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利用国产IVIg分离纯化抗-Aβ初探
目的 利用国产IVIg初步探讨抗-Aβ的分离纯化技术.方法 首先,用人工合成的人源Aβ1-42进行聚合以制备Aβ寡聚体并通过SDS-PAGE对其进行鉴定.其次,通过偶联缓冲液(0.6 mol/L柠檬酸钠、0.2 mol/L碳酸钠,PH:10)将制备好的Aβ偶联到UltraLink Biosupport凝胶上,然后将稀释后的IVIg加入到偶联好的凝胶上,经过平衡(0.1 mol/L PBS,PH:7.4)、洗涤(0.1 mol/L PBS,PH:7.4)、洗脱(0.1 mol/L甘氨酸缓冲液,PH:2.2),从而分离纯化出抗-Aβ.后,通过ELISA和SDS-PAGE鉴定纯化出的抗-Aβ抗体.结果 聚合的Aβ1-42除了合有少量尚未聚合的单体外,主要为不同分子量的寡聚体(如:三聚体、八聚体、十二聚体等).所获得抗-Aβ回收率为21.1％、比活为9 671.9 ng/mg、提纯倍数为248.结论 使用离心柱法亲和层析可从国产IVIg制品中分离纯化出抗-Aβ.
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如何全面评价静注人免疫球蛋白的安全性、有效性和耐受性
静注人免疫球蛋白(IVIg)是治疗原发性免疫缺乏症、继发性免疫缺陷病、自身免疫性疾病(川崎病、特发性血小板减少性紫癜)的有效药物.从1990年至今,IVIg的临床应用已超过说明标签规定的适应证;全世界IVIg消费从1992年的19.4吨增加至2003年的52.6吨[1];中国IVIg的需求量近几年也增长明显,并且国产IVIg已出口至一些国家多年.
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静注人免疫球蛋白生产工艺对活化凝血因子Ⅺ残留水平的影响研究
目的 评估本公司静注人免疫球蛋白(IVIG)的生产工艺对活化凝血因子Ⅺ(FⅪa)的去除能力,以期确保产品的安全性.方法采用基团显色法,对9个投浆批次制品低温乙醇血浆蛋白分离纯化阶段,和对应3个批次制品组分Ⅱ(FⅡ)沉淀合并精制,以及制剂阶段的各工艺步骤中,在制品的FⅪa含量进行了研究.结果低温乙醇分离工艺过程中,FⅠ+Ⅲ过滤步骤将FⅪa含量由(8.1±1.3)mU/mL(FⅠ+Ⅱ+Ⅲ沉淀溶解液),降到低于2.0mU/mL的检测下限(FⅠ+Ⅲ上清液);制剂阶段中低pH 孵放步骤,则将原液和半成品的FⅪa含量由(15.4±1.7)mU/mL(原液超滤配制前),分别降至(2.9±0.9)mU/mL 和(2.8±0.6)mU/mL.结论本公司IVIG 制品中FⅪa含量较低,现有的生产工艺可以有效确保FⅪa的去除,从而进一步降低了IVIG 潜在的致血栓风险.
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试析环孢素软胶囊联合静注人免疫球蛋白治疗大疱性皮肤病的应用价值
目的：研究环孢素软胶囊联合静注人免疫球蛋白治疗大疱性皮肤病的应用价值。方法选取我门诊2012年6月～2015年6月收治的大疱性皮肤病患者68例为研究对象，将其随机分为两组，对照组患者采用醋酸泼尼松片进行治疗，观察组患者采用环孢素软胶囊联合静注人免疫球蛋白进行治疗，对比两组患者的治疗效果。结果观察组总有效率显著高于对照组。结论环孢素软胶囊联合静注人免疫球蛋白治疗大疱性皮肤病的疗效显著，在临床上值得广泛推广。
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激活补体试验检测静注人免疫球蛋白 Fc 段生物学活性的优化
优化激活补体试验的条件，完善静注人免疫球蛋白Fc段生物学活性的检测方法。方法采用补体活化经典途径的原理，分别探讨致敏红细胞密度和贮存时间对人免疫球蛋白 Fc段生物学活性检测结果的影响；比较手工法和微孔板分光光度法检测Fc段生物学活性的检测结果。结果在致敏红细胞A541 nm＝1．3和致敏红细胞贮存5 d时，检测结果较稳定。微孔板分光光度法检测优于手工法。结论完善了人免疫球蛋白Fc段生物学活性的检测方法，检测结果准确、重复性好。
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层析法从血浆分离静注人免疫球蛋白及其初步检定
目的：实验尝试采用多步柱层析的工艺取代乙醇低温沉淀的方法，能高效的从血浆中获得IVIG产品。方法：通过亲和层析、离子交换一套工艺纯化出IVIG产品，进而按照枟中华人民共和国药典枠对静注人免疫球蛋白（pH4）及其关键指标进行了检测。在此基础上还采用免疫浊度法等方法，对其纯度和非目的蛋白构成与国际产品进行比较。结果：工艺获得IVIG产品的关键性指标检测均达到枟中华人民共和国药典枠的要求，其质量不低于现有国际同类产品。结论：本工艺能以较高回收率获得高质量的IVIG产品。
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静注人免疫球蛋白中IgG含量检测方法的探讨
为了更好地进行生产质量控制,快速、准确的测定静注人免疫球蛋白中的IgG含量.实验中对2001～2008年的静注人免疫球蛋白中的IgG含量检测结果进行了抽样统计分析.分析结果表明:样品40倍稀释后测得的吸光值与标准曲线第三点的吸光值无显著性差异;样品40倍稀释后测得的IgG含量与样品进行20、30、40倍三个稀释度测得的IgG含量的平均值无显著性差异.从而证明,样品40倍稀释后测得的IgG含量可以代表该批样品的IgG含量,无需进行20、30倍的稀释.检测方法会更省时、省力、省材料.
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静注人免疫球蛋白细菌内毒素定量检测方法的探讨
目的 探讨动态浊度法定量检测静注人免疫球蛋白细菌内毒素含量.方法 参照《中国药典》2010年版三部附录中细菌内毒素检查法的规定,对静注人免疫球蛋白细菌内毒素含量检测方法进行了探讨,制备了标准曲线、进行了可靠性试验和干扰试验,并将动态浊度法检测结果与家兔法的结果进行了比较.结果 动态浊度法测定的标准曲线的相关系数均大于0.98,静注人免疫球蛋白经16倍稀释后,干扰试验的回收率在50％ ～ 200％之间,完全消除其对鲎试剂与细菌内毒素凝集反应的干扰,并且动态浊度法与家兔法的检测结果一致.结论 动态浊度法定量测定静注人免疫球蛋白中细菌内毒素含量,结果准确,操作简单,并且与家兔检查热原的结果一致.
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采用多种抗原测定静注人免疫球蛋白(pH4)中抗体Fc段生物学活性的初探
目的 初步探讨采用多种抗原测定静注人免疫球蛋白(IVIG)(pH4)中抗体的Fc段生物学活性,了解IVIG中抗体的Fc段生物学活性.方法 采用补体活化的经典途径中免疫复合物激活补体的方法,将不同浓度的麻疹病毒、风疹病毒、乙肝表面抗原(HBsAg)、破伤风类毒素、脑膜炎球菌P64k外膜蛋白和白喉类毒素6种抗原分别致敏人O型血红细胞形成红细胞-抗原结合物；然后,6种致敏红细胞分别与IVIG孵育,与特异性抗体形成红细胞-抗原-抗体复合物；后,此复合物与补体反应,在541 nm波长处读取吸光值,并绘制溶血反应动力学曲线,分别计算IVIG中针对上述6种抗原IgG的Fc段生物学活性.采用此方法,用6种抗原致敏的红细胞测定IVIG的Fc段生物学活性10次,验证此方法的重复性.结果 麻疹病毒、风疹病毒、HBsAg、破伤风类毒素和脑膜炎球菌P64k外膜蛋白致敏的红细胞分别与供试品和补体反应后,测定的溶血反应动力学曲线较平缓,而白喉类毒素致敏的红细胞与供试品和补体反应后,测定的溶血反应动力学曲线下降明显,呈典型的“S”型曲线.计算结果显示,WIG中针对此六种抗原的抗体Fc段生物学活性相对于参考品均大于80％.Fc段生物学检测方法重复性较好.结论 采用多种抗原分别致敏红细胞,可以用来检测IVIG中多种抗体的Fc段生物学活性,为深入了解IVIG制品中的多种抗体的Fc段生物学活性奠定了基础.
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静注入免疫球蛋白变性后的毒性及作用机理研究
目的:研究变性后静注人免疫球蛋白的毒性及致死机理.方法:用静脉注射法分别给小鼠和家兔注射不同来源的人免疫球蛋白样品,观察对2种动物的毒性作用;用硝酸和高温变性人免疫球蛋白查找毒性致死原因,并用血细胞凝集实验研究毒性致死机理.结果:2号样品和变性后的人免疫球蛋白均可通过血细胞凝集,导致心脑缺血而使动物迅速死亡;不同厂家的人免疫球蛋白热稳定性存在差异.结论:变性后的人免疫球蛋白可对动物产生致死性毒性,在日常的运输和保管过程中要注意温度的控制,避免因高温而使人免疫球蛋白药品变性.
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储存温度对静注人免疫球蛋白质量影响的研究
目的:通过比较不同温度对静注人免疫球蛋白(IVIG)质量的影响,为该类制品的运输和储存温度控制提供科学依据.方法:设置不同的考核温度,采用高效液相色谱法、聚丙烯酰胺凝胶电泳法和该品种药典规定的部分检测项目和方法进行分析.结果:37℃孵放7 d或45℃以上温度孵放1 d,免疫球蛋白将形成聚合体和裂解片断;高温(60℃以上)使免疫球蛋白快速聚合,形成大量二聚体或高分子聚合体.聚合体形成后使生物学活性及部分理化性质明显降低和改变.结论:静注人免疫球蛋白应严格执行4℃冷藏保存条件,运输时间超过24 h必须使用冷藏车进行冷链运输.
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早期静注人免疫球蛋白治疗重症手足口病的疗效
目的 分析重症手足口病运用早期静注人免疫球蛋白治疗的效果.方法 从2013年1月—2016年1月选取该院所收治500例重症手足口病患者实施研究,将患者按照挂号前后顺序而分为两组,即实验组(250例)和常规组(250例),常规组运用常规方法治疗,而实验组在此基础上增加早期静注人免疫球蛋白进行治疗,比较两组患者疗效以及体温消退、食欲改善以及住院的平均时间.结果 实验组患者总有效率是94.00％,常规组是88.00％,实验组高于常规组,差异有统计学意义(P<0.05);实验组患者体温消退、食欲改善以及住院的平均时间都比常规组短,差异有统计学意义(P<0.05).结论重症手足口病运用早期静注人免疫球蛋白治疗,效果显著,同时缩短患者的住院时间,值得运用和推广.
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静脉注射人免疫球蛋白加阿司匹林治疗川崎病30例
目的：探讨静脉注射人免疫球蛋白加阿司匹林治疗川崎病的疗效。方法：采用静脉注射人免疫球蛋白加阿司匹林的方法治疗川崎病患者30例，治疗结束后记录病情变化，进行疗效评价，并随访3个月，观察远期疗效。结果：治疗2周后，治愈率为70%，总有效率为86.67%；随访3个月后，治愈率为70%，总有效率为83.33%。结论：静脉注射人免疫球蛋白加阿司匹林治疗川崎病疗效确切，效果可靠，值得临床推广应用。
