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血小板裂解液的制备及生物学效应观察
目的 制备高含量细胞因子的血小板裂解液(PL).方法 采用反复冻融法[-80℃～37℃冻融3次(冻24 h/次)]和超声法(285 W,每次超声处理5 s停止5 s,共10次)处理10份单采血小板制剂(30 mL/份),ELISA法对细胞因子,血小板衍生长因子(PDGF)-AA、PDGF-AB、PDGF-BB,转化生长因子-β1(TGF-β1),血管内皮生长因子165(VEGF165)检测,同时将2种方法制备的PL按10％比例加入常规培养基DMEM/F12培养第5代人脐血间充质干细胞,观察传至第7代细胞增殖情况,并与FBS液培养(组)比较.结果 血小板保存3d后制备成的PL各因子含量均升高,0d浆与3d浆相比,PDGF-AA (ng/mL)为0.071±0.024 vs2.494±0.326,PDGF-AB (pg/mL)为36.079±15.54 vs 5 866.572±859.31,PDGF-BB(pg/mL)为33.258±21.23 vs 641.69±80.58;VEGF165 (pg/mL)为26.661±5.42 vs 122.652±10.59;TGF-β1 (pg/mL)为55.556±6.16 vs3 930.022±827.68(P＜0.05或＜0.01).超声法可释放更高含量的细胞因子,3d反复冻融组与3d超声组比较,PDGF-AA (ng/mL)为0.095±0.025 vs1.28±0.236,PDGF-AB(pg/mL)为12 424.746±3 738.03 vs 19 610.987±10430.26;PDGF-BB(pg/rnL)为5 429.184±1 824.53 vs8 397.039±611.93;VEGF165 (pg/mL)为128.379±46.69 vs374.552±32.48;TGF-β1 (pg/mL)为8 820.789±1 755.45vs 14 686.780±7 164.89(P＜0.05或＜0.01).结论 反复冻融法和超声法均能有效释放血小板内的细胞因子;超声法处理血小板能释放更高含量的细胞因子,可替代FBS用于细胞培养.
