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反相高效液相色谱法分析米曲霉发酵液中的圆弧偶氮酸
为建立米曲霉培养液中圆弧偶氮酸的检测方法,采用4%乙酸水溶液(三氟乙酸调至pH 2.2)与乙腈配比做流动相(55+45),选择280 nm紫外吸收波长,测定米曲霉发酵液中的圆弧偶氮酸,圆弧偶氮酸在C18色谱柱上获得良好的分离,检出限为0.002 μg/mL;麦芽汁-蛋白胨培养液、麦芽汁-酵母膏培养液、马铃薯-酵母膏培养液中的圆弧偶氮酸回收率分别为93.4%、95.2%、96.7%;RSD分别为4.3%、3.4%、3.2%.该方法适宜米曲霉发酵液中圆弧偶氮酸的检测.
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维生素C对脱氧雪腐镰刀菌烯醇诱导的单个核细胞凋亡及增殖抑制作用的影响
目的 探讨维生素C(vitamin C,VC)预处理对脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)诱导的人外周血单个核细胞(human peripheral blood mononuclear cells,HPBMC)凋亡及其相关基因表达和增殖抑制作用的影响.方法 采用流式细胞术(flow cytometry,FCM)和蛋白印迹(Western blotting)方法研究不同剂量VC预处理后,DON对HPBMC凋亡及相关基因Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达影响的变化,同时观察VC预处理对DON引起的增殖抑制作用的影响.结果 FCM检测结果表明,终浓度为2000μg/L的DON可诱导体外培养的HPBMC凋亡,其凋亡率为(28.82±1.67)%,25 μmol/L VC预处理可明显抑制DON诱导的体外培养HPBMC凋亡(22.39±1.05)%,P＜0.05,而100 μmol/L VC预处理则可明显增高DON诱导的HPBMC凋亡(36.07±2.92)%,P＜0.05.Western blotting分析结果表明,25 μmol/L VC预处理可明显降低DON诱导的HPBMC Bax和caspase-3蛋白高表达,同时使DON抑制的Bcl-2蛋白表达明显升高.100 μmol/L VC预处理可明显促进DON诱导的Bax和Caspase-3蛋白的高表达,但对DON抑制的Bcl-2表达无明显影响.不同剂量VC(25 μmol/L和100 μmol/L)预处理均可降低DON对HPBMC增殖的抑制作用(P＜0.05),但不同剂量VC之间没有显著差异.结论 25μmol/L VC预处理可一定程度地抑制DON诱导的HPBMC凋亡及凋亡相关基因的异常表达,而100 μmol/L VC则促进DON诱导的HPBMC凋亡.不同剂量VC预处理可以明显降低DON对HPBMC的增殖抑制作用.
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维生素C对脱氧雪腐镰刀菌烯醇诱导的单个核细胞HLA-Ⅰ表达抑制作用的影响
目的 探讨不同剂量维生素C(vitamin C,VC)对脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)诱导的体外培养人外周血单个核细胞(human peripheral blood mononuclear cells,HPBMC)HLA-Ⅰ表达抑制作用的影响.方法 采用流式细胞术(flow cytometry,FCM)、免疫细胞化学和蛋白印迹(Western blotting)方法研究了不同剂量(25 μmol/L和100 μmol/L)VC预处理对DON诱导的HPBMCHLA-Ⅰ表达抑制作用的影响.结果 FCM定量检测结果表明,DON处理组HPBMC HLA-Ⅰ的表达与正常对照组相比明显降低(FI值0.88±0.02比1.00±0.03,P＜0.05).25μmol/L和100 μmol/LVC预处理+DON组HPBMC HLA-Ⅰ表达的FI值分别为1.15±0.06和1.10±0.02,均明显高于DON处理组(0.88±0.02,P＜0.05).同时,25 μmol/L和100μmol/L VC单独处理组HPBMC HLA-Ⅰ的表达量也均明显高于对照组(FI值1.28±0.03和1.25±0.05比1.00±0.03),表明VC可在一定程度上促进体外培养的HPBMC HLA-Ⅰ表达(P＜0.05).免疫细胞化学结果表明,与DON处理组相比,两种不同剂量VC预处理+DON组HLA-Ⅰ表达阳性的细胞百分率比DON处理组明显增高(70.10%±6.90%和64.50%±5.50%比42.20%±4.30%,P＜0.05).蛋白印迹同样证实了以上结果.结论 VC可一定程度的拮抗DON对体外培养的HPBMC HLA-Ⅰ表达的抑制作用.
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中国94份玉米饲料原料中真菌及其毒素污染状况调查
目的：调查中国玉米饲料原料中真菌及其毒素的污染状况。方法2014年2月份分别从安徽、河北、黑龙江、吉林、江苏、辽宁、内蒙古和山东8个省份采集玉米饲料原料样品，共计94份。采用高效液相色谱-串联质谱法同时检测样品中黄曲霉毒素（AF）、A类和B类单端孢霉烯族化合物、玉米赤霉烯酮（ZEN）共12种真菌毒素的含量；并对样品中的污染真菌进行鉴定和计数。结果36.2%（34/94）的样品受到不同程度的AF污染，以AFB1含量高，含量范围为0.3~181.3μg/kg；其次为AFB2，含量范围为1.0~74.3μg/kg；7份样品（7.5%，7/94）AFB1含量超过我国规定的限量标准（50μg/kg）。A类单端孢霉烯族化合物的污染水平均较低，含量范围为0.1~10.5μg/kg。B类单端孢霉烯族化合物以脱氧雪腐镰刀菌烯醇（DON）的污染为严重，检出率为100%，含量范围为0.7~606.6μg/kg，中位数为66.3μg/kg，但所有样品中DON的含量均低于我国规定的限量标准（1000μg/kg）。76.6%（72/94）的样品检出ZEN，中位数为36.9μg/kg；3份样品（3.2%，3/94）ZEN含量超过我国规定的限量标准（500μg/kg）。真菌污染调查表明，所有样品均受到不同程度的真菌污染（5.0~1.4×105 CFU/g），分别有18份和3份样品的带菌量超过限用标准和禁用标准。曲霉属、青霉属、镰刀菌属、木霉属和毛霉属是主要的污染真菌，其检出率分别为71.3%（67份）、60.6%（57份）、71.3%（67份）、27.7%（26份）和24.5%（23份）。串珠镰刀菌的检出率[73.4%（69/94）]高于黄曲霉的检出率[41.5%（39/94）]。结论本实验发现玉米原料受AF和A类单端孢霉烯族化合物污染的水平较低，主要受到B类单端孢霉烯族化合物DON及其衍生物和ZEN的污染；同时还受到曲霉属、青霉属、镰刀菌等多种真菌的污染。
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伏马菌素与黄曲霉毒素对SD大鼠联合毒性的研究
目的 探讨伏马菌素B1(fumonisin B1,FB1)和黄曲霉毒素B1(aflatoxin B1,AFB1)对SD大鼠的联合毒性作用.方法 雄性SD大鼠按体重分为5组,每组12只,分别灌胃给予受试物(100μg/kg bw FB1、100μg/kg bw AFB1、100μg/kg bw FB1+100μg/kg bw AFB1、50μg/kg bw FB1+50μg/kg bw AFB1、蒸馏水),连续灌胃30 d,观察动物的生长发育、食物利用情况、血液学、血生化指标及脏器组织病理学的改变情况.结果 实验结束时100μg/kg bw FB1+100μg/kg bw AFB1组体重增重为(164.9±19.8)g,食物利用率为(25.3±1.6)%,低于实验对照组体重增重为(203.7±17.1)g,食物利用率为(28.1±1.2)%,也低于其余各实验组(P＜0.05),而其余各染毒组与实验对照组间的差异无统计学意义(P＞0.05);各实验组动物肝功能指标血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、γ-谷氨酰胺转移酶(γ-GT)水平升高,且FB1+AFB1组的升高程度较单独给予FB1和AFB1严重;同时FB1+AFB1高剂量组动物肝脏、肾脏重量降低,肝脏出现明显病理变化,血清中超氧化物歧化酶(SOD)活力降低,丙二醛(MDA)水平升高等.结论 两种真菌毒素存在联合毒性作用.本研究结果为进一步探讨两种真菌毒素同时暴露对人群健康的危害与联合作用.
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中国第5次总膳食研究中7种真菌毒素的污染及膳食暴露分析
目的 了解我国膳食中7种真菌毒素的污染水平和居民膳食摄入量.方法 中国总膳食研究根据当地居民的食物消费量进行食物聚类,由聚类结果形成采样单.根据采样单,各省份在3个调查点采样,将各采样点采集的同一食物样品按相同比例混合,烹调加工后,制得混合的膳食样品.样品包括谷类、豆类、薯类、肉类、蛋类、水产类、乳类、蔬菜类、水果类、糖类、饮料与水、酒类、调味品等13个食物类别,调味品在烹调中使用,因此,供测定的样品共12类.本次研究包括20个省份的12类食物样品,共240份混合膳食样品.采用超高效液相色谱-串联质谱方法测定杂色曲霉素、桔青霉毒素、环匹阿尼酸、串珠镰刀菌、胶黏毒素、霉酚酸和疣孢青霉原等7种真菌毒素的污染水平,估算居民的膳食摄入量.结果 在检测的7种真菌毒素中,霉酚酸、胶黏毒素和疣孢青霉原未检出,环匹阿尼酸在豆类中的含量范围为0.47~1.57μg/kg、在酒类中的含量范围为0.19~2.26μg/kg,检出率为7.1%(17/240);杂色曲霉素在广西的水产、北京的糖类、辽宁的饮料中的含量分别为2.88、0.01、0.53μg/kg,在水产中的含量范围为0.70~1.76μg/kg,检出率为2.9%(7/240);桔青霉毒素在四川的水果中的含量为5.31μg/kg;串珠镰刀菌在吉林的乳类中的含量为3.60μg/kg.根据膳食暴露分析,我国一般人群7种真菌毒素的暴露量较低.霉酚酸、胶黏毒素和疣孢青霉原未检出,其他4种毒素的暴露量分别为0.000~8.132(桔青霉毒素)、0.000~27.448(杂色曲霉素)、0.000~3.026(环匹阿尼酸)、0.000~62.847 ng·kg-1·d-1(串珠镰刀菌).结论 在检测的杂色曲霉素等7种真菌毒素中,环匹阿尼酸、杂色曲霉素、桔青霉毒素和串珠镰刀菌仅在某些地区个别膳食中检出,且膳食暴露水平低;但环匹阿尼酸在酒类中的污染水平得到关注.
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3种真菌毒素诱发NIH小鼠肺癌的实验研究
自20世纪70年代以来,我室对河北省肿瘤高发区居民饮食真菌毒素与恶性肿瘤发生的关系进行了系列研究.结果发现,杂色曲霉素(sterigmatocystin,ST)、黄曲霉毒素G1(aflatoxin,AFG1)和脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)均是肿瘤高发区当地居民饮食中的优势污染真菌毒素.应用高发区真菌毒素污染食物或含有ST、AFG1的真菌培养物可诱发多种实验动物肺癌发生.同时体外研究也表明,ST对人胚肺细胞具有致癌作用.
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大骨节病关节软骨真菌毒素环境反应基因表达谱研究
目的 比较分析真菌毒素环境反应基因在大骨节病(Kashin-Beck disease,KBD)和正常关节软骨中的表达谱差异,探讨真菌毒素环境反应基因与KBD软骨损伤的关系.方法 采集9例KBD患者和9例正常对照关节软骨样本,提取总RNA.采用Agilent基因表达芯片评估真菌毒素环境反应基因在软骨样品中的表达量,并计算每个基因在KBD和正常对照软骨中表达量的比率(简称表达率).采用GSEA软件计算每个基因功能分类表达量的NES指数及P值.结果 ①T-2毒素、脱氧镰刀菌烯醇、玉米赤霉烯酮、黄曲霉毒素B1、伏马菌素B1和赫曲霉毒素A相关的15个环境反应基因在KBD和正常对照关节软骨中的表达水平存在差异(表达率＞2.0或＜0.5),其中13个基因在KBD软骨中上调,包括BAX、BCL2、COL5A2、FER1L3、GSTT2、IGFBP2、IGFBP4、PDE8B、SOCS3、THBS1、TMSL8、VGLL3和TUBB2A(表达率＞2.0)；2个基因在KBD软骨中下调,包括POSTN和FABP4(表达率＜0.5).上述15个基因功能主要涉及胶原、细胞凋亡、代谢和生长发育等.②真菌毒素相关的4个凋亡基因功能分类和5个生长发育基因功能分类在KBD关节软骨中上调(NES＞0),包括ANTI_APOPTOSIS、REGULATION OF PROGRAMMED_CELL_DEATH、APOPTOSIS_GO、EGULATION_OF_APOPTOSIS、ORGAN MORPHOGENES IS、ANATOMICAL_STRUCTURE_ DEVELOPMENT、ORGAN_DEVELOPMENT、SYSTEM DEVELOPMENT和REGULATION—OF_DEVELOPMENTAL_PROCESS (NES＞0且P＜ 0.05).结论 KBD软骨中存在多种真菌毒素的环境反应基因表达且显著不同于正常对照,提示真菌毒素可能通过影响相关环境反应基因在关节软骨中的表达,诱发软骨细胞功能障碍和关节软骨损伤.
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真菌毒素检出现状及其相关疾病
真菌毒素(Mycotoxins)是由真菌产生的具有毒性的二级代谢产物,广泛污染农作物、食品及饲料等植物性产品.人类若误食受污染的食品,就会中毒或诱发一定疾病,甚至癌症[1].真菌毒素中毒早的记载是麦角中毒,在11世纪的欧洲被称为“圣安东尼之火”.历史上多次出现严重的真菌毒素中毒事件,如1913年,俄罗斯东西伯利亚发现食物中毒性白细胞缺乏病;1952年,美国佐治亚州发生动物急性致死性肝炎;1960年,英国发生火鸡X病;1964年,西德报道曲霉所致胎儿流产;1968年,埃及发生单蹄兽脑软化症爆发等[2].
