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黄芪多糖在不同干预条件下对高糖刺激小鼠肾小球足细胞Desmin表达的影响
目的:体外模拟高糖病理微环境,探讨黄芪多糖对小鼠肾小球足细胞Desmin表达的影响.方法:试验一:体外培养小鼠肾小球足细胞,分为5组,D-葡萄糖30mmol/L+黄芪多糖干预组(0g/L、0.1g/L、0.2g/L、0.4g/L和0.8g/L);干预时间为72h.试验二:分为7组,分别为D-葡萄糖30mmol/L+黄芪多糖干预(浓度为0.Xg/L),干预时间分别为0h、3h、6h、12h、24h、48h和72h.分别采用流式细胞计数检测各组足细胞Desmin表达.结果:随着黄芪多糖干预浓度的递增,足细胞表面Desmin蛋白表达逐渐下调,呈浓度依赖性(P＜0.05);随着黄芪多糖干预时间的延长,足细胞表面Desmin表达逐渐下调,呈现时间依赖性(P＜0.05).结论:在高糖刺激下,黄芪多糖干预可以降低肾小球足细胞Desmin表达,是黄芪治疗糖尿病肾病蛋白尿的可能作用靶点.
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通阳活血方对兔缺血再灌注窦房结细胞凋亡及细胞骨架蛋白Desmin的影响
目的:观察通阳活血方对模拟缺血再灌注损伤兔窦房结细胞凋亡及骨架蛋白Desmin的影响,探讨其治疗病态窦房结综合征的机制.方法:取新生乳兔窦房结细胞,以缺氧缺糖模拟缺血,以恢复氧和糖的供应模拟再灌注造成窦房结细胞损伤模型.正常对照组与模型组给予等体积培养基,通阳活血方高、中、低剂量组分别给予相应浓度药物(终浓度分别为100、20、10μg/mL),运用流式细胞仪、激光共聚焦显微镜观察各组窦房结细胞凋亡率、细胞骨架蛋白Desmin形态的变化.结果:模型组细胞凋亡率较正常组明显升高(P＜0.01);细胞骨架蛋白Desmin裂解明显.通阳活血方高、中、低剂量组细胞凋亡率明显低于模型组(P＜0.01),Desmin平均荧光强度明显高于模型组(P＜0.01).结论:通阳活血方治疗病态窦房结综合征的机制可能与对抗缺血再灌注所致的窦房结细胞凋亡及保护细胞骨架蛋白Desmin形态结构有关.
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正常与损伤条件下乳鼠原代心肌细胞培养上清液对人骨髓间充质干细胞向心肌样细胞的诱导作用
目的 体外观察正常及损伤状态下的心肌细胞(CMs)培养上清液诱导人骨髓间充质干细胞(hMSCs)向心肌样细胞分化的作用.方法 体外分离培养hMSCs及乳鼠原代CMs,制备正常搏动状态及损伤状态下的CMs培养上清液,分别对传代hMSCs培养诱导27～30 d.倒置显微镜观察两组的细胞形态,免疫细胞化学染色检测两组心肌细胞特异性标志物cTnI及Desmin的表达.结果 hMSCs经正常搏动CMs上清诱导培养后,只有少数细胞变宽大,部分细胞表达cTnI,但不表达Desmin;经损伤CMs上清诱导培养后,hMSCs变为宽大,大部分细胞表达cTnI,部分细胞表达Desmin.定量分析,正常与损伤状态下培养上清液诱导细胞表达cTnI、desmin的阳性百分比及阳性表达强度OD值均有非常显著性差异(P<0.01).结论 正常与损伤状态下CMs培养上清液均可诱导hMSCs向心肌样细胞分化,CMs损伤状态下的细胞培养上清液更有利于促进其分化.
关键词： 人骨髓间充质干细胞(hMSCs) 心肌样细胞 细胞分化 cTnl Desmin -
左颈胸部滑膜肉瘤一例分析
临床资料患者,女性,36岁.因颈部左侧胀痛、不适2个月人院.曾于外院就诊,行CT、X线片、B超相关检查,报告为左锁骨下实质性肿物;遂行手术,记录如下:术中见肿物粘连紧密,活动性差、质硬,横径约5cm,高约2cm呈暗紫色,因切除肿物过程中,患者出现明显放射痛,为避免损伤神经及腋动脉,未全部切除;术后病理:找到癌细胞,不排除神经鞘瘤;为进一步诊治,入我院,会诊外院病理片示:梭形细胞肉瘤(Ⅰ-Ⅱ级),免疫组化结果:C.D99(+)、bcl-2(+)、CK19(+),actin弱(+),S-100、CD68、CD34、EMA、SMA、calponin、desmin均阴性;结合组织形态学及免疫组化,病变符合单相型滑膜肉瘤.
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“神舟10号”空间飞行对骨骼肌C2C12成肌细胞可塑性的影响
目的 研究空间飞行对骨骼肌C2C12成肌细胞增殖和分化可塑性的影响.方法 利用“神舟10号”飞船(Shenzhou-10,SZ-10)舱内环境,开展空间细胞学实验,并在地面同步模拟空间舱环境进行实验.进行天基与地基实验细胞的同步活细胞影像监测和细胞固定,天基实验细胞返回后与地基细胞同步开展细胞影像与免疫细胞化学的对比分析.结果 1)活细胞影像监测提示,与地基培养细胞相比,天基细胞培养48 h单核细胞(增殖)减少,且96 h仅见地基培养细胞中出现多核肌管(分化).2)免疫细胞化学分析表明,地基细胞48 h增殖标志蛋白MyoD表达显著增加,96 h有所下降,而天基培养细胞MyoD表达均显著减少;3)地基实验中48 h细胞开始融合分化,中间结蛋白Desmin阳性单核细胞数目明显增加,但在分化96 h后,Desmin阳性单核细胞数目减少,而3个核以上的肌管明显粗大且数目较多;而天基细胞48 h虽有Desmin阳性单核细胞,但比地基阳性细胞数目明显较少,分化96 h后肌管融合率(约30％)比地基96 h(约78％)显著减少.结论 空间飞行期间骨骼肌成肌细胞增殖分化的可塑性显著降低,这可能参与了空间飞行中失重性肌萎缩的形成.
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雷公藤多甙对糖尿病大鼠肾脏Desmin、Synaptopodin表达的影响
目的 探讨雷公藤多甙对糖尿病大鼠肾脏Desmin、Synaptopodin表达的影响.方法 30只雄性 SD 大鼠随机分为对照组(n=10)、糖尿病组(DM组,n=10)、治疗组(n=10)3 组.治疗组将雷公藤多甙片以 50mg·kg-1·d-1灌胃.于12周末检测 24h 尿蛋白量、血糖(Glu)、血肌酐(Scr)、血胱抑素C(Cys-C).HE 染色观察肾脏病理改变;免疫组化检测肾脏Desmin、Synaptopodin的表达情况.结果 3 组大鼠24h尿蛋白、Scr和Cys-C 差异有统计学意义.治疗组24h 尿蛋白、Scr和Cys-C均较糖尿病组低(P＜0.05),差异有统计学意义.与对照组比较,糖尿病组肾小球体积增大、系膜区基质明显增生、肾小球毛细血管袢受压、基底膜增厚,而治疗组较糖尿病组有所改善.免疫组化显示:3 组大鼠肾组织Desmin、Synaptopodin蛋白表达差异有统计学意义,糖尿病组Desmin表达较对照组高、Synaptopodin表达较对照组低(P＜0.05);治疗组Desmin表达较糖尿病组低、Synaptopodin表达较糖尿病组高(P＜0.05).结论雷公藤多甙可能通过下调糖尿病大鼠肾脏Desmin的表达、同时上调Synaptopodin表达,保护足细胞,减少尿蛋白,保护肾脏.
关键词： 糖尿病肾病 雷公藤多甙 Desmin Synaptopodin -
补肾活血方保护FSGS小鼠足细胞的实验研究
[目的]观察补肾活血方对局灶性节段性肾小球硬化(FSGS)小鼠足细胞骨架蛋白desmin,足细胞裂孔膜蛋白nephrin及肾母细胞瘤wt1的影响,探讨此组方保护足细胞的作用机制.[方法]以阿霉素诱导方式完成FSGS肾病模型制备,在1周之后以补肾活血方开展治疗(设为治疗组),时间持续6周.然后再设空白对照组与模型组.针对3组的尿、血及肾组织等进行收集,并检测体质量、血清白蛋白(ALB)、24 h尿白蛋白排泄率(UAER)以及尿白蛋白/尿肌酐比值(UACR)等.通过光镜针对肾组织形态变化情况进行观察分析,以免疫荧光完成小鼠的肾组织nephrin荧光强度测定工作;采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测3组肾组织当中的desmin、wt1表达水平.[结果]模型组UAER、UACR显著高于空白对照组与治疗组(P<0.01),模型组体质量和ALB显著低于空白对照组和治疗组(P<0.01).空白对照组nephrin免疫荧光表达具有连续性特征,而模型组则是具有少量点状或者片状特征,较空白对照组和治疗组表达明显减少.模型组当中的wt1 mRNA表达水平明显低于治疗组、空白对照组(P<0.01),而desmin mRNA表达水平明显超过空白对照组、治疗组(P<0.01).[结论]采用补肾活血组方可以降低FSGS小鼠蛋白尿,同时有可能和wt1、nephrin表达水平上调,以及desmin表达水平下调存在关系.
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五味子醇提液对阿霉素损伤足细胞中nephrin和desmin表达的影响
目的：观察五味子醇提液（SE）对阿霉素（ADR）诱导的体外足细胞损伤中足细胞裂孔膜蛋白nephrin和骨架蛋白desmin表达的影响，并探讨其作用机制。方法体外ADR作用于足细胞24 h，造成足细胞损伤后，加入含SE的培养基，继培养24 h。设对照组（0 mg/L ADR）、模型组（0.25 mg/L ADR）、SE干预组（250 mg/L SE+0.25 mg/L ADR）、SE组（250 mg/L SE）。免疫荧光法测定各组nephrin的表达；Western Blot检测各组nephrin和desmin蛋白表达；RT-PCR检测各组nephrin和desmin mRNA表达。结果免疫荧光结果显示对照组和SE组nephrin呈颗粒状或线性分布于细胞膜，模型组较对照组、SE组和SE干预组表达强度明显减少。模型组nephrin蛋白和mRNA表达较对照组显著减少，SE干预组nephrin蛋白和mRNA表达水平较模型组增加。模型组desmin蛋白和mRNA表达较对照组显著增加，SE干预组desmin蛋白和mRNA表达水平较模型组显著减少（均P<0.05）。SE和SE干预组的nephrin和desmin蛋白和mRNA表达水平与对照组差异无统计学意义。结论250 mg/L SE对体外培养足细胞无损伤作用，且SE能拮抗ADR对足细胞的损伤，这可能与SE可以上调nephrin和下调desmin的表达有关。
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冬虫夏草人工繁育品拮抗糖尿病肾病大鼠足细胞损伤的研究
目的:探讨冬虫夏草人工繁育品(ACOS)对糖尿病肾病(DN)大鼠足细胞损伤的保护作用.方法:将雄性SD大鼠分成对照组、DN模型组(高脂饲料及链脲佐菌素造模)、低剂量及高剂量ACOS干预组(分别用2.5 g/kg及5.0 g/kg每天灌胃,共8周).观察尿蛋白、血生化指标、肾功能、肾脏病理及足细胞标志蛋白表达变化.结果:13周试验结束时,模型组大鼠与对照组比较,胰岛素抵抗指数、血糖、尿蛋白及血肌酐水平显著增加;肾小球增大、系膜基质增多及足突增宽;nephrin、podocin、WT-1的mRNA和蛋白表达下调,desmin的mRNA和蛋白表达上调.上述差别均具有统计学意义(P＜0.05).ACOS干预后,上述所有指标均显著改善(P＜0.05).结论:大鼠模型试验显示ACOS可显著改善2型糖尿病并减轻DN的足细胞损伤.
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黄芪多糖对高糖刺激小鼠肾小球足细胞Desmin表达的影响
目的:体外模拟高糖病理微环境,探讨黄芪多糖对小鼠肾小球足细胞Desmin表达的影响.方法:将培养的小鼠肾小球足细胞分为:正常对照组、甘露醇高渗对照组、高糖组和黄芪多糖干预组,采用流式细胞术和real-Time PCR检测各组足细胞Desmin蛋白和mRNA的表达.结果:流式细胞术计数结果显示:黄芪多糖干预组小鼠肾小球足细胞表面Desmin阳性细胞百分率明显低于高糖组,差异有统计学意义(P＜0.05);较正常对照组和甘露醇高渗对照组,高糖组Desmin mRNA表达增加(P＜0.05);而相较高糖组,黄芪多糖干预组Desmin mRNA表达明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:在高糖刺激下,黄芪多糖干预可下调肾小球足细胞Desmin表达,是黄芪治疗DN蛋白尿的可能作用靶点.
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单根肌纤维法分离培养多裂肌卫星细胞及鉴定
背景:多裂肌的损伤、萎缩是临床各种腰背痛及功能障碍的主要来源之一,肌卫星细胞是肌肉干细胞,对肌肉的损伤修复起至关重要的作用.但目前尚缺少有关多裂肌卫星细胞分离培养方面的研究.目的:采用单根肌纤维法分离大鼠多裂肌卫星细胞并进行鉴定.方法:在体分离大鼠多裂肌,采用单根肌纤维法获得多裂肌卫星细胞,经反复差速贴壁法纯化,观察其形态变化并绘制细胞增殖曲线;以分化培养基进行诱导,观察其成肌分化情况;并采用免疫荧光法鉴定多裂肌卫星细胞标志蛋白Pax7、Myod、Desmin的表达.结果与结论:①单根多裂肌纤维经培养72 h后,可见肌纤维周围有大量长梭形或纺锤形细胞贴壁;②采用差速贴壁法纯化后,可见原代细胞呈圆形,高折光性,重新接种后24-48 h可贴壁,其生长呈"S"型;③以分化培养基诱导可出现较大肌管;④免疫荧光鉴定可见Pax7、Myod在肌卫星细胞的细胞核中为阳性反应,Desmin在细胞质中为阳性反应;⑤结果表明,单根肌纤维法可成功分离大鼠多裂肌卫星细胞,可用于未来多裂肌再生修复方面的研究.
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肥胖相关性肾病肾组织中nephrin desminWTI的表达
目的 研究肥胖相关性肾病患者肾小球足细胞病变,分析不同肾组织病理类型患者肾小球足细胞中neph-rin、desmin、WT1的表达和分布特征.方法 收集2001-2008年河北医科大学第二医院肾内科收治的16例经肾穿刺活检明确诊断的肥胖相关性肾病患者资料,根据其肾脏病理分为肥胖相关性肾小球肥大症(O-GM)组11例,肥胖相关性局灶节段性肾小球硬化症(O-FSGS)组5例.对照组5例,为外科切除的且已诊断为肥胖的肾脏肿瘤标本的正常皮质组织.应用免疫组织化学方法检测足细胞特异标志物nephrin、desmin、WT1,同时结合临床及肾组织病理有关指标的进行多因素分析.结果 nephrin、desmin、WT1在正常肾组织沿肾小球基底膜呈连续、线形分布.O-GM组nephrin、desmin、WT1的表达量降低,与对照组比较,差异无统计学意义,O-FSGS组nephrin、desmin、WT1的表达下降,呈点状、短线条状,较正常组织少,差异有统计学意义(P<0.05).O-FSGS组足细胞计数少于O-GM组,差异有统计学意义(P<0.01),且足细胞融合、微绒毛化改变和肾小球硬化数明显增多(P<0.05).结论 肥胖相关性肾病患者早期即出现肾小球足细胞中nephrin、desmin、WT1的表达和分布减少,随着病变的加重,这种变化愈发明显.
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Desmin在大肠癌与癌旁组织中的表达及意义
目的 探讨Desmin在大肠癌与癌旁组织中的的表达及其意义.方法 采用液质联用技术对18例新鲜的大肠癌患者的肿瘤组织及癌旁组织检测Desmin的表达情况.结果 通过液质联用技术对大肠癌肿瘤组织及癌旁组织进行分离分析,对有差异的蛋白质点进行质谱鉴定,Desmin在癌组织中较癌旁组织中表达降低,并通过免疫印迹进一步验证准确性.结论 Desmin蛋白的低表达可能与大肠癌的癌变有密切的关系.
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中枢神经系统周细胞表达结蛋白desmin
目的:本研究着重探讨中枢神经系统周细胞是否表达desmin.方法:取3周龄雄性Wistar大鼠,取其大脑和脊髓组织,分离提取培养脑微血管周细胞(BMP)和脊髓微血管周细胞(SCMP)两种周细胞,用周细胞非特异性标记物神经胶质抗原2(NG2)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)双标鉴定周细胞,并用免疫荧光方法定性定量测定两种周细胞表达desmin阳性率,免疫印记分析实验定量测定两种周细胞表达desmin.结果:观察刚分离得到的脑微血管和脊髓微血管,前者在长度和密度上多于后者,培养至第3天时,观察到BMP更趋向于聚集,而SCMP则更分散.培养至第9天时,两种周细胞基本铺满了培养皿.经用周细胞非特异性标记物NG2和α-SMA双标鉴定,确定分离得到的细胞为周细胞,免疫荧光和western blot实验结果表明两种周细胞均表达desmin,且SCMP表达desmin阳性率显著多于BMP(P＜0.001),SCMP表达desmin量显著多于BMP(P＜0.05).结论:中枢神经系统周细胞表达结蛋白desmin,表达量不同暗示了血脑屏障和血脊髓屏障之间存在差异.
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desmin基因exon6 A360P错义突变与慢型及潜在型克山病心肌损伤的关系
目的 探讨desmin基因exon6 A360P错义突变与克山病心肌损伤的关系及exon6 A360P错义突变是否是慢型及潜在型克山病损伤的易感基因.方法 在陕西省克山病病区黄陵县店头镇和非病区西安市长安区,采用单纯随机抽样的方法,抽取年龄相匹配的慢型和潜在型克山病患者(病例组)30例及病区(内对照组)和非病区对照(外对照组)各30例.采集外周血5 ml,乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝,盐析法制备基因组DNA.采用PCR方法,用特异性的Bsp1286 Ⅰ内切酶对可能发生突变的exon6位点进行酶切.设内对照,在desmin基因exon4位点进行酶切,判定标准为在122 bp和60 bp处各出现1个条带.琼脂糖凝胶电泳分析desmin基因exon6 A360P错义突变位点,判定标准为desmin基因exon6位点酶切后在184 bp和66 bp处各出现1个条带.结果 琼脂糖凝胶电泳结果显示,内对照desmin基因exon4在Bsp1286 Ⅰ酶切前,在182 bp处仅出现1条条带;在酶切后,被切成2个片段,在122 bp和60 bp处各出现1个条带.慢型及潜在型克山病患者desmin基因exon6在Bsp1286 Ⅰ酶切前和酶切后,均在250 bp处出现了1个条带;病区和非病区对照组desmin基因酶切后,也是在250 bp处出现了1个条带.3组结果相同,desmin基因exon6没有被Bsp1286 Ⅰ酶切开,A360P没有发生错义突变.结论 慢型和潜在型克山病患者未检出desmin基因exon6 A360P错义突变位点,desmin基因exon6 A360P错义突变不是克山病心肌损伤的易感基因.
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克山病患者心肌组织细胞凋亡及结构蛋白Desmin异常表达的研究
目的探讨细胞凋亡及结构蛋白Desmin异常表达与亚急型、慢型克山病的关系.方法应用原位末端标记法(TUNEL)及免疫组化技术在亚急型和慢型克山病患者心肌石蜡包埋组织切片上进行细胞凋亡及Desmin双重荧光染色,并应用共聚焦显微镜观察结果.结果克山病患者心肌组织中可见结构蛋白Desmin的异常荧光染色及细胞凋亡,有Desmin荧光染色变浅甚至消失,慢型克山病多表现为染色增强,或呈团状聚集于心肌细胞中间,或呈块状附于细胞膜下.凋亡细胞多见于有Desmin异常改变的心肌细胞、浸润的炎细胞、血管内皮细胞及一些间质细胞.结论细胞凋亡与结构蛋白Desmin异常参与克山病的发生与发展.
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α-SMA和Desmin在大鼠肝纤维化中纤维母细胞的表达
目的:肝脏内存在有两种纤维母细胞,一种是肝星形细胞(hepatic stellate cell HSC),一种是门脉周围的纤维母细胞,用免疲组化方法对这两种细胞群在肝纤维化(hepatic fibrosis HF)中活化后的细胞形态进行组织学鉴别.方法:Wistar系雄性鼠用于实验动物模型制作:CCl4腹腔注射和胆总管结扎(bile duct ligation BDL)诱导肝纤维化动物模型,用SABC法来检测.一次抗体为α-SMA和Desmin.结果:CCl4腹腔注射后48h中央静脉周围的星形细胞在α-SMA和Desmin染色呈强阳性;另外,BDL 96h后门脉区纤维母细胞在α-SMA,染色中显示阳性.而在Desmin染色中木发现有变化.结论:α-SMA在肝星形细胞和门脉区域的纤维母细胞有相同的阳性结果,Desmin被证明能够用于区别有活性的肝星形细胞和门脉区域的纤维母细胞.
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肾康丸对早期糖尿病肾病大鼠足细胞Nephrin、desmin表达的影响
糖尿病肾病(DN)是糖尿病的严重并发症和主要死亡原因之一,出现持续性蛋白尿提示病情不可逆转,直至终末期肾病(ESRD).因此早期控制、减少尿蛋白,对延缓DN的发生、发展,提高生存率有着重要的意义.近来研究认为足细胞及其裂孔隔膜上的蛋白分子nephfin、podocin、CD2
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结缔组织生长因子对足细胞相关蛋白表达的影响
目的:观察结缔组织生长因子(CTGF)对体外培养的足细胞整合素连接激酶(ILK)、nephrin和desmin表达以及细胞表面形态的影响,以进一步探讨CTGF介导足细胞损伤的机制. 方法:不同浓度rhCTGF(0、10、50ng/ml)干预足细胞24h,观察rhCTGF对ILK、nephrin及desmin表达影响的浓度效应.以浓度为50 ng/ml的rhCTGF干预足细胞0h、24h、48h,观察rhCTGF对ILK、nephrin及desmin表达影响的时间效应.分别用real time RT-PCR方法和Western blot方法检测ILK、nephrin及desmin mRNA表达水平和蛋白表达水平.采用扫描电镜技术观察rhCTGF对足细胞表面形态的影响. 结果:在基础状态下,足细胞表达其标志蛋白nephrin及少量desmin,10ng/ml rhCTGF可使desmin表达显著增加(P＜0.05),而nephrin表达显著下降(P＜0.05),随着rhCTGF浓度增加,desmin表达进一步增加(P＜0.05),而nephrin表达进一步减少(P＜0.05);rhCTGF刺激24h,足细胞desmin表达上调(P＜0.05),而nephrin表达下调(P＜0.05),48h,desmin表达进一步增加(P＜0.05),而nephrin表达进一步减少(P＜0.05).在基础状态下,足细胞表达一定量的ILK,rhCTGF能上凋足细胞ILK表达.扫描电镜显示,对照组足细胞胞体表面相对光滑,微绒毛较少;rhCTGF(50 ng/ml)刺激24h后,足细胞细胞表面形态发生改变,形成大量微绒毛. 结论:CTGF能引起足细胞nephrin表达下调,desmin表达上调,促进足细胞发生上皮-间充质转分化;CTGF能引起足细胞微绒毛化.同时,CTGF能诱导足细胞ILK表达增加,推测ILK表达上调可能是足细胞损害机制之一.
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SMA、 Desmin、 CD1O和Vimentin在特殊类型子宫肿瘤诊断中的应用
[目的]探讨SMA、Desmin、CD10和Vimentin在特殊类型子宫肿瘤诊断中的应用价值.[方法]收集特殊类型子宫肿瘤76例(子宫内膜间质肉瘤20例,癌肉瘤17例,平滑肌肉瘤10例,非典型平滑肌瘤16例,上皮样平滑肌瘤13例),免疫组化SP法检测各组织中平滑肌肌动蛋白( SMA)、结蛋白(Desmin)、CD10和波形蛋白(Vimentin)的表达.[结果]CD10与Vimentin在子宫内膜间质肉瘤和癌肉瘤中高表达,SMA和Desmin在非典型平滑肌瘤和上皮样平滑肌瘤中高表达,Vimentin在平滑肌肉瘤中高表达.[结论]SMA、Desmin、CD10和Vimentin在特殊类型子宫肿瘤的诊断中有重要意义.
