刮治同期给予抗菌药物治疗,其临床短期疗效明显优于刮治后再行给药治疗和单纯行刮治治疗.
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影响牙周膜细胞生物学功能的相关因素
牙周组织的再生研究已成为牙周病研究的重要方向,而牙周膜细胞各项生物学功能的发挥是牙周组织再生的关键.作者对增龄、生长因子、细胞因子及细菌毒素等对牙周膜细胞生物学功能的影响作简要综述.
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老年人牙周膜细胞附着于纳米-羟基磷灰石上的形态学观察
目的:老年人牙周膜细胞的再生能力相对较低,选择合适的支架材料很重要.文中观察接种在三维多孔纳米-羟基磷灰石支架材料上的老年人牙周膜细胞组织形态学表现. 方法:将原代培养的老年人牙周膜细胞接种于三维多孔纳米-羟基磷灰石上,在培养15d后,采用扫描电子显微镜观察细胞的生长情况,并与青年人牙周膜细胞进行比较. 结果:老年人牙周膜细胞接种到支架材料上15d后表现为星形或多角形,有良好伸展性和对支架材料的黏附性,一定量的钙结节生成,但产生的钙结节量较青年人牙周膜细胞少. 结论:老年人牙周膜细胞可以在三维多孔纳米-羟基磷灰石支架材料上良好生长.三维多孔纳米-羟基磷灰石支架材料可以作为老年人牙周组织工程治疗中的支架材料.
关键词： 老年人 牙周膜细胞 三维多孔纳米-羟基磷灰石支架材料 牙周组织工程 -
老年人牙周膜细胞Fas抗原和诱导型一氧化氮合酶表达的研究
目的:观察老年人牙周膜细胞Fas/apo-1(CD95)抗原和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达情况. 方法:采用免疫组化方法,对2例培养的老年人牙周膜细胞和3例培养的青年人牙周膜细胞的Fas/apo-1(CD95)抗原和iNOS的表达进行比较研究. 结果:老年组牙周膜细胞Fas/apo-1(CD95)抗原胞核及胞质强阳性表达,且强于青年组;老年组牙周膜细胞胞核及胞质iNOS阳性表达,而青年组为阴性表达. 结论:老年人牙周膜细胞对细胞程序性死亡的敏感性增强.
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老年人牙周膜细胞生长增殖的比较研究
目的:观察老年人牙周膜细胞生长增殖能力的变化情况.方法:采用牙周膜细胞原代培养,并用四唑盐(MTT)比色法检测老年人牙周膜细胞生长增殖能力的变化,并与青年人牙周膜细胞增殖情况比较.结果:①老年组牙周膜细胞生长极其缓慢,细胞呈现衰老状态,与青年组牙周膜细胞表现比明显不同.②老年组牙周膜细胞在1、3、5、7、9天时测得的光密度值(A570)均明显低于青年组牙周膜细胞的As7o,两组比较差异显著(P＜0.001). 结论:由于衰老的影响,老年人牙周膜细胞生长增殖功能明显降低,与青年人牙周膜细胞区别较大,提示衰老造成的老年人牙周膜细胞生长增殖功能降低,可能是老年人牙周组织疾病发病率高、破坏程度重、修复再生功能降低的重要原因.
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纳米羟基磷灰石及其复合材料对牙周膜细胞的影响
应用MTT比色法对纳米羟基磷灰石、纳米羟基磷灰石天然复合材料、纳米羟基磷灰石半合成复合材料、纳米羟基磷灰石全合成复合材料及致密羟基磷灰石对牙周膜细胞生长情况进行比较分析。结果对不同材料对于细胞增殖活性OD450值比较结果显示，第1~4组与对照组相比，各组在细胞培养后OD值第2天、第3天、第4天差异有统计学意义(P<0.05)，第1~4组与5组相比，差异有统计学意义(P<0.05)。1组、2组、3组、4组各组之间OD值比较显示差异无统计学意义(P>0.05)。纳米羟基磷灰石及其复合材料对促进牙周组织再生有一定作用。
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狗牙周膜细胞与壳聚糖-磷酸三钙三维培养的实验研究
目的:建立狗牙周膜细胞(PDLCs)体外三维立体培养模型,探讨以狗PDLCs为种子细胞,以壳聚糖-磷酸三钙复合体为支架材料应用于牙周组织工程的可行性.方法:冷冻干燥法制备壳聚糖-磷酸三钙多孔复合支架材料,组织块法培养狗牙周膜细胞,取第4代细胞传代扩增后接种到三维支架上,体外继续培养.免疫组化方法鉴定细胞起源;MTT法检测支架对狗PDLCs增殖的影响;取培养3、6d的细胞-支架复合物的标本,用倒置相差显微镜和扫描电镜观察细胞的形态及在支架上的粘附、生长情况.结果:免疫组化显示,狗PDLCs抗波形丝蛋白阳性,抗角蛋白阴性,证实为中胚层来源.MTT法检测结果显示,支架材料对狗PDLCs的生长、增殖与空白对照组相比差异均无统计学意义(P＞0.05).扫描电镜示壳聚糖-磷酸三钙复合体具有良好的多孔网状结构,狗PDLCs在支架上贴附牢固,伸展充分,增殖旺盛并分泌大量的细胞外基质.结论:壳聚糖-磷酸三钙具有良好的粘附性和细胞相容性,狗PDLCs与之复合培养生长良好,表明以自体PDLCs为种子细胞、以壳聚糖-磷酸三钙为支架材料进行的牙周组织工程是可行的.
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人牙周膜细胞在透明质酸钠/纳米羟磷灰石支架上的黏附与生长
目的 研究人牙周膜细胞(PDLC)在透明质酸(HA)/纳米羟磷灰石(nHAP)支架上的黏附、生长情况,以初步探讨HA/nHAP架应用于牙周组织工程的可行性.方法 将体外培养的人PDLC分为HA/nHAP组、HA组、对照组,分别接种于加入了HA/nHAP支架、HA支架的24孔板及普通24孔板中,分别于1、2、3、4、5d采用MTT法对接种的人PDLC进行光密度值(OD值)检测,倒置相差显微镜及免疫荧光染色后激光扫描共聚焦显微镜下观察细胞形态.结果 第1、2、3天HA/nHAP组、HA组的OD值均高于对照组(P＜0.05)；HA/nHAP组高于HA组(P＜0.05).倒置相差显微镜下可见到各组孔板底部生长良好的梭形纤维细胞,核仁清楚可见,胞质均匀；HA/nHAP组支架材料完整,HA组支架材料大部分溶解.免疫荧光染色后激光扫描共聚焦显微镜下可见各组细胞核呈椭圆形,核完整,染色质均匀,未见核固缩和碎裂及异常核分裂.结论 相对于HA支架,透明质酸钠支架有利于人牙周膜细胞的黏附生长,相对于透明质酸钠支架,HA/nHAP支架更有利于人牙周膜细胞的黏附生长,该材料有可能成为牙周组织工程的理想支架材料.
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牙周膜细胞膜片构建过程中L-抗坏血酸-2-磷酸酯的应用及观察
目的 探讨牙周膜细胞(PDLCs)膜片的构建方法,并观察膜片聚合体的组织学特征.方法 通过组织块培养法获得PDLCs,经体外鉴定扩增后,用添加50μg/mL的L-抗坏血酸-2-磷酸酯的DMEM培养基连续培养2周,构建PDLCs膜片,将构建的PDLCs膜片在该培养条件下自行聚合获得膜片聚合体,HE染色进行形态学观察.结果 PDLCs被成功分离、培养、鉴定.在加入L-抗坏血酸-2-磷酸酯的DMEM培养基中连续培养2周后获得白色膜状PDLCs膜片.倒置显微镜下观察显示,细胞呈复层生长,且呈典型的纺锤状.PDLCs膜片在该培养条件孵育7d,皱缩形成约米粒大小的球样.经HE染色显示,细胞密度较大,且细胞与细胞之间存在着大量细胞外基质.结论 L-抗坏血酸-2-磷酸酯可以通过增加细胞外基质而促进PDLCs膜片的形成,为利用PDLCs膜片修复牙周组织及牙周缺损提供了技术保证.
关键词： 牙周膜细胞 细胞膜片 L-抗坏血酸-2-磷酸酯 -
Emdogain对人牙周膜细胞增殖、分化及合成Ⅰ型胶原能力的影响
目的:观察Emdogain对人牙周膜细胞(HPLC)增殖、分化及合成Ⅰ型胶原能力的影响,进一步探讨Emdogain促进牙周组织再生的机制.方法:体外培养人牙周膜细胞,在培养液中加入不同浓度的Emdogain,然后用MTT法、碱性磷酸酶试剂盒、羟脯氨酸试剂盒检测人牙周膜细胞的增殖、分化及合成Ⅰ型胶原能力.结果:EMD在100、50、25 mg/L各浓度时对HPLC细胞有明显的促增殖作用,且50 mg/L作用强;25、50、100 mg/L浓度可增加HPLC细胞的ALP活性,且以50 mg/L浓度作用效果佳,而200 mg/L浓度组在实验期间不能提高HPLC细胞的ALP的活性;25、50、100、200 mg/L 4个浓度梯度EMD可增强HPLC形成Ⅰ型胶原的能力.结论:Emdogain对人牙周膜细胞的生物学活性有明显的促进作用,提示这可能是Emdogain促进牙周组织再生的重要机制.
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橙皮素对人牙周膜细胞碱性磷酸酶活性的影响
目的 体外培养人牙周膜细胞,观察一定浓度橙皮素对牙周膜细胞碱性磷酸酶活性的影响,探讨橙皮素对牙周膜细胞成骨分化的影响,为临床治疗提供实验依据.方法 体外培养人牙周膜细胞,并进行组织来源鉴定,取第3代细胞进行实验.实验分为6组,分别为:100 μmol/L、10 mol/L、1μmol/L、0.1 μmol/L、0.01 μmol/L橙皮素组和空白组.加药72 h后,碱性磷酸酶检测试剂盒检测人牙周膜细胞的碱性磷酸酶的活性.结果 5个不同浓度的橙皮素均可促进牙周膜细胞ALP活性的增加,与空白组比较差异有统计学意义(P＜0.05),100 μmol浓度橙皮素对应OD值较其他各实验组低,其余各实验组间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 一定浓度的橙皮素可以促进牙周膜细胞ALP活性,为以后橙皮素应用于牙周疾病的治疗提供实验依据.
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辛伐他汀对体外培养人牙周膜细胞Ⅰ型胶原合成的影响
目的:体外观察一定浓度的辛伐他汀对人牙周膜细胞合成Ⅰ型胶原能力的影响,探讨辛伐他汀对牙周组织再生的影响.方法:体外培养人牙周膜细胞,进行鉴定后,取第5代细胞用于实验.实验分0.125、0.250、0.500、1.000 μmol/L辛伐他汀组和对照组,加药3 d后,用羟脯氨酸试剂盒检测细胞合成Ⅰ型胶原能力.结果:4个辛伐他汀实验组均可促进人牙周膜细胞合成Ⅰ型胶原,与对照组比较,差异均有统计学意义(P均<0.05),但实验组间差异无统计学意义(P>0.05).结论:辛伐他汀可促进人牙周膜细胞合成Ⅰ型胶原.
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PTEN对H2O2诱导的牙周膜细胞增殖凋亡的影响
目的:探讨第10号染色体同源缺失性磷酸酶=张力蛋白(PTEN)对过氧化氢(H2O2)诱导的牙周膜细胞增殖凋亡的影响.方法:分离培养人牙周膜细胞,转染PTEN小干扰RNA、小干扰RNA阴性对照,H2O2处理,Western blot检测PTEN表达水平.结果:人牙周膜细胞转染PTEN小干扰RNA后的细胞中PTEN表达受到抑制.结论:干扰PTEN表达能够拮抗H2O2诱导的人牙周膜细胞凋亡及人牙周膜细胞增殖抑制作用.
关键词： 牙周膜细胞 增殖 凋亡 第10号染色体同源缺失性磷酸酶=张力蛋白 过氧化氢
