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模拟表位肽文献资料
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EGFR模拟表位肽筛选及其生物学活性鉴定
目的：帕尼单抗(Panitumumab)可抑制EGFR信号通路，临床用于治疗EGFR高表达的转移性结直肠癌患者。本研究以帕尼单抗为靶分子，应用噬菌体展示肽库进行筛选，获得可模拟与帕尼单抗结合的EGFR表位小肽，并对模拟表位肽的活性进行了初步鉴定。方法：应用噬菌体展示肽库技术筛选可与帕尼单抗结合的噬菌体单克隆，并对阳性噬菌体克隆进行DNA测序鉴定，获得对应的EGFR模拟表位肽序列。通过基因重组、蛋白表达、纯化，获取该小肽与GST的融合蛋白，并通过ELISA，免疫共沉淀和GST-Pull down检测小肽与帕尼单抗的结合，及其对帕尼单抗结合EGFR的竞争抑制作用。结果：通过筛选噬菌体肽库我们获得两种可同帕尼单抗特异性结合的噬菌体单克隆，P19和P26。应用基因重组技术构建GST-小肽融合蛋白表达载体，并在BL21中表达融合蛋白GST-P19、GST-P26。免疫共沉淀(Co-IP)以及GST-pulldown结果初步提示帕尼单抗同GST-P19和GST-P26具有相互作用。ELISA竞争抑制实验结果证明P19和P26可明显抑制帕尼单抗和EGFR蛋白的结合。结论：通过筛选噬菌肽库获得的帕尼单抗特异性结合性小肽有望成为新型EGFR肿瘤疫苗。
