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离体培养海马神经干细胞中自噬现象的观察
目的:观察离体培养海马神经干细胞中自噬现象.方法:分离新生1d大鼠海马组织,培养、扩增和传代,鉴定后取培养7d的细胞,用RT-PCR法检测自噬特异性蛋白LC3和Bclin1的mRNA表达,Western Blot检测LC3和Bclin1的蛋白表达,透射电子显微镜观察神经干细胞中的自噬体的超微结构.结果:分离培养的神经干细胞呈Nestin免疫荧光阳性,且能分化为β-Ⅲtubulin+的神经细胞和GFAP+的胶质细胞;RT-PCR和Western Blot分别检测出神经干细胞有LC3、Bclin1的mRNA和蛋白表达;电镜下观察到神经干细胞胞质内有自噬体和自噬溶酶体.结论:正常离体培养的大鼠海马神经干细胞存在自噬现象,提示自噬可能对神经干细胞正常生理功能的维持有重要作用.
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Beclin1和LC3在腮腺多形性腺瘤及癌在多形性腺瘤中的表达和意义
目的:探讨自噬相关基因Beclin1和微管相关蛋白LC3表达和腮腺肿瘤之间的关系.方法:用免疫组化方法检测20例正常腮腺组织、37例腮腺多形性腺瘤、41例癌在多形性腺瘤中Beclin1和LC3的表达,并结合临床病理因素进行分析.结果:Bcclin1在正常腮腺组织、腮腺多形性腺瘤、癌在多形性腺瘤中的阳性率分别为100%、92%、63%;LC3在这3种组织的阳性表达率分别为100%、86%、56%.淋巴结转移及TNM分期与Beclin1的表达间有显著性关系(P<0.05),不同侵袭性、有无淋巴结转移与LC3的表达间有显著性关系(P<0.05).结论:Beclinl和LC3在腮腺多形性腺瘤及癌在多形性腺瘤中表达下调,自噬功能改变可能在腮腺肿瘤形成中具有一定作用.
关键词： 自噬 Beclin1 微管相关蛋白1轻链3 -
FoxO1及自噬相关基因Beclin1和MAPLC3在胃癌组织的表达及意义
目的 探讨叉头转录因子O亚家族1(FoxO1)及自噬相关基因Beclin1和微管相关蛋白轻链3(MAPLC3)在胃癌组织的表达及意义.方法 收集本院2015年1月至2016年6月收治的82例手术切除的胃癌组织(胃癌组)及67例癌旁正常组织(对照组),采用荧光实时定量PCR(qPCR)法检测FoxO1、Beclin1及MAPLC3水平,比较组间的水平变化并分析胃癌组中FoxO1、Beclin1及MAPLC3表达变化的相关性,分析组织FoxO1、Beclin1及MAPLC3水平变化与胃癌临床病理参数[性别、年龄、TNM分期、分化程度、部位、淋巴结转移及癌胚抗原(CEA)水平]的关系.结果 qPCR检测结果显示,胃癌组的FoxO1、Beclin1及MAPLC3水平依次为(0.489±0.032)、(0.148±0.012)和(0.581±0.038),均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);胃癌组的FoxO1水平与Beclin1水平呈正相关(r=0.270,P=0.014),Beclin1水平与MAPLC3水平呈正相关(r=0.351,P=0.001),但FoxO1水平与MAPLC3水平无关(r=0.208,P=0.061);FoxO1表达与TNM分期、分化程度及淋巴结转移均有关,Beclin1表达与TNM分期、淋巴结转移及CEA水平均有关,且MAPLC3表达与TNM分期、分化程度及CEA水平均有关.结论 FoxO1、Beclin1及MAPLC3在胃癌组织中表达降低,且均与TNM分期有关,对胃癌诊断及病情评估有一定价值.
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自噬、自噬相关基因Beclin1与肿瘤关系的研究
自噬性细胞死亡是坏死、凋亡以外的另一种细胞死亡形式,它是不同于凋亡且不依赖于切冬酶的程序性细胞死亡.研究发现,自噬活性的改变,自噬性细胞死亡与恶性肿瘤的发生、发展有关.Beclin1参与了自噬,自噬性细胞死亡的调节,是自噬相关基因.现将自噬、自噬与肿瘤的发生、发展及自噬相关基因Beclin1的研究新进展做一综述.
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Beclin 1和MAP1-LC3在家兔激素性股骨头缺血坏死中表达的实验研究
目的 观察家兔激素性股骨头缺血坏死模型中自噬相关基因Beclin 1和微管相关蛋白1轻链3(microtu-bule-associated protein 1 light chain 3,MAP1-LC3)的表达情况,探讨自噬在激素性股骨头缺血坏死中的作用.方法成年日本大耳白兔40只,随机分为实验组(n=28)与对照组(n=12).实验组肌肉注射甲基强的松龙7.5 mg/kg,2次/周,共8周;对照组肌肉注射生理盐水2 mL/只,2次/周,共8周.8周后处死家兔,取双侧股骨头.左侧股骨头制成普通病理切片后进行HE染色,用免疫组化法检测Beclin 1和MAP1-LC3的表达;右侧股骨头迅速置于液氮中保存,蛋白提取后,采用Western blot方法检测股骨头中Beclin 1及MAP1-LC3蛋白的表达.结果HE染色显示家兔激素性股骨头坏死模型制造成功.免疫组化:实验组Beclin 1和MAP1-LC3的阳性率分别为96.43％ 、92.86％,明显高于对照组16.67％ 、8.33％,差异具有统计学意义(P<0.05).Western blot检测:实验组与对照组比较Beclin 1及MAP1-LC3蛋白表达增高,差异具有统计学意义(P<0.05).结论肾上腺皮质激素造成的家兔早期股骨头缺血坏死模型中,自噬基因Beclin 1和MAP1-LC3的表达增高,表明自噬参与了激素性股骨头缺血坏死的发病.
关键词： 糖皮质激素 骨坏死 自噬 Beclin1 微管相关蛋白1轻链3 -
凋亡与自噬的相互关系在类风湿关节炎中的研究进展
凋亡和自噬作为程序性细胞死亡的两种形式,二者相互联系又相互区别,凋亡和自噬的异常状态与类风湿关节炎的发生、发展密切相关.对于二者相互作用的研究不仅可以进一步揭示类风湿关节炎发生、发展的潜在机制,而且为其治疗和预防提供了新的思路.结合近年来国内外研究进展,就凋亡与自噬的相互关系在类风湿关节炎中的作用进行综述.
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5-氟尿嘧啶在体外对卵巢癌细胞SKOV3自噬过程的诱导作用
目的:探讨化疗药物5-氟尿嘧啶(5-FU)对卵巢癌细胞SKOV3自噬的诱导作用及其机制.方法:应用吖啶橙染色、间接免疫荧光技术观察50μmol/L5-FU处理48h对卵巢癌细胞SKOV3自噬过程的影响；并通过Western blotting检测5-FU对SKOV3细胞中微管相关蛋白轻链3(LC3)和自噬相关蛋白Beclin1表达水平的影响.结果:5-FU作用后SKOV3细胞产生明显的酸性区域,LC3定位的荧光亮点增多,细胞内Beclin1和LC3蛋白表达量也显著增加.结论:5-FU可能通过增加SKOV3细胞酸性区域的数量、促进细胞内Beclin1、LC3蛋白表达而诱导SKOV3细胞自噬.
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自噬相关蛋白Beclin1 、p62、Atg5在浆液性卵巢癌组织中的表达及临床意义
目的 探讨自噬相关蛋白Beclin1、p62、Atg5在浆液性卵巢癌中的表达及临床意义.方法 选择2014年1月至2015年12月在浙江省宁波市鄞州人民医院中西医结合肿瘤科行手术切除并经病理确诊的浆液性卵巢癌标本50例为观察组,同期因子宫肌瘤需切除正常卵巢标本10例为对照组,应用免疫组化法检测自噬相关蛋白Beclin1、p62、Atg5蛋白表达水平结合卵巢癌临床参数分析.结果 浆液性卵巢癌组织中Beclin1、Atg5蛋白阳性表达率分别为38.0％、32.0％,均显著低于正常卵巢组织80.0％、70.0％;但浆液性卵巢癌组织中其p62蛋白阳性表达率72.0％,显著高于正常卵巢组织10.0％,差异有统计学意义(P＜0.05).Beclin1、Atg5的表达与浆液性卵巢癌临床分期、细胞分化程度之间均显著相关(P＜0.05),而p62蛋白的表达与临床分期、淋巴结转移相关(P＜0.05).结论 自噬相关蛋白Beclin1、p62、Atg5在浆液性卵巢癌中的异常表达,可致自噬功能减低和自噬体形成减少,可能在浆液性卵巢癌的发生、发展发挥重要作用.
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Beclin1和Bcl2在侵袭性垂体腺瘤中的表达及关系
目的 检测Beclin1和Bel2在侵袭性垂体腺瘤组织中的表达,探讨其与垂体腺瘤侵袭性的关系及2者之间的相关性.方法 61例垂体腺瘤手术标本按侵袭性垂体腺瘤综合判定方法分为侵袭组(32例)和非侵袭组(29例),采用免疫荧光检测Beclin1和Bcl2蛋白的表达,RT-PCR法检测Beclin1和Bcl2 mRNA的表达,分析侵袭组和非侵袭组Beclin1和Bcl2表达水平的差异和相关性.结果 侵袭组Beclin1蛋白和mRNA表达均低于非侵袭组(P＜0.01)；而Bcl2蛋白和mRNA表达均高于非侵袭组(P＜0.01).Pearson相关分析显示:侵袭组中Beclin1和和Bcl2 mRNA的表达呈负相关(r=-0.42,P=0.028).结论 Beclin1在侵袭性垂体腺瘤中的表达下降,垂体腺瘤的侵袭性与Bcl2蛋白及mRNA的高表达,Beclin1蛋白和mRNA的低表达密切相关；自噬活性的减低可能导致垂体腺瘤侵袭性增强,而其活性减低可能是Beclin1和Bcl2相互作用的结果.
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腹腔连续注射低剂量氯胺酮后大鼠海马LC3和Beclin1的表达
目的 研究腹腔连续注射低剂量氯胺酮后大鼠海马自噬相关蛋白LC3、Beclin1的表达及其意义.方法 SD大鼠30只随机分为用药组和对照组,用药组大鼠以5mg/kg的剂量腹腔注射氯胺酮,每间隔30min1次,共5次.对照组予以等量生理盐水.用药组大鼠按用药后时间不同分为6小组,分别于末次给药后1,3,6,12,24,48h后取海马组织备用,用免疫荧光技术和Western blot技术检测大鼠海马组织中LC3、Beclin1的表达,应用统计学处理,比较用药组与对照组的蛋白表达差异.结果 与对照组比较,用药组大鼠海马组织中LC3Ⅱ/LC3 Ⅰ值在1h表达开始增多,6h呈强表达,Beclin1的表达在6h开始增多,12,24,48h都呈强表达(P＜0.05).结论 腹腔连续注射低剂量氯胺酮能促进海马组织发生白噬,自噬增强是对氯胺酮毒性的反应.
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大鼠皮肤挫伤后Beclin1和LC3的表达
目的 研究大鼠皮肤损伤后Beclin1、LC3的表达,观察皮肤损伤中的自噬现象,并探讨其在损伤诊断及损伤经历时间推断的意义.方法 运用免疫组化及图像分析技术研究大鼠皮肤挫伤后、损伤不同时间段后Beclin1、LC3表达的变化.结果 大鼠正常皮肤表皮细胞Beclin1、LC3低表达,大鼠皮肤挫伤6h后局部表皮细胞Beclin1、LC3表达开始增多,挫伤3、5和7d呈强表达.结论 皮肤损伤后局部细胞Beclin1、LC3表达增多;其表达与损伤经历时间具有相关性;细胞自噬增强是对损伤的反应.
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Beclin1、CD31在脑星形细胞瘤中的表达及相关性的研究
目的 探讨Beclin1、CD31在不同级别星形细胞瘤中的表达及相关性.方法 采用免疫组化检测10例正常脑组织及69例不同级别星形细胞瘤Beclin1、CD31的表达情况,并进行两者相关性分析.结果 免疫组化显示Beclin1在星形细胞瘤中随肿瘤级别升高表达降低;CD31在星形细胞瘤中随肿瘤级别升高表达增高;两者表达有负相关性(r =-0.996).结论 Beclin1、CD31在不同级别星形细胞瘤中的表达呈负相关,联合检测对于指导星形细胞瘤的治疗及判断预后有意义.
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Beclin1表达水平与乳腺癌临床分期相关性的研究
目的 Beclin1是与自噬相关的重要基因,本研究旨在明确其表达水平与乳腺癌临床分期的相关性.方法 随机抽取2003年-2012年在上海市黄浦区中心医院手术的200例乳腺癌,20例良性乳腺疾病,对220例石蜡标本重新取材,应用免疫组织化学染色法检测Beclin1的表达水平.结果 Beclin1在乳腺癌原位癌组织中表达水平显著高于浸润性癌组织,乳腺癌细胞分化越差Beclin1表达水平越低.结论 Beclin1检测在乳腺癌诊断、诊疗中具有重要价值,可能作为预测乳腺癌病理分期的候选分子标志物.
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细胞自噬在食管癌研究中的进展
细胞自噬（autophagy）是一个在各种外界因素影响下，真核细胞通过溶酶体降解其内部受损的细胞器、错误折叠的蛋白质和侵入其内的病原体并产生可以重新参与生命活动的物质和能量的生物学过程，在维持机体内环境稳定等方面发挥着重要的作用。目前，我国食管癌患者的发病率和病死率均远高于世界平均水平，放化疗联合靶向药物治疗已逐渐应用于食管癌的临床治疗，而这些新兴治疗措施与细胞自噬有着一定的关系。该文就细胞自噬在食管癌发生发展中的作用和调控机制进行综述。
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间歇性低氧对全脑缺血大鼠神经细胞丢失及自噬相关蛋白beclin1的影响
目的:探讨间歇性低氧对全脑缺血大鼠神经细胞丢失及自噬相关蛋白beclin1的影响.方法:60只雄性Wistar大鼠采用数字随机法随机分成假手术组(SO组)、单纯全脑缺血再灌注组(I/R组)、间歇性低氧全脑缺血再灌注组(IH+I/R组),每组20只.IH+I/R组给予间歇性低氧21天后制作全脑缺血再灌注模型.采用改良的Pulsinelli四血管阻断法制备脑缺血再灌注模型,HE染色观察海马区神经细胞形态变化,免疫组织化学法检测大鼠脑组织海马区beclin1蛋白表达情况.结果:与SO组比较,1/R组大鼠神经元结构损伤,beclin1蛋白表达增强(P＜0.05).与I/R组比较,IH+I/R组大鼠神经元结构损伤加重,beclin1蛋白表达增强(P＜0.05).结论:间歇性低氧可加重全脑缺血大鼠的神经细胞损伤,与增加beclin1表达有关.
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姜黄素调控自噬促进实验性结肠炎小鼠肠黏膜修复
目的 观察右旋葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的实验性结肠炎小鼠结肠组织中自噬蛋白Beclin1、LC3Ⅱ/Ⅰ的表达变化,探讨姜黄素在结肠炎中的作用和可能机制.方法 将60只BALB/c小鼠随机分为模型对照组、姜黄素灌胃组、美沙拉嗪灌胃组和正常对照组,每组15只.除正常对照组外,其余各组采用DSS法制造结肠炎模型.造模第1天起,姜黄素灌胃组予姜黄素灌胃,美沙拉嗪灌胃组予美沙拉嗪混悬液灌胃,模型对照组、正常对照组小鼠予生理盐水灌胃.连续处理21 d,第22天处死小鼠,留取标本.观察小鼠一般情况、结肠病理损伤情况.采用免疫荧光及Western blot法检测小鼠结肠组织Beclin1、LC3Ⅱ/Ⅰ表达.结果 姜黄素灌胃组的小鼠组织病理损伤评分高于正常对照组(2.23±0.10比0.07±0.05,P＜0.01),低于模型对照组(2.23±0.09比3.90±0.07,P＜0.01).免疫荧光染色结果显示,Beclin1、LC3在姜黄素灌胃组表达高于正常对照组(0.74±0.02比0.17±0.11,P＜0.01;0.77±0.06比0.26±0.02,P＜0.01),但低于模型对照组(0.74±0.02比0.89±0.02,P＜0.05;0.77±0.06比1.06±0.02,P＜0.05).Westemblot检测结果显示,Beclin1、LC3Ⅱ/I在姜黄素灌胃组表达高于正常对照组(0.27±0.02比0.11±0.01,P＜0.05;1.64±0.05比0.55±0.07,P＜0.05),但低于模型对照组(0.27±0.02比0.36±0.01,P＜0.05;1.64±0.05比1.87±0.04,P＜0.05).结论 姜黄素改善结肠组织损伤,可能与下调自噬相关基因表达有关.
