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遗传性耳聋基因芯片在新生儿耳聋基因筛查中的应用
目的:探索应用遗传性耳聋基因芯片对新生儿进行常见耳聋基因的筛查,为辅助临床诊断提供遗传咨询.方法:采集2085例新生儿足跟血,制成千血斑,提取血斑中淋巴细胞基因组DNA,用9项遗传性耳聋基因检测试剂盒检测中国人常见的4个耳聋基因的9个突变位点.结果:共检出73例突变,总突变率3.5％.其中GJ B2突变28例,线粒体突变5例,SLC26A4突变34例,GJB3突变5例,三杂合突变1例(235delC杂合突变299delAT杂合突变IVS72A＞G杂合突变).结论:正常人群也会携带常见的遗传性耳聋突变基因,在新生儿期,检测出耳聋基因突变对遗传性耳聋的早期发现、预防及治疗有很大帮助.
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1例遗传性迟发型耳聋大家系临床特点及其基因检测
目的 探讨内蒙古地区发现的1例遗传性迟发型耳聋大家系的临床特点及其致病基因,为该类疾病的早期筛查和诊断提供依据.方法 通过家系调查,对家系成员进行听力学检测及全身体格检查;绘制系谱图,整理分析家系资料;抽取外周血提取DNA;利用候选基因捕获测序方法对先证者进行127个已知基因排查性检测,将捕获到的基因突变位点进行PCR扩增和Sanger测序验证.结果 该家系共6代,可追溯的有53人,耳聋患者19例,均为语后聋,表现为迟发性和渐进性听力下降,发病年龄为10～40岁,患者听力损失表现为双侧对称性轻度至重度感音神经性耳聋.先证者检测结果确定1个临床意义未明的潜在基因致病突变位点:GJB3,c.400A>G.后续经直接测序验证,此突变位点在家系中无共分离现象.结论 该遗传性迟发型耳聋家系属于常染色体显性方式遗传,从先证者检测捕获的GJB3,c.400A>G基因突变位点不能确定为该家系的致病突变,还需进一步通过全基因组测序技术对其致病基因进行探索.
关键词： 遗传性迟发型耳聋家系 候选基因捕获测序 GJB3基因 致病突变 -
中国常染色体显性遗传非综合征型耳聋人群缝隙连接蛋白31基因突变分析
目的 研究缝隙连接蛋白31编码基因(GJB3)突变在中国常染色体显性遗传非综合征型耳聋(autosomal dominant non-syndromic hearing loss,DFNA)人群中的特征,了解中国DFNA家系GJB3基因突变发生率及突变谱.方法 应用聚合酶链反应产物直接测序方法 对31个中国DFNA家系先症者进行GJB3基因编码区突变检测及鉴定.结果 在31例先症者中发现已报道的GJB3基因的两种单核苷酸改变,其中,4例存在357C>T杂合碱基改变,1例存在357C>T纯合碱基改变;357C>T碱基改变没有引起氨基酸变化;1例受检者存在250G>A杂合碱基改变,250G>A引起GJB3 84位编码氨基酸缬氨酸变成异亮氨酸(V841).结论 在中国DFNA人群中,没有发现GJB3基因新的突变形式,初步结果 提示,GJB3基因突变在中国DFNA耳聋群体中不常见.
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基因芯片技术在非综合征性耳聋快速基因诊断中的应用研究
目的 应用耳聋基因芯片对非综合征性感音神经性耳聋患者进行分子病因学研究,评估其在快速耳聋基因诊断中的可行性.方法 采集158名来自北京第三聋哑学校的非综合征性耳聋学生的外周血,提取基因组DNA,用耳聋基因芯片检测四个国人中常见的耳聋相关基因中的9个热点突变,包括GJB2(35delG,176de116bp,235delC及299_300delAT),GJB3 (538C＞T及547G＞A),SLC26A4(IVS7-2A＞G、2168A＞G)和线粒体DNA 12S rRNA(A1555G).同时.应用酶切法或直接测序法分别对线粒体12S rRNA A1555G突变,以及GJB2、乩C26A4基因编码区序列进行检测,以验证基因芯片结果的准确性.结果 在158名耳聋患者中,基因芯片方法共检出67例携带致聋突变(42.41%).其中,线粒体DNAl2SrRNA A1555G突变5例(3.16%);GJB2基因突变39例(24.68%),包括235delC纯合突变24例,235delC和299_300delAT复合杂合突变7例,235delC单杂合突变5例,299_300delAT单杂合突变2例,35delG单杂合突变1例;SLC26A4基因突变22例(13.92%),包括IVS7-2A＞G纯合突变5例,IVS7-2A＞G和2168A＞G复合杂合突变5例,IVS7-2A＞G单杂合突变11例,2168A＞G单杂合1例;另外还有1例患者检出299_300delAT和IVS7-2A＞G双杂合突变.未检出GJB3基因突变.除两例纯合235delC被判读为杂合外,基因芯片的结果同酶切及测序方法结果一致,后者的阳性患者检出率为70例(44.3%),与芯片检测结果相比无统计学差异(P=0.250).经探针优化后,上述两例误判的235delC样品的芯片检测结果均与测序方法一致,同时经测序证实的其他22例235delC纯合突变样品验证,基因芯片的结果均与测序结果一致.结论 针对国人常见耳聋相关基因热点突变设计的耳聋基因芯片对非综合征性重度和极重度耳聋患者的突变检出率高(42.41%).与传统方法相比,它具有快速、高通量、高准确性、低成本等特点,能够满足临床耳聋基因检测的要求;且其操作简单,易于标准化,适于推广,显示出广阔的临床应用前景.
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耳聋-掌跖皮肤角化综合征的连接蛋白基因型和表型分析
目的 GJB2、GJB6、GJB3基因与遗传性耳聋及角化病有关,以GJB2、GJB6、GJB3基因为候选基因,研究1例伴有掌跖角化病的综合征型耳聋先证者的分子病因,探讨其表型及遗传特征.方法 采集先证者及其父母外周血并提取DNA,对GJB2、GJB6、GJB3基因编码区进行PCR扩增,以直接测序的方法进行突变分析.结果 先证者及其父母GJB3、GJB6基因测序未发现突变.先证者携带GJB2基因R75W单等位基因突变,其父母未携带此突变,在证实先证者与其父亲的亲子关系后明确先证者携带的R75W为新生突变.301名中国正常对照中未发现GJB2基因R75W突变.结论 在中国首次发现了GJB2基因新生突变R75W,此突变可能以显性方式遗传,导致耳聋-掌跖皮肤角化综合征.在不同种族R75W导致的耳聋多为双侧重度到极重度感音神经性聋,而皮肤表型的严重程度有所不同.
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耳聋基因GJB3c.538C>T突变致病性效应的初步研究
目的 对人GJB3基因c.538C>T点突变进行生物信息学及功能分析,预测并验证其致病性.方法 聚合酶链反应扩增含GJB3基因c.538C>T突变的编码区全序列,DNA测序验证后与T载体连接,再通过重组DNA技术,将GJB3基因编码区全序列导入pEGFP-N1载体,构建了GJB3基因野生型(pEGFP-Cx31-WT)和突变型(pEGFP-Cx31-R180X)表达载体,验证并纯化后,分别转染人胚肾HEK293细胞,观察EGFP-Cx31融合蛋白在细胞内定位表达情况.通过生物信息学方法分析c.538C>T突变前后,Cx31蛋白的三维空间结构和平均势能变化.结果 细胞内荧光定位结果显示GJB3c.538C>T突变后,Cx31蛋白只于胞内表达,未能正常形成细胞间隙连接结构.而生物信息学分析结果也表明突变后Cx31蛋白的三维空间结构和Anolea原子平均势能均发生了明显变化.结论 GJB3基因c.538C>T点突变导致其编码的Cx31蛋白的结构与功能发生变化,可能通过影响细胞间隙连接的形成,从而导致遗传性耳聋的发生.
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非综合征型耳聋患儿十六项遗传性耳聋基因突变检测分析
目的:通过对山东省淄博市135例非综合征型耳聋患儿进行GJB2、GJB3、SLC26A4、WFS1和线粒体DNA 12S rRNA共5个基因16个突变位点检测,研究该地区耳聋基因突变情况.方法:采集135例非综合征型耳聋患儿外周血,以聚合酶链反应对16个突变位点进行目的片段扩增并直接测序.结果:在135例非综合征型耳聋患儿中,62例检测出基因突变,检出率45.9％(62/135),其中双等位基因突变(纯合突变+复合杂合突变)24例,检出率17.8％(24/135);38例仅检测到1个等位基因突变,检出率28.1％(38/135).30例患儿检测出SLC26A4基因突变,检出率高,为22.2％(30/135);其次是GJB2基因突变,19例患儿检测出GJB2基因突变,检出率14.1％(19/135).共检测出突变等位基因86个,突变等位基因频率(突变等位基因数/等位基因总数)为31.9％(86/270),SLC26A4 c.766_2A＞G是常见的突变,为11.11％(30/270);其次是GJB2 c.235delC突变8.5％(23/270);SLC26A4 c.2168A＞G和WFS1 c.2158A＞G均有较高的突变检出率(2.6％).结论:SLC26 A4基因突变是导致本研究患儿非综合征型耳聋常见的原因,其次是GJB2基因突变;SLC26A4 c.766_2A＞G是常见的突变形式,其次是GJB2 c.235delC突变;本研究检测出GJB3和WFS1基因突变,没有检测出线粒体DNA12SrRNA基因突变.
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赤峰市特教学校耳聋患者GJB2和GJB3及GJB6基因突变分析
目的:利用基因诊断的方法调查内蒙古自治区赤峰市特教学校非综合征耳聋患者的常见分子病因,对GJB2、GJB3、GJB6基因编码区突变进行分析.方法:调查对象来自赤峰市特教学校非综合征耳聋患者134例(耳聋组),对照组为中国北方地区(北京、河北、内蒙、山西)听力正常者100例.所有受检者均采集外周血并提取DNA,首先进行GJB2基因编码区测序,对携带GJB2单杂合突变的患者进一步检查GJB6 del(GJB6-D13S1830)突变并进行GJB6编码区测序.对除GJB2基因、线粒体A1555G突变相关性耳聋及前庭水管扩大综合征外的分子病因不明的91例非综合征耳聋患者进行GJB3基因编码区测序.结果:134例非综合征耳聋患者及100例正常对照中共检测到6种GJB2基因新的突变方式.耳聋组41例携带GJB2病理性突变,其中双等位基因突变22例,单等位基因突变19例,在GJB2单等位基因突变的耳聋患者中未检测到GJB6 del(GJB6-D13S1830)及编码区其他突变;对照组4例携带GJB2基因病理性突变.在91例分子病因不明的耳聋患者及100例正常对照中共检测到3种GJB3基因新的突变方式.耳聋组2例携带GJB3基因病理性突变,均为杂合子,其中1例同时携带GJB2单等位基因突变235delC;对照组1例携带GJB3基因病理性突变.结论:通过GJB2、GJB6、GJB3基因编码区突变分析为赤峰市特教学校16.42%(22/134)的非综合征耳聋学生明确了分子病因;新发现的突变和多态丰富了中国人GJB2、GJB3基因突变及多态性图谱,为深入开展耳聋基因筛查奠定了基础.
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国人非综合征型遗传性聋患者GJB3基因突变分析
目的研究GJB3基因[编码缝隙连接蛋白31(Cx31)]突变在国人耳聋患者中的特征.方法应用聚合酶链反应(PCR)产物直接测序方法对各种感音神经性聋患者及家属141名、对照组150名进行GJB3基因编码区突变检测及鉴定.结果在141名患者中发现GJB3基因的三种单核苷酸改变,其中有两种碱基变化导致了氨基酸的改变,为错义突变方式.其中一个突变 (547G→A) 与夏家辉等报道相同;另一个突变形式(250G→A)为本研究首次发现,且进一步的各物种多种连接蛋白氨基酸序列进化分析证实该突变位点位于Cx31高度保守的第二跨膜区.150名正常对照组中未发现同样突变.结论国人非综合征型遗传性聋者GJB3基因突变筛查研究发现了一个GJB3基因新的突变形式(250G→A),为进一步开展耳聋相关基因的筛查研究打下了基础.
关键词： 耳聋 GJB3基因 突变分析 聚合酶链反应产物直接测序 -
中国云南地区非综合征型感音神经性耳聋GJB2和GJB3基因突变分析
目的 分析云南省部分地区极重度非综合征型耳聋(non-syndromic hearing loss,NSHL)患者常见耳聋基因GJB2和GJB3的突变特点,了解其分子流行病学特征.方法 采集2010年1月～2013年12月我院门诊散发的118例极重度非综合征型感音神经性耳聋患儿和236例双亲外周血,提取DNA.应用飞行质谱技术对GJB2、GJB3编码区域中7个突变位点,包括GJB2(35delG、167de1T、176-191del16、235delC、299-300delAT),GJB3(538C→T、547G→A)进行检测,同时结合耳声发射、听性脑干反应测试、颞骨CT和头颅MRI检查.结果 118例患儿中22例存在基因位点突变,占18.64％,其中235delC纯合突变8例,235delC单杂合突变6例,235delC/299-300delAT复合杂合突变8例;299-300del AT无纯合突变.未检出GJB3基因突变.236例双亲GJB2基因突变38例占16.10％,其中无235delC纯合突变,235delC单杂合突变父亲10例、母亲20例,299-300del AT单杂合突变父亲8例,299-300del AT无纯合突变,无235 delC/299-300delAT复合杂合突变;未检出GJB3基因突变.结论 云南省部分地区极重度非综合征型聋患儿GJB2突变率及突变形式与国内大部分报道基本一致,235delC是其主要的突变形式,其次为299-300delAT.在以家庭为单位的耳聋基因筛查中,发现有基因突变患儿,对应其父母至少有一方存在基因突变,显示重要遗传特征.对于GJB3在云南地区的流行特征,有待进一步扩大研究GJB3的样本量.
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新疆哈萨克族耳聋患者GJB3基因突变与肾虚血瘀型的研究
目的:分析新疆地区哈萨克族耳聋患者GJB3基因突变与肾虚血瘀型的关系.方法:调查对象来自新疆地区哈萨克族155例,其中耳聋患者(耳聋组)71例,正常对照组84例,所有受检者采集外周血提取DNA,应用聚合酶链反应(PCR)产物直接测序方法进行GJB3基因编码区突变检测,对耳聋患者中医辨证分为肾虚血瘀型和非肾虚血瘀型.结果:发现GJB3基因5种碱基改变:357C＞T (N119N)、798C＞T(N266N)、580G＞A (A194T)、250G＞A (V84I)、94C＞T (R32W),新的变异方式1种为94C＞T (R32W).耳聋组中发现357C＞T (22.5％)杂合16例、798C＞T(1.4％)杂合1例、580G＞A(1.4％)杂合1例、94C＞T(4.2％)杂合3例;对照组中发现357C＞T (19.0％)纯合4例、杂合12例,798C＞T (10.7％)纯合3例、杂合6例,94C＞T(4.8％)杂合4例、580G＞A(1.2％)杂合1例、250G＞A(1.2％)杂合1例.肾虚血瘀型占42例,突变16例(22.5％);非肾虚血瘀型29例,突变5例(7.0％),两型比较,差异有显著性意义(P＜0.05).结论:新疆哈萨克族耳聋患者GJB3基因突变在肾虚血瘀型与非肾虚血瘀型患者中的分布有差异;肾虚血瘀可能是导致其GJB3基因突变产生差异性的原因之一,具有一定的民族和地域特点.
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遗传性耳聋基因芯片检测的临床应用研究
目的 探讨遗传性耳聋基因芯片检测的临床意义,评价其在临床上快速检测常见遗传性耳聋基因的可行性.方法 研究对象为105例聋哑患儿,取外周血5ml,分离提取全血淋巴细胞基因组DNA,用遗传性耳聋基因芯片检测中国人中常见的4个耳聋相关基因上的9个热点突变,包括GJB2(35delG,176del16bp,235delC及299delAT),GJB3 (C538T),SLC26A4 (IVS7-2A＞G、2168A＞G)和线粒体DNA 12S rRNA (A1555G、C1494T).结果 在105例样本中,共检出17例携带致聋突变(16.19％).其中,线粒体DNA 12S rRNA 1555 A＞G异质突变1例(0.95％); GJB2基因突变7例(6.67％),包括235 del C纯合突变2例,235 del C/GJB2 299 del AT复合杂合突变2例,235 del C单杂合突变3例;SLC26A4基因突变9例(8.57％),包括IVS7-2 A＞G纯合突变1例,2168 A＞G纯合突变1例,IVS7-2 A＞G单杂合突变3例,2168 A＞G单杂合突变4例.未检出GJB3基因突变.结论 耳聋相关基因突变位点在我国也具有较高的阳性率,基因检查方法和以往传统的检测想法相比,具有准确性高、速度快、假阳性率低的优点,而且该检查方法操作简便,建议临床上进一步推广运用.
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可变性红斑角化症一家系基因突变检测
目的 检测可变性红斑角化症(EKV)一家系的GJB3和GJB4基因突变情况.方法 收集患者临床资料,提取患者及相关亲属外周血DNA,采用PCR扩增GJB3和GJB4基因编码区全部外显子及侧翼序列并测序.结果 通过基因检测发现该家系GJB3基因中一个杂合突变c.324G＞ A(p.G45E),在100例正常对照中均未发现上述突变.在该家系的GJB4基因中未发现突变.对该EKV家系的临床特征进行总结.结论 收集到的EKV家系存在GJB3基因c.324G＞A突变,该种突变在亚洲人群中报道多,推测可能为亚洲人群的突变热点.先证者伴有听力障碍,是否与该突变有关,需要更深入的研究来证实.
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新疆地区汉族遗传非综合征型耳聋人群GJB3基因突变分析
目的:探讨新疆汉族地区缝隙连接蛋白编码基因31(GJB3)突变在中国遗传非综合征型耳聋人群中的特征.方法:应用聚合酶链反应产物商接测序方法对新疆地区对非综合征型遗传性聋患者50名、对照组55名进行GJB3基因编码区突变检测及鉴定编码区突变检测及鉴定.结果:在50名患者中发现GJB3基因的2种单核苷酸改变,其中有1种碱基变化导致了氨基酸的改变,其中一个突变(357C→T)与夏家辉等报道相同;另一个突变形式(766G→A)为本研究首次发现.55名正常对照组中未发现同样突变.结论:国人非综合征型遗传性聋者GJB3基因突变筛查研究发现了一个GJB3基因新的突变形式(766G→A),为进一步开展耳聋相关基因的筛查研究打下了基础.
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昆明市聋病患儿易感基因筛查
目的:分析昆明市重度和极重度非综合征型聋病患儿中常见耳聋易感基因的突变频率和主要突变方式.方法:采集2015年1月-2016年12月昆明市儿童医院耳鼻喉科门诊散发的143例非综合征性聋病患儿(男73例,女70例)外周静脉血,提取基因组DNA,应用高通量耳聋基因捕获技术进行遗传性耳聋易感基因的常见突变位点进行检测分析.结果:143例患儿中41例存在不同程度的被检测基因位点突变,GJB2基因突变24例,突变率(16.78%),突变方式有纯合突变,杂合突变,复合杂合突变;未检出GJB3基因突变;SLC26A4基因突变16例,突变率(11.19%),突变方式有纯合突变,杂合突变,复合杂合突变;线粒体12S rRNA基因突变1例,突变率(0.70%),突变方式有同质突变.结论:235delC突变是非综合征性聋病患儿中GJB2基因主要的突变位点,其次为299-300delAT突变;IVs7-2A→G突变是非综合征性聋病患儿中SLC26A4基因的主要突变位点;1555A>G突变是非综合征性聋病患儿中线粒体12S rRNA基因的主要突变位点.
