HAMI 3379抑制自噬减轻BV2细胞缺氧缺糖损伤的机制

目的 探讨HAMI 3379抑制自噬减轻BV2细胞缺氧缺糖损伤的机制.方法 随机将对数生长期BV2细胞分为正常对照组、氧糖剥夺(OGD)组和1、10、100 nM HAMI 3379组,然后采用OGD处理对细胞进行造模,培养48 h,采用MTT检测、LDH释放检测及蛋白印记检测观察HAMI 3379对OGD处理后BV2细胞活性及自噬的影响.结果 与正常对照组比较,1、10、100 nM HAMI 3379组细胞均有明显损伤,且LDH释放增加(P<0.05);而与OGD组比较,给予1 nM HAMI 3379有改善细胞活性趋势,但差异无统计学意义(P>0.05);10、100 nM HAMI 3379可明显增加细胞存活率,减少LDH的释放(P<0.05).与正常对照组比较,OGD组和10、100 nM HAMI 3379组Beclin-1表达量显著升高(P<0.05);而与OGD组比较,10、100 nM HAMI 3379组的BV2细胞Beclin-1表达量明显降低(P<0.05).与正常对照组比较,OGD组和10、100 nM HAMI 3379组LC3Ⅱ/Ⅰ表达量显著升高,差异具有统计学意义(P<0.05);与OGD组比较,10、100 nM HAMI 3379组BV2细胞LC3Ⅱ/Ⅰ表达量明显降低(P<0.05).结论 HAMI 3379可改善OGD处理后BV2细胞活性,减少LDH释放,也可降低OGD处理激活的自噬信号分子Beclin-1和LC3的表达,说明HAMI 3379可通过调节自噬信号通路分子部分逆转OGD处理后BV2细胞的损伤.

谷红注射液对新生乳鼠海马神经元缺氧缺糖损伤的保护作用

目的:探讨不同浓度的谷红注射液对乳鼠海马神经元因缺氧缺糖(OGD)所造成损伤的保护作用.方法:培养原代乳鼠海马神经元并用神经元特异性烯醇化酶(NSE)免疫组化染色法鉴定.将培养成熟的细胞随机分成6组:正常组、OGD模型组、尼莫地平组(200g/mL)、谷红注射液低、中、高剂量(30、60、90g/mL)组,除正常组之外,余组都加药并进行OGD处理,造模后检测各组乳鼠海马神经元细胞中丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)表达活性及细胞上清液乳酸脱氢酶(LDH)外漏量的变化情况,采用酶联免疫吸附法检测各组细胞上清液中白细胞介素-6(IL-6)以及单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)含量,采用流式细胞术检测谷红注射液对各组海马神经元细胞凋亡的影响.结果:鉴定表明,海马神经元纯度＞90％,可用于实验.OGD使原代培养的海马神经元受损,与OGD模型组相比,谷红注射液高、中、低剂量组可以有效减轻缺氧造成的损伤,能够有效提高SOD与GSH-PX活性,减轻MDA表达,减少LDH外漏以及NO含量,减弱MCP-1与IL-6表达,抑制海马神经元凋亡(P＜0.05,P＜0.01).结论:谷红注射液可以减轻新生乳鼠海马神经元OGD损伤,其保护机制可能与增强细胞抗氧化应激能力、减轻炎性反应与抗细胞凋亡有关.

川芎嗪对缺氧缺糖培养心肌细胞蛋白质、RNA合成及一氧化氮合酶基因表达的影响

目的:观察川芎嗪对心肌细胞缺氧缺糖损伤的保护作用.方法:本实验利用心肌细胞缺氧缺糖损伤模型,采用同位素掺入、Northern杂交分析方法,观察川芎嗪注射液对心肌细胞缺氧缺糖时蛋白质、RNA合成及一氧化氮合酶(NOS)mRNA表达的影响.结果:川芎嗪注射液可提高培养心肌细胞缺氧缺糖时3H-亮氨酸(Leu)和3H-尿嘧啶核苷(UR)的掺入率,促进蛋白质、RNA合成,诱导NOS mRNA在缺氧缺糖心肌细胞的表达.结论:川芎嗪对心肌细胞缺氧缺糖损伤有较好的保护作用.

促红细胞生成素对新生大鼠皮质神经元体外缺氧缺糖损伤的保护作用研究

目的 研究rhEPO对新生大鼠皮质神经元氧糖剥夺(OGD)损伤的保护作用及rhEPO的作用剂量及作用时间.方法 新生Wistar大鼠皮质神经元原代培养7 d~11 d,随机分为正常对照组、OGD损伤组和rhEPO处理组.(1)建立皮质神经元的OGD模型,给予不同剂量的rhEPO(0.1、1、10、100 U/ml);(2)在不同时间(OGD损伤后0 h、24 h、48 h)给予10 U/ml rhEPO.观察各组细胞形态学改变,MTT法检测细胞存活率.结果 与OGD损伤组比较,rhEPO(0.1、1、10 U/ml)处理可增加OGD损伤的皮质神经元的存活率(P<0.05),且浓度为10 U/ml时rhEPO保护作用强(P<0.05).皮质神经元OGD损伤后立即加入rhEPO(10 U/ml)保护作用强(P<0.05),损伤后24 h及48 h给药没有增加皮质神经元存活率.结论 rhEPO对体外缺氧缺糖损伤的大鼠皮质神经元具有保护作用,rhEPO有效浓度为0.1~10 U/ml,且其浓度为10 U/ml时保护作用强;rhEPO 在神经元损伤后立即给药保护作用强.

银杏二萜内酯葡胺注射液通过下调calpain信号通路抑制脑缺血神经细胞凋亡

研究银杏二萜内酯葡胺注射液(diterpene ginkgolides meglumine injection,DGMI)对缺氧缺糖/复氧(oxygen-glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R)损伤的人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y凋亡的抑制作用及其机制.采用试剂盒、Fluo3 AM法、Western blot检测SH-SY5Y细胞氧糖剥离损伤4h后,与药物一起复氧1h细胞乳酸脱氢酶(LDH)的漏出量、caspase-3/7酶活力、细胞质中核小体含量、胞浆游离钙离子浓度以及calpain、cleaved caspase-12蛋白量的变化.结果显示DGMI能极显著降低OGD/R损伤的SH-SY5Y细胞LDH的漏出量,抑制caspase-3/7酶活性,减少细胞核核小体的释放量,下调细胞内游离钙离子浓度、calpain和cleaved caspase-12蛋白量,抑制calpain凋亡信号通路保护神经细胞.DGMI对OGD/R诱导的SH-SY5Y细胞凋亡具有显著的抑制作用,其作用机制可能与抑制细胞内Ca2+/calpain/caspase-12/capase-3信号通路有关.

海人藻酸损伤成年大鼠纹状体后Nestin表达的变化/NMDA受体亚单位NR1、NR2A、NR2B在生后大鼠海马的免疫组织化学表达/MK-801对海马脑片培养缺氧缺糖损伤中bcl-2、bax蛋白质表达的影响/局灶性脑缺血后修复蛋白表达与细胞凋亡影响的实验研究

不同浓度丹参酮对大鼠脑片缺氧缺糖损伤的保护作用

目的:探讨不同浓度丹参酮对大鼠脑片缺氧缺糖损伤的保护作用及其机制.方法:建立大鼠脑片缺氧缺糖损伤模型,设立对照组、缺氧缺糖损伤组、丹参酮20 mg·L-1组和丹参酮200 mg·L-1组.利用2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)染色定量比色、乳酸脱氢酶(LDH)、免疫组化、电镜评价不同浓度丹参酮对脑损伤的保护作用.同时激光共聚焦显微镜测定脑片胞内钙变化.结果:不同浓度丹参酮(20、200 mg·L-1)抑制脑片OGD损伤所致的TTC染色降低,减少LDH释放,减轻神经元凋亡,改善神经元超微结构的病理损伤.OGD损伤增加bax和bcl-2蛋白表达和胞内钙离子浓度.不同浓度丹参酮(20、200 mg·L-1)进一步上调bcl-2蛋白表达,降低bax蛋白表达,同时抑制胞内钙离子浓度.与丹参酮20 mg·L-1相比,丹参酮200 mg·L-1作用较强. 结论:不同浓度丹参酮具有脑保护作用,能够抑制缺氧缺糖损伤导致的大鼠脑片神经元损伤及其凋亡过程,且丹参酮对于胞内钙离子的调控可能是其发挥保护作用的重要机制之一.

全反式视黄酸通过RARα抑制缺氧缺糖引起的原代神经元凋亡

目的:探讨全反式视黄酸(all-trans retinoic acid,ATRA)是否能够抑制缺氧缺糖损伤(oxygen and glucose-deprivation,OGD)诱导的原代神经元凋亡.方法:采用原代神经元作为研究对象,分为对照组、OGD组、OGD+ATRA组;体外分离培养原代神经元,用神经元特异性烯醇化酶(neuron-specific enolase,NSE)鉴定神经元;倒置显微镜观察OGD损伤前后细胞形态变化;流式细胞技术研究OGD损伤后各组原代神经元凋亡水平;Real-time PCR检测视黄酸核受体α(retinoic acid receptor alpha,RARα)、转录生长因子β1 (transforming growth factor-β1,TGF-β1)、转录生长因子β2(transforming growth factor-β2,TGF-β2)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(cysteinyl aspartate specific proteinase,Caspase-3)mRNA表达水平;Western blot印迹检测RARα、TGF-β、Caspase-3蛋白表达水平.结果:成功培养原代神经元;原代神经元OGD损伤后,倒置显微镜观察发现OGD组死亡的原代神经元较OGD+ATRA组明显增多,细胞更加杂乱;流式细胞计数发现OGD+ATRA组(26.11±2.96)％细胞凋亡率较OGD组(52.14±5.23)％明显降低(P=0.025);OGD+ATRA组RARα mRNA表达水平(1.52±0.43)和蛋白表达水平(0.22±0.02)较OGD组的mRNA表达水平(0.49±013)和蛋白表达水平(0.10±0.02)均明显增高(P=0.006,P=0.005),而OGD+ATRA组TGF-β1、TGF-β2 mRNA表达水平(0.45±0.10,0.41±0.08)分别较OGD组(0.81±0.15,0.98±0.15)明显降低(P=0.034,P=0.018),而且OGD+ATRA组TGF-β、Caspase-3蛋白表达水平(0.22±0.04,0.18±0.03)分别较OGD组(0.39±0.05,0.47±0.06)也明显降低(P=0.016,P=0.002),OGD+ATRA组(1.08±0.49)与OGD组(1.00±0.15)Caspase-3 mRNA表达水平无明显差异(P=0.148).结论:ATRA可以激活其受体RARα进而下调TGF-β,抑制凋亡因子Caspase-3的表达,终抑制OGD损伤引起的原代神经元凋亡.