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丹酚酸B镁盐对缺氧复氧内皮细胞内钙和一氧化氮的影响
目的:研究丹酚酸B镁盐对缺氧复氧引起的内皮细胞内钙升高和一氧化氮释放增加的影响.方法:培养的人脐静脉内皮细胞(ECV304)暴露在95%N2+5%CO2条件下缺氧30分钟,后在含5%CO2的空气中复氧30分钟.内皮细胞的损伤用染料排除实验、SOD的活性和MDA的生成来评价.胞内游离钙浓度用钙荧光探针Fura 2-AM测定.一氧化氮含量用一氧化氮试剂盒测定.内皮型一氧化氮合酶(eNOS)mRNA和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA的表达用半定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测.结果:缺氧复氧引起内皮细胞的活力由正常条件下(93.1±1.2)%降至(88±3)%(P<0.01),SOD的活性也由(0.24±0.07)kNU/L下降到(0.18±0.03)kNU/L(P>0.05),但其使内皮细胞MDA的生成由(1.12±0.06)mmol/L增至(3.78±0.03)mmol/L(P<0.01).丹酚酸B镁盐2.5,5,10 mg/L能明显降低缺氧复氧引起的内皮细胞MDA生成量的增加,并且显著提高细胞活力和SOD的活性.同时,缺氧复氧还增加内皮细胞的胞内游离钙浓度(F340/F380由1.65±0.16增至1.89±0.28)和一氧化氮释放[由(7.5±1.3)μmol/L增至(16±5)μmol/L],并上调其eNOS mRNA的表达,但降低iNOS mRNA的表达(P<0.05).但在无钙的条件下,缺氧复氧对内皮细胞的胞内游离钙浓度、一氧化氮含量、eNOSmRNA和iNOS mRNA表达均没有影响.丹酚酸B镁盐能显著降低缺氧复氧引起的内皮细胞内钙升高和eNOS mRNA的表达,增加一氧化氮释放和iNOS mRNA的表达(P<0.05).结论:丹酚酸B镁盐能改善缺氧复氧引起的内皮细胞损伤,增加内皮细胞一氧化氮的释放.丹酚酸B镁盐提高一氧化氮合成的这种机制可能与其改善内皮细胞缺氧复氧损伤有关.
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丹酚酸B镁盐对兔洗涤血小板聚集和5-HT释放反应的影响
目的:研究丹酚酸B镁盐(magnesium lithospermateB)对血小板聚集和5-HT释放功能的影响及其作用机制.方法:比浊法评价兔洗涤血小板的聚集反应;荧光分光光度法和放射免疫法观察血小板的5-HT与TXA2的释放;用Fura 2荧光探针测定血小板胞内钙浓度变化.结果:丹酚酸B镁盐50-800 mg/L对凝血酶或花生四烯酸诱导的血小板聚集反应有剂量依赖性的抑制作用,当体系无外Ca2+存在,丹酚酸B镁盐的抑制作用增强,IC50o为102 mg/L.药物对血小板的5-HT释放也有剂量依赖性的抑制作用,但对AA激发的TXA2释放无影响.同时,丹酚酸B镁盐对凝血酶激发的胞内钙升高有明显的抑制作用,并降低静息血小板[Ca2+]i.结论:丹酚酸B镁盐对体外洗涤血小板的聚集和5-HT释放反应有明确的抑制作用,可能与影响血小板胞内Ca2+浓度的机制有关.
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丹酚酸B镁盐对自由基的清除作用和对脂质过氧化的抑制作用
目的:研究丹酚酸B镁盐对过氧化脂质生成的影响和对自由基的清除作用.方法:不同浓度的丹酚酸B镁盐与大鼠组织匀浆或自由基发生系统共浴后,比色法观察它对过氧化脂质生成的抑制作用和对自由基的清除作用.结果:丹酚酸B镁盐抑制组织匀浆的脂质自氧化或硫酸亚铁和维生素c激发的脂质过氧化.在肝组织匀浆,丹酚酸B镁盐10 mg/L对两者的抑制率分别是69.2%,57.7%.丹酚酸B镁盐可清除黄嘌呤/黄嘌呤氧化酶系统产生的氧阴离子和Fe2+-H2O2系统产生的羟自由基.结论:丹酚酸B镁盐能抑制脂质过氧化并对自由基有一定的清除作用.
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丹酚酸B镁盐抑制低氧诱导内皮细胞钙内流和一氧化氮释放
目的:研究丹酚酸B镁盐对低氧引起的内皮细胞内钙升高和一氧化氮释放增加的抑制作用.方法:培养的人脐静脉内皮细胞暴露在95%N2+5%CO2条件下30分钟.内皮细胞的损伤用染料排除实验和LDH的释放来评价.胞内游离钙浓度用钙荧光探针Fura 2-AM测定.一氧化氮含量用一氧化氮试剂盒测定.内皮型一氧化氮合酶(eNOS)mRNA和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA的表达用半定量逆转录聚合酶链式反应检测.结果:低氧引起内皮细胞的活力由正常条件下(93.0±2.6)%降至(85.5±2.1)%(P<0.01),并导致内皮细胞LDH的释放由(41±28)U/L增加至(141±68)U/L(P<0.01).丹酚酸B镁盐5 mg/L和10 mg/L能明显提高内皮细胞活力和降低LDH释放量.同时,低氧还显著增加内皮细胞的胞内游离钙浓度和一氧化氮释放,并上调其eNOS mRNA和iNOS mRNA的表达(P<0.01).丹酚酸B镁盐5 mg/L和10 mg/L能抑制其增加(P<0.01),但在无钙的条件下,低氧对其均没有影响.结论:丹酚酸B镁盐能改善低氧引起的内皮细胞损伤,抑制低氧引起的内皮细胞内钙浓度的升高,一氧化氮释放,eNOS和iNOS mRNA表达的增加.丹酚酸B镁盐对一氧化氮产生和eNOSmRNA表达的抑制可能与其抑制低氧引起内皮细胞的胞外钙内流有关.