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用比色法测定地锦草中多酚的含量
用比色法测定地锦中多酚含量.采用Folin-Ciocaitcu(Fc)法,其结果准确、可靠,简便易行,可以建立一种地锦草有效部位含量的控制方法.
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地锦草对糖尿病小鼠胰岛β细胞氧化应激和凋亡的影响
目的:研究地锦草对糖尿病小鼠胰岛β细胞氧化应激和凋亡的影响.方法:尾静脉注射四氧嘧啶溶液(80 mg·kg-1)复制糖尿病小鼠模型.将造模成功的小鼠随机分为5组:模型组,阳性对照组(盐酸二甲双胍悬浊液25 mg·kg-·d-1),地锦草低、中、高剂量组(59,118,236 mg·kg-1 ·d-1),连续给药14 d后,观察其血糖、胰腺组织超氧化物歧化酶(SOD),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px),丙二醛(MDA)水平的变化,采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL法)检测胰岛β细胞的凋亡情况.结果:与模型组比较,地锦草各剂量组小鼠体重下降不明显(P＜0.05);与给药前及模型组比较,地锦草高剂量组和二甲双胍组血糖均下降(P＜0.05);与模型组比较,地锦草高剂量组和二甲双胍组胰腺组织中SOD和GSH-Px活性均升高(P＜0.05),MDA的含量降低(P＜0.05),胰岛β细胞凋亡指数降低(P＜0.05).结论:地锦草可明显降低糖尿病小鼠的血糖,其机制可能与增强糖尿病小鼠的抗氧化能力,减弱氧化应激对糖尿病小鼠胰岛β细胞的损伤,抑制胰岛β细胞的凋亡有关.
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地锦草调控NF-κB/VEGF信号通路抑制肿瘤血管生成的机制
目的:通过观察地锦草对H22肝癌小鼠核转录因子-κB/血管内皮生长因子(nuclear factor kappa-B/vascularendothelial growth factor,NF-κB/VEGF)信号通路相关蛋白的影响,探讨地锦草抑制肿瘤血管生成的机制.方法:昆明种小鼠皮下接种肝癌H22细胞建立H22肝癌小鼠模型,随机分为模型组,环磷酰胺组,地锦草组高、中、低剂量组.地锦草低、中、高剂量组分别灌胃(ig)给药1.13,2.25,4.50 g·kg-1,环磷酰胺组腹腔注射(ip)给药50 mg· kg-,模型组和环磷酰胺组灌服相同体积的蒸馏水,14 d后处死小鼠,测量肿瘤质量和小鼠体质量,计算抑瘤率;免疫组织化学检测微血管密度标记物血小板-内皮细胞黏附分子31(platelet endothelial cell adhesion molecule-31,CD31),聚合酶链反应检测肿瘤组织NF-κB,肿瘤坏死因子(TNF)-α,VEGF mRNA表达,免疫组化检测NF-κB,TNF-α,VEGF蛋白表达.结果:与模型组比较,给予地锦草后,H22肝癌小鼠瘤重减轻(P＜0.01),地锦草高剂量组抑瘤率升高,高达59.1％(P＜0.01);肿瘤组织CD31表达明显下降(P＜0.01);肿瘤组织NF-κB,TNF-α,VEGF mRNA和蛋白表达均下降(P＜0.01).结论:地锦草对H22肝癌小鼠肿瘤的抑制作用可能是通过减少肿瘤新生血管的生成,与减弱肿瘤组织的炎性因子表达有关.
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地锦草水提液对移植性肝癌的抑制作用及对凋亡蛋白表达的影响
目的:研究地锦草对移植性肝癌H22小鼠的抑制作用及对凋亡相关蛋白Bcl-2,Bax和Caspase-3表达的影响.方法:复制小鼠移植性肝癌模型后,随机分为模型组、地锦草组和环磷酰胺组.地锦草低、中、高剂量组分别以66,132,264 mg·kg-ig,环磷酰胺组1 mg·kg-iv 1次,模型组和环磷酰胺组灌服同体积的蒸馏水14d后处死小鼠,剥离瘤组织,称肿瘤质量;比色分析法检测血清超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量;免疫组化法观察肿瘤组织Bcl-2,Bax和Caspase-3蛋白表达.结果:与模型组比较,地锦草治疗后肿瘤质量明显减轻(P＜0.05);地锦草各剂量组与环磷酰胺组小鼠血清SOD均升高(P ＜0.05,P＜0.01),血清MDA含量均下降(P ＜0.05,P＜0.01);地锦草高、中剂量组及环磷酰胺组降低Bcl-2蛋白表达,同时提高Bax,Caspase-3蛋白表达(P＜0.05),降低Bcl-2/Bax.结论:地锦草抗肿瘤机制可能是通过增强抗氧化防御系统抑制肿瘤细胞的生长,纠正机体凋亡蛋白与抗凋亡蛋白失衡,激活Caspase-3酶活性而诱导肿瘤细胞凋亡.
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HPLC测定地锦草中没食子酸、槲皮素及山柰素含量
目的:建立同时测定地锦草药材中槲皮素、山柰素和没食子酸含量的高效液相色谱法.方法:采用Agilent TCC18(4.6 mm×150mm,5μm)柱分离,以甲醇和0.4％磷酸水溶液进行梯度洗脱,柱温30℃,流速1.0 mL?min -1.结果:没食子酸在0.051 8 ～0.621 6μg线性关系良好,平均回收率在102.17％ (RSD2.83％),槲皮素在0.070 2 ～0.702 0 μg线性关系良好,平均回收率在97.80％( RSD 2.42％),山柰素在0.020 4～0.408 0μg线性关系良好,平均回收率在98.02％( RSD2.72％).结论:操作简便,准确度高,重复性好,可作为地锦草质量控制方法之一.
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地锦草药材HPLC指纹图谱及模式识别研究
目的:建立地锦草药材的高效液相指纹图谱,用于评价地锦草药材的质量.方法:采用Promosil C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,甲醇-0.1％磷酸水为流动相梯度洗脱,流速0.8 mL·min-1,检测波长280 nm,柱温32℃,分析时间85 min.结果:10批地锦草样品得到的高效液相指纹图谱有24个共有峰,各共有峰之间的分离度较好,各批次指纹图谱相似度≥0.90.结论:地锦草药材的指纹图谱特征性及专属性强,可用于地锦草药材的鉴别及质量控制.
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地锦草滴丸的制备工艺
目的:优选地锦草滴丸的制备工艺.方法:以外观质量为评价指标,采用正交设计试验对各影响因素进行考察,从药物与基质配比、冷凝柱长、滴头内径等方面进行选择.结果:滴丸成型佳工艺为PEG4000-PEG6000(1:7)为基质,药物与基质的质量比1:3,药液熔融温度(82±2)℃,冷凝液甲基硅油,冷凝柱长15 cm,冷凝温度(1～3)℃,滴头内径3.0 mm,滴速30 d-min -1.结论:选取的处方及滴制工艺合理、简便.所制滴丸外观质量好,丸重差异小.
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正交试验法优选地锦草的提取工艺
目的研究地锦草中没食子酸的佳提取条件.方法采用正交试验法,以加水量(A)、提取时间(B)和提取次数(C)为研究因素,每个因素选取3个水平进行实验.结果因素B和C对没食子酸含量有显著影响;因素A则无显著性差异.结论佳工艺为30倍量的水煎煮3次,每次2 h.
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高效液相色谱法测定地锦草中槲皮素的含量
目的:建立地锦草中槲皮素高效液相色谱测定方法.方法:色谱柱Kromasil-C18(4.6 mm×250 mm,5 μm),流动相为乙腈-0.4%磷酸(40∶60),检测波长370 nm,流速1.0 mL*min-1.结果:槲皮素在0.0364～0.1274 μg线性关系良好(r=0.9999),回收率100.7%,RSD 2. 5%.结论:为地锦草及其制剂提供了分析方法,该法简便,结果可靠.
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地锦草改善2型糖尿病模型KK-Ay小鼠胰岛素抵抗的机制研究
研究地锦草对2型糖尿病胰岛素抵抗的作用.将高脂饮食的KK-Ay小鼠,分为4个组,二甲双胍组:灌胃盐酸二甲双胍(250mg·kg-1);模型组:灌胃等量蒸馏水;地锦草低剂量组:灌胃地锦草1g·kg-1;地锦草高剂量组:灌胃地锦草2g.kg-1.另外,以普通饮食的C57BL/6J小鼠作为正常对照组:灌胃等量蒸馏水.5组均连续灌胃8周.实验前后,分别对实验小鼠的体重、空腹血糖以及胰岛素耐量进行检测;胰腺组织切片HE染色,观察胰岛的病理变化;采用ELISA方法检测血清胰岛素,TNF-α,IL-6,脂联素(ADPN)及瘦素(LEP)的水平.结果显示地锦草可降低KK-Ay小鼠的体重、空腹血糖,缓解高胰岛素血症,降低注射胰岛素后的血糖-时间曲线下面积,提高30 min血糖下降率,改善胰岛素抵抗状况;各治疗组胰腺病理形态明显改善;地锦草可降低KK-Ay小鼠血清TNF-α,IL-6及LEP水平,升高血清ADPN水平.该研究证明地锦草可改善KK-Ay小鼠胰岛素抵抗,其机制可能与影响炎症因子及脂肪因子水平有关.
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中药地锦草酚性成分
目的:为研究中药地锦草抗HBV活性物质基础.方法:采用聚酰胺、大孔树脂、Sephadex LH-20,MCI GEL CHP20P等色谱方法,从地锦草70%乙醇提取物中分离得到7个酚性化合物.结果:利用MS,NMR等波谱分析手段鉴定了化合物的结构,分别为:短叶苏木酚(brevifolin,1),短叶苏木酚酸(brevifolin carboxylic acid,2),短叶苏木酚酸甲酯(methyl brevifolincarboxylate,3),phyllanthussin E methyl ester(4),地愉酸双内酯(sanguisorbic acid dilactone,5),3,3'-二甲氧基鞣花酸(3,3'-2-diO-methyl ellagic acid,6),鞣花酸(ellagic acid,7).结论:化合物2～6为首次从该植物中分得.
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地锦草洗脱部位指纹图谱特征与其抗真菌作用的灰关联度分析
目的:确定地锦草不同洗脱部位指纹图谱特征峰所代表的化学成分对其抗真菌作用贡献大小,为建立“指纹图谱与药效关联”的中药质量控制模式提供理论依据和数据支持.方法:用HPLC研究地锦草不同洗脱部位的指纹图谱；用NCCLS M38-A研究其抗真菌作用；用灰关联度分析方法研究其谱效关系.结果:地锦草不同洗脱部位的抗真菌作用是多种化学成分共同作用的结果,各特征峰所代表的各化学成分(以特征峰编号作为该特征峰所代表的化学成分名称)对其抗真菌作用贡献的大小顺序为红色毛癣菌:2＞5＞3＞4＞1；石膏样毛癣菌:5＞2＞3＞4＞1.结论:地锦草不同洗脱部位指纹图谱与其抗真菌作用之间有一定的对应关系.
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不同产地不同季节地锦草有效部位多酚类化合物含量的比较性研究
用比色法Folin-Ciocaitcu(Fc),测定地锦草有效部位多酚类化合物含量.对不同产地、不同季节采集的地锦草有效部位含量,进行了比较性研究,为地锦草药材建立质量标准、确定地锦草原药材的产地和采收季节,提供了可靠的科学依据.
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旱莲草治疗心律失常
受北京四大名医之一施今墨先生治疗心脏病的影响,笔者在临床上遇反复发作性心律失常,特别是反复发作性阵发性心动过速、房颤,多予旱莲草合地锦草、车前草,再加入健脾益气温阳药物研末口服,多数患者临床疗效满意.
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地锦草水提液对H22荷瘤小鼠生长抑制及其机制探讨
目的:研究地锦草对H22荷瘤小鼠的抑瘤作用并探讨其对肿瘤组织血管内皮生长因子(vascular endothelialgrowth factor,VEGF)和基质金属蛋白酶-3(matrix metalloproteinases-3,MMP-3)蛋白表达的影响.方法:建立H22荷瘤小鼠模型,随机分为模型对照组、地锦草264 mg/(kg·d)高剂量组、地锦草132 mg/(kg·d)中剂量组、地锦草66 mg/(kg·d)低剂量组和环磷酰胺组50 mg/(kg·d).灌胃给药14 d后处死小鼠,剥离瘤组织,测量肿瘤体积大小.采用HE染色其形态学变化;免疫组化法观察肿瘤组织VEGF和MMP-3蛋白表达情况.结果:地锦草高剂量组的肿瘤体积为(3.125±1.711) mm3,模型对照组为(5.081±1.936) mm3;地锦草高剂量组肿瘤质量为(1.784±1.765)g,模型对照组为(4.418±2.720)g.与模型组比较,地锦草高剂量组肿瘤体积明显缩小,t=2.184,P=0.037;且其瘤质量减轻,t=2.145,P=0.041.地锦草和环磷酰胺组小鼠瘤体组织切片可见癌细胞聚积成巢,肿瘤细胞数量减少,多处组织坏死,瘤体与周围组织界限清楚,且未侵犯周围组织.免疫组化结果显示,模型组VEGF和MMP-3蛋白表达增强.地锦草高剂量组VEGF蛋白表达(0.160±0.004)下降,与模型对照组(0.228±0.020)比较差异有统计学意义,t=5.011,P＜0.001.地锦草高、中、低剂量组MMP-3蛋白表达分别为0.316±0.062、0.303±0.057和0.302±0.058,与模型组比较差异均有统计学意义,t值分别为6.322、6.845和6.534,P值均＜0.001.各组肿瘤组织的VEGF与MMP-3蛋白表达无直接相关性,r=0.069,P=0.709.结论:地锦草可抑制H22荷瘤小鼠肿瘤的生长,其抗肿瘤机制可能与抑制H22荷瘤小鼠的肿瘤组织VEGF和MMP-3蛋白的表达有关.
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中药地锦草芹菜素糖苷类化合物
为了研究中药地锦草抗HBV的活性物质基础,采用大孔树脂、SephadexLH-20、MCIGELCHP20P等色谱方法,从地锦草70%乙醇提取物中分离得到5个芹菜素苷类化合物,通过MS、NMR、2D-NMR等波谱分析手段鉴定了化合物的结构,分别为:芹菜素-7-O-(6"-O-没食子酰)-β-D-葡萄糖苷(1),芹菜素-7-O-β-D-芹糖(1→2)-βD-葡萄糖苷(2),芹菜素-7-O-β-D-芦丁糖苷(3),芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷(4),芹菜素(5).化合物1为新化合物,化合物2、3为首次从该植物中分得.
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小儿泻速停颗粒鉴别方法研究
小儿泻速停颗粒原质量标准中鉴别项多为颜色反应,结果不易判断,专属性差.本文中采用薄层色谱法,用对照药材地锦草,儿茶和对照品没食子酸,儿茶素,芍药苷作对照分别对其中的地锦草,儿茶,白芍进行鉴别.结果表明本方法稳定,重现性好,专属性强,用于其质量控制可得到良好的效果.
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地锦草饮片炮制问题探讨与质量改进对策
目的:揭示中药饮片质量面临的困境,提出中药饮片监管思路与方法.方法:以地锦草的炮制研究为例,分析中药饮片炮制存在的问题.结果与结论:目前地锦草混淆品较多且与地锦草难以区分,炮制过程中缺少相应的炮制规程及相应的控制手段.根据实际出现的问题,有针对性地提出建议:生产企业应加强中药材源头控制,有条件的生产企业应该统筹规划、协调发展,对于基原复杂的药材,应按照GAP要求进行种植;加强专业技术培训,提高饮片生产流通单位业务人员的中药材鉴别能力;加强中药炮制研究,统一炮制标准,保证饮片质量稳定均一.
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大孔树脂对地锦草、金银花叶与杭白菊总黄酮吸附分离性能研究
目的 考察3种大孔树脂和聚酰胺对地锦草总黄酮、金银花叶总黄酮和杭白菊总黄酮的吸附分离性能,以探讨大孔树脂等在精制地锦草、金银花叶和杭白菊有效部位的应用.方法 以总黄酮为考察指标,筛选适用的大孔树脂等型号,评价大孔树脂的吸附与解吸工艺.用分光光度法测定总黄酮含量.结果 地锦草、金银花叶和杭白菊总黄酮精制的适用树脂分别为D101、DA201、DM301;DA201;D101、DA201、DM301.地锦草总黄酮对DA201和对D101、金银花叶总黄酮对DA201、杭白菊总黄酮对DA201和对D101的上样浓度分别为0.49～1.47和0.42～1.31、1.03～2.07、0.50～1.00和0.71～1.99mg/ml,动态吸附阶段的泄漏点分别为8和10、2、2和1BV,乙醇洗脱液中总黄酮含量较高的乙醇浓度分别为20%、30%、40%和20%、30%、40%;10%、20%、30%;30%、40%、50%和20%、30%、40%.温度对DA201和D101吸附地锦草总黄酮影响不大,而对DA201或D101吸附金银花叶和杭白菊总黄酮有一定影响.结论 3种大孔树脂和聚酰胺对中药总黄酮有效部位的提取精制有较大差别.
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HPLC法测定地锦草中游离和总没食子酸含量
目的:建立HPLC法测定地锦草中游离没食子酸和总没食子酸的含量.方法:采用Agela Odyssil C1s (4.6 mm×250 mm,5 μm)色谱柱;流动相为甲醇-0.5％磷酸溶液(8:92);检测波长270 nm;流速1.0 mL· min-1;柱温30℃.结果:没食子酸在0.034 0～1.700 2 μg范围内呈良好线性关系(r=1.000 0),游离没食子酸和总没食子酸平均回收率分别为99.63％和99.34％.结论:该方法操作简便准确,灵敏度高,重复性好,可用于地锦草中没食子酸的质量控制.
