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钦州市钦南区HIV-1分子流行病学研究
目的:了解钦州市钦南区HIV-1分子流行病学特征.方法:在钦南区采集100名未抗病毒治疗HIV-1感染者的血液样本,提取病毒RNA或前病毒DNA,采用逆转录/巢式PCR对HIV-1 gag基因片段进行扩增并测序.使用MAGA5.03软件对所得序列进行系统进化树分析,并计算gag区及各编码区段的基因离散率.结果:获得72份样本gag基因序列,其中CRF01_AE重组型占72.2％(52/72),CRF07_BC重组型占13.9％(10/72),CRF08 BC重组型占12.5％(9/72),G亚型占1.38％(1/72).CRF01_AE、CRF07_BC和CRF08_BC的gag基因离散率分别为0.049±0.004、0.053±0.005和0.059±0.005,差异具有统计学意义(P＜0.01).各亚型p17基因离散率均大于p24基因(P＜0.01).结论:钦南区HIV-1主要流行亚型是CRF0 1_AE,CRF 08 BC亚型离散率大于CRF 01 AE亚型和CRF 07 BC亚型.
关键词： 人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-1) 亚型 gag基因 基因离散率 -
HIV-1Nef蛋白新功能及其增强病毒感染性分子机理的研究进展
Nef蛋白是人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-1)及其他灵长类动物慢病毒编码的一种附属蛋白,在获得性免疫缺陷综合症(AIDS)疾病进程和病毒的复制过程中起着重要作用.抑制附属蛋白活性的策略可以改善传统抗逆转录病毒方案的疗效,因此深入理解这一附属蛋白的功能和其分子作用机制具有重要意义.Nef蛋白通过三个主要活性调节宿主细胞环境,增强病毒复制.下调细胞表面分子如CD4,MHC-Ⅰ,MHC-Ⅱ等的表达,使病毒逃逸宿主的免疫应答;通过调节T细胞的信号通路降低T细胞的活化,从而营造有利于病毒复制的环境;直接增强新生子代病毒粒子的感染性.这一功能的分子机制直到近宿主限制性因子丝氨酸转运蛋白(SERINC5)的发现才得以明晰.本文总结了Nef的功能及其增强病毒感染性的新研究进展,同时也归纳了SERINC5蛋白与Nef蛋白的相互作用的研究报道,为深入了解病毒复制机理,改善HIV-1防治方案提供新的理论线索.
关键词： 人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-1) Nef SERINC5 感染性 -
非复制重组痘苗病毒表达人免疫缺陷病毒Bostwana C亚型Nef蛋白及免疫效果的观察
从含人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-1)Bostwana C亚型全基因的质粒pJM4-HIV中克隆了nef基因,并利用非复制型痘苗病毒载体构建表达Nef蛋白的重组病毒NTVJ1175nef,经PCR和Southern blot鉴定,nef基因正确整合到痘苗病毒基因组的J片段上;感染人源细胞后,经Western blot和免疫荧光检测表明,重组病毒能很好地表达Nef蛋白,并定位于细胞质中.NTVJ1175nef免疫BALB/c小鼠后,经Pep-IFN-'γ-Assay法检测,可诱导产生针对表位肽P1特异的可分泌IFN-'γ的C+8 T细胞(占脾细胞总数0.20%);经乳酸脱氮酶(LDH)法检测证实,诱导的细胞毒性T细胞(CTL)可特异性地杀伤表位肽P1特异P815靶细胞.这些结果表明,NTVJ1175nef具有良好的细胞免疫原性,为下一步构建表达包含HIV早期抗原的多组分重组痘苗病毒候选疫苗奠定了免疫学基础.
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中国首例HIV-1 J亚型毒株的鉴定
目的 通过对1例来自刚果的人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-1)感染者样品进行序列分析,鉴定其亚型种类.方法 从该感染者血浆样品中提取RNA,经逆转录后采用套式PCR扩增HIV env、gag及pol基因的部分区段,PCR产物直接测序,将所获序列与参考序列进行比对分析,计算基因距离及构建系统进化树.结果 该感染毒株样品序列与HIV-1 J亚型国际参考株J.SE.93及J.SE.94聚在一起,与两参考株序列在env基因区距离均为8.2%,pol基因区距离分别为6.4%和6.3%,gag基因区距离分别为8.9%和8.0%,证实其为HIV-1 J亚型.这是国内首次报道检出HIV-1 J亚型.结论 HIV-1 J亚型毒株已随国际旅行者传入我国,加强对国际旅行人员中HIV毒株亚型的监测具有重要意义.
关键词： 人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-1) J亚型 序列分析 系统进化树分析 -
HIV-1反式激活蛋白神经毒作用研究进展
人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(human immunodeficiency virus type 1,HIV-1)感染中枢神经系统,可导致一系列临床并发症,其中受关注的一种是艾滋病痴呆综合症(AIDS dementia complex,ADC),主要表现为认知损害、精神行为异常和运动障碍.随着高效抗逆转录病毒疗法(highly active anti-retroviral therapy,HAART)的出现,ADC的发病率有所降低,但该疗法并不能完全控制或逆转ADC的发展[1].迄今为止,ADC的发病机制尚不完全清楚.在大脑中,HIV-1主要感染巨噬细胞和胶质细胞,而未感染细胞(如神经元细胞)也能发生损伤和凋亡,表明HIV-1感染细胞后释放的神经毒素对于神经系统的损伤发挥重要作用,其中重要的神经毒素是HIV-1的反式激活蛋白(trans-activator,Tat)[2 -3].本文就Tat蛋白的神经毒性作用机制的研究进展做一综述.
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国内某人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-1)核酸检测试剂盒的自动化应用性能评估
目的 对国内某人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-1)核酸定量检测试剂盒的自动化应用性能进行评估.方法 收集150份血液样品,用待评试剂和参比试剂及自动化设备进行双盲检测.2种试剂定性结果用符合率和卡方检验等统计方法分析;2种试剂的定量结果用相关性分析、回归分析等统计方法分析.结果 2种试剂检测结果的总体符合率为100.00％,Kappa值为1.00.2种试剂盒定量检测结果的相关性分析显示2种试剂检测结果一致,配对t检验显示2种试剂具有等效性.结论 待评试剂和参比试剂对同一血液样本检测结果具有较高的定性符合率、较强相关性以及定量一致性.
关键词： 人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-1) 自动化 定量检测试剂盒 性能评估 -
人中性粒细胞多肽HNP1,3体外抗单纯疱疹病毒Ⅰ型的作用
体外观察人中性粒细胞多肽1,3(Human neutrophil peptide,HNP1,3)及阿昔洛韦(Acyclovir,ACV)对单纯疱疹病毒Ⅰ型(Herpes simplex virus 1,HSV-1)的抑制作用.以Vero细胞为靶细胞,用各种浓度HN1,3与游离病毒颗粒(直接失活组)及感染病毒后的靶细胞(复制抑制组)进行相互作用,镜下观察各药物对HSV-1致细胞病变效应的抑制作用,并采用ELISA法测定感染48h后药物对HSV-1囊膜糖蛋白分泌的抑制作用.MTT法检测各药物对细胞的毒性作用.结果显示直接失活组中,HNP1,3可使HSV-1的致细胞病变效应减轻,对HSV-1直接失活的50%有效浓度(ECs0)为8.1μg/mL、10.03μg/mL;复制抑制组中,ACV使HSV-1的致细胞病变效应减轻,EC5o为0.68μg/mL.MTT检测结果表明HNP1,3在治疗浓度范围内无明显细胞毒性.以上结果表明HNP1,3除具有较强的抗菌作用和抗人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(Human immunodeficiency virus 1,HIV-1)活性外,还能失活HSV-1病毒颗粒,从而逆转病毒及其蛋白的病毒效应(致细胞病变)和抑制病毒蛋白质的合成.
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HIV-1 p24蛋白在大肠肝菌中的高效可溶性表达、一步纯化及抗原性分析
合成引物扩增HIV-1 p24基因,并将其克隆到pQE-30质粒中,使其在大肠杆菌E.coli M15中以IPTG诱导高效表达,经SDS-PAGE分析,该表达产物约占菌体总蛋白20%,并且以可溶蛋白的形式存在于细菌裂解液上清之中.经镍离子柱亲和层析一步纯化,洗脱产物中p24蛋白纯度达95%.ELISA分析表明,该蛋白可与HIV感染者血清发生特异性免疫反应.以此蛋白交联Sepharose 4B,亲和层析纯化HIV感染者血清中的抗体,用所得抗体与HIV确认试剂反应,发现该纯化抗体仅与确认试剂中的p24蛋白反应.上述结果表明在大肠杆菌中已经高效表达了可溶性HIV-1 p24蛋白,该蛋白具有良好的抗原性.
关键词： 人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-1) P24蛋白 基因表达 大肠杆菌 -
清开灵注射液体外抑制HIV-1作用
目的:研究清开灵注射液(QKL)体外抑制HIV-1的作用.方法:用MTT比色法检测QKL对H9/HIV-1ⅢB细胞(慢性感染HIV-1ⅢB的H9细胞)和MT-2细胞的毒性;采用荧光染料Calcein-AM标记的H9/HIV-1ⅢB细胞和系列稀释的QKL作用后.与MT-2细胞混合培养,2 h后在荧光下计数融合细胞数目,评价QKL对两种细胞早期融合的影响;用MTT法检测QKL对HIV-1ⅢB急性感染的MT-2细胞的保护作用;用HIVp24抗原试剂盒检测HIV-1ⅢB感染的MT-2细胞的培养上清p24抗原的含量,分析QKL对HIV-1复制的影响.结果:QKL对H9/HIV-1ⅢB细胞和MT-2细胞的CC50分别为1/50.76和1/36.97;抑制H9/HIV-1ⅢB细胞和MT-2细胞早期融合作用的EC50=1/235.29,SI=6.36;对HIV-1ⅢB感染的MT-2细胞保护作用的EC50=1/144.93,SI=3.92;抑制p24抗原产生作用的EC50=1/175.44,SI=4.75.结论:QKL体外有抗HIV-1活性,作用机制可能是多靶点的,可抑制病毒进入细胞和胞内复制.
关键词： 清开灵注射液 人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-1) 细胞融合 抑制作用 -
钦州市钦南区HIV-1原发性耐药及其影响因素的研究
目的 研究广西钦州市钦南区人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-1)原发性耐药特征.方法 在钦州市钦南区抽取100例未经抗病毒治疗的HIV-1感染者,提取病毒RNA,用巢式聚合酶链反应对pol基因序列进行扩增并测序,用MEGA以及斯坦福大学HIV Drug Resistance Database等工具对序列信息进行分析.结果 获得97份合格样本,78份成功扩增并测序,CRF01_AE毒株占67.9 ％(53/78),CRF08_BC毒株占15.4 ％(12/78),CRF07_BC毒株占11.5 ％(9/78),另有C亚型毒株3例,G亚型毒株1例.78份样本中,29份样本检出耐药性突变,突变率为37.2％.发生突变的29例样本中,有2例可对常用抗病毒药产生低度耐药,耐药率为2.6 ％(2/78).主要亚型CRF01_AE、CRF08_BC以及CRF07_BC耐药性突变发生率的差异有统计学意义(x2=9.115,P=0.009).性别、CD4+细胞计数以及感染时长在突变组与未突变组间无差异.结论 当前钦州市钦南区原发性耐药率处于较低水平,HIV-1亚型可影响耐药性突变.
关键词： 人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-1) pol基因 原发性耐药 亚型 -
钦州市钦南区HIV-1流行亚型及gag基因变异特征研究
目的 了解钦州市钦南区HIV-1流行亚型及gag基因变异特征.方法 在钦南区采集97名未抗病毒治疗HIV-1感染者的血液样本,从血浆中提取病毒RNA,从单个核细胞中提取前病毒DNA,采用PCR技术对HIV-1 gag基因片段进行扩增并测序.使用MAGA5.03软件对所得序列进行系统进化树分析,并计算gag区及各编码区段的基因离散率.结果 获得72份样本gag基因序列,其中CRF01_AE重组型占72.3％(52/72),CRF07_BC重组型占13.9％(10/72),CRF08_BC重组型占12.5％(9/72),G亚型占1.39％(1/72).CRF01_AE、CRF07_BC和CRF08_BC的gag基因离散率分别为0.049±0.004、0.053±0.005和0.059±0.005,差异具有统计学意义(P＜0.01).结论 钦南区HIV-1主要流行亚型是CRF01_AE,CRF 08_BC亚型离散率大于CRF 01_AE亚型和CRF 07_BC亚型.
关键词： 人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-1) 亚型 gag基因 变异 基因离散率 -
哈尔滨市41例HIV-1感染者Vpu基因特征分析
目的 了解哈尔滨市未经抗病毒治疗HIV-1感染者人群中部分感染者HIV-1 Vpu基因亚型和变异特征.方法 采集哈尔滨市50例未经抗逆转录病毒治疗的HIV-1感染者的抗凝全血,分离外周血单核细胞(PBMC)提取前病毒基因组DNA,用巢氏聚合酶链反应(Nested-PCR)对HIV-1 Vpu基因进行扩增,并使用产物直接测序.应用Sequencher 4.9进行序列清理,Bioedit和MEGA5.05软件进行序列比对及系统发生分析.结果 50例HIV-1感染者的抗凝全血样本中终有41例(82.0％)成功扩增并完成测序分型.系统进化树显示该41例中34例感染者体内HIV的Vpu基因区与云南瑞丽株RL42(泰国B亚型)聚集在一起,属于B'亚型,7例属于欧美B亚型.各病毒株Vpu区组内离散率为(9.5±1.1)％,与国际标准毒株(HXB2)线性分析可发现某些区域的氨基酸变异,变异主要集中在10～47、70～104、115～147、174～205四个区域.结论 哈尔滨市未经抗病毒治疗HIV-1感染者人群中存在属B'亚型和欧美B亚型病毒流行株,其中属B '亚型的流行株有可能起源于云南吸毒人群流行株.Vpu在组内有一定的保守性,其结构性区域和基序可能为日后抑制HIV-1病毒的复制和释放提供理论指导.
关键词： 人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-1) Vpu基因 变异
