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多胺类似物DENSPM诱导人胶质瘤SNB19细胞凋亡
目的:探讨多胺类似物N1、N11-Diethylnorspermine(DENSPM)诱导胶质瘤SNB19细胞凋亡的机制.方法:用DENSPM处理SNB19细胞,MTS法检测细胞增殖率,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot法检测细胞黏连相关蛋白的含量.结果:细胞活力测定(MTS)法分析显示DENSPM能显著抑制SNB19细胞的增殖(P＜0.01),抑制率呈药物浓度依赖性;流式细胞术分析显示细胞凋亡率增加(P＜0.01),Western b1ot显示细胞黏连相关蛋白纤维连接蛋白、局部黏连激酶(FAK)、整联蛋白β1、整联蛋白α5的含量显著下降.结论:DENSPM可诱导人神经胶质瘤SNB19细胞的凋亡,而诱导细胞凋亡的可能机制是细胞黏连相关蛋白的减少,提示DENSPM具有治疗胶质瘤的潜在临床应用价值.
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多胺类似物CHEN,CPEN和BENS对Hela宫颈癌细胞生长的影响
目的:探讨多胺类似物CHEN,CPEN和BENS对宫颈癌细胞株Hela生长的影响.方法:MTT法检测细胞的生长状况;亚凋亡峰流式细胞分析法及DNA片段化分析法检测细胞凋亡;化学分析法测定精胺氧化酶(SMO)活性.结果:3种多胺类似物均可显著抑制Hela癌细胞增殖,抑制作用随药物浓度加大而增加,其细胞毒性大小依次为CHEN>CPEN>BENS.细胞凋亡分析发现,CHEN,CPEN和BENS可诱导Hela细胞程序性凋亡,导致凋亡峰出现和明显的DNA片段化.用10pmol·L-1 CHEN,CPEN和BENS处理Hela细胞24 h可显著性抑制精胺氧化酶活性.结论:CHEN,CPEN和BENS通过诱导细胞凋亡而抑制Hela癌细胞生长,其诱导凋亡的作用与精胺氧化酶活性无关.
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N1-乙基-N11-(环庚烷基)甲基-4,8-二氮杂癸烷对宫颈癌细胞的作用
目的 探讨N1-乙基-N11-(环庚烷基)甲基-4,8-二氮杂癸烷(CHEN)对宫颈癌细胞株Siha的抗肿瘤作用.方法 MTT法检测细胞的生长情况;流式细胞术及DNA片段化分析法检测细胞凋亡;化学分析法测定精胺氧化酶(SMO)活性.结果 CHEN可显著抑制Siha宫颈癌细胞生长,且抑制作用随药物浓度增加而增强,用10 μmol·L-1 CHEN处理细胞, 24和48 h生长抑制率分别高达61%和75%.细胞凋亡分析发现,CHEN处理可诱导Siha细胞凋亡,导致凋亡峰出现和细胞核DNA片段化.在0～20 μmol·L-1浓度范围内,CHEN作用24 h对Siha细胞SMO活性无明显影响.结论 CHEN通过诱导细胞凋亡而抑制宫颈癌细胞生长,该抑制作用与SMO活性无关.
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多胺类似物DENSPM对人胶质母细胞瘤SNB19细胞生长的影响
目的 探讨多胺类似物DENSPM对人胶质母细胞瘤SNB19细胞生长的影响.方法 采用MTS法、流式细胞术、高效液相色谱法和逆转录-聚合酶链反应,分别检测经DENSPM处理后的SNB19细胞存活率、细胞周期变化和细胞内过氧化氢水平,以及细胞内多胺水平和鸟氨酸脱羧酶、亚精胺/精胺-N1-乙酰基转移酶、多胺氧化酶mRNA表达变化.结果 经DENSPM处理后,SNB19细胞存活率随着药物浓度的增加逐渐降低(F=81.915,P=0.001),并于体外培养72h在细胞增殖周期中出现典型的亚凋亡峰；细胞内腐胺、亚精胺和精胺水平显著下降,而乙酰亚精胺和乙酰精胺水平略有上升(均P＜ 0.01)；鸟氨酸脱羧酶表达水平下降(P＜0.01),而亚精胺/精胺-N1-乙酰基转移酶和多胺氧化酶水平上升(P＜ 0.05或P＜0.01)；但细胞内过氧化氢水平与DENSPM处理前差异无统计学意义(P＞0.05).结论 DENSPM可抑制人胶质母细胞瘤SNB19细胞的生长并诱导其发生凋亡,而诱导细胞凋亡的可能机制是肿瘤细胞内多胺表达水平下降.DENSPM可能具有治疗胶质母细胞瘤的潜在临床应用价值.
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新多胺类似物四丁基丙二胺对人肝癌HepG2细胞增殖及侵袭迁移的影响
目的 研究新多胺类似物四丁基丙二胺(tetrabutyl propanediamine,TBP)对人肝癌HepG2细胞增殖及侵袭迁移的影响.方法 MTT比色法分析细胞增殖影响,流式细胞术检测细胞周期改变,Transwell体外迁移/侵袭实验检测迁移侵袭能力的变化,Western Blot用于分析细胞多胺代谢相关蛋白精胺氧化酶(SMO)的表达水平,化学发光法测定SMO活性,反相高效液相色谱法分析TBP对细胞多胺含量的影响.结果 TBP有效抑制HepG2细胞增殖水平,对细胞的侵袭、迁移能力也有明显抑制作用.TBP抑制细胞DNA复制,导致S期细胞比例显著性下降,G0/G1期细胞比例升高.细胞浆中SMO含量明显升高,但其酶活性下降.TBP显著性增加了细胞的腐胺水平,但对精脒和精胺无影响.结论 TBP能够抑制人肝癌HepG2细胞增殖、降低HepG2细胞侵袭和迁移的能力,其机制可能与影响肿瘤细胞DNA合成,改变细胞周期时相分布有关.
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多胺类似物及其抗肿瘤作用机制
多胺类似物是一类研发中的新型抗肿瘤药物.在肿瘤细胞内,多胺类似物通过干扰正常多胺代谢耗竭肿瘤快速生长必需的多胺成分、影响DNA结构和功能、调节肿瘤相关基因表达水平、改变细胞周期和诱导细胞凋亡等途径发挥抗肿瘤效应.本文就多胺类似物及其抗肿瘤的作用机制作一综述.
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用SiRNA沉默SSAT基因表达降低人A549肺癌细胞对抗癌多胺类似物CPENSpm的敏感性
目的 探讨精脒/精胺乙酰转移酶(Spermidine/Spermine N~1-Acetyltransferase,SSAT)基因表达沉默对多胺类似物CPENSpm抗瘤活性的影响.方法 用SiRNA技术获得SSAT基因表达沉默的人A549肺癌细胞株,QT-RT-PCR法用于分析SSAT基因的表达水平,MTT法检测细胞的存活率,DNA片段化分析和流式细胞/亚凋亡峰分析检测细胞凋亡状况.结果 成功获得SSAT基因表达沉默的人A549肺癌细胞株.用10 μmol·L~(-1) CPENSpm处理对照细胞24h可使SSAT mRNA水平升高23倍,但在SSAT表达沉默的细胞中CPENSpm无此影响.细胞增殖实验发现,SSAT表达沉默的细胞对CPENSpm (0～20 p·mL~(-1))的药物敏感性显著性低于对照细胞.细胞凋亡分析发现,10 μmol·L~(-1) CPENSpm处理细胞48 h导致对照细胞出现凋亡细胞典型的DNA片段化现象和亚凋亡峰,但在SSAT表达沉默的细胞株中,CPENSpm诱导细胞凋亡的能力明显减弱.结论 CPENSpm诱导肿瘤细胞内SSAT高表达可能是其抗癌药理活性的分子基础之一.
关键词： 精脒/精胺乙酰转移酶 siRNA 多胺类似物 肺癌细胞 药物敏感性 -
四丁基丙二胺对人MG63骨髓瘤细胞增殖、凋亡和迁移能力的影响
目的 分析新多胺类似物四丁基丙二胺(tetrabutyl propanediamine,TBP)对人骨髓瘤MG63细胞生长的影响及其机制.方法 MTT法用于分析细胞增殖,流式细胞分析用于细胞周期和凋亡细胞鉴定,琼脂糖凝胶电泳用于分析DNA片段化,Western blot用于分析细胞凋亡相关蛋白的表达水平,Transwell技术用于分析细胞的迁移能力.结果 TBP明显抑制MG63细胞的增殖和迁移能力,抑制效应呈时间和剂量依赖性.流式细胞分析发现,TBP干扰细胞周期,导致G1和G2期细胞比例升高,但S期细胞比例明显下降,同时凋亡细胞数量大幅增加.TBP处理后,细胞染色体DNA出现凋亡细胞典型的DNA片段化现象,细胞质中促凋亡蛋白Bax和细胞色素C含量明显升高.结论 TBP具有抑制人骨髓瘤MG63细胞增殖的药理活性,其机制与抑制细胞周期和诱导细胞凋亡有关,提示TBP具有用于临床骨髓瘤治疗的潜在价值.
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siRNA抑制精胺氧化酶的表达可降低人A549肺癌细胞对多胺类似物CPENSpm的敏感性
目的 研究精胺氧化酶(spermine oxidase,SMO)基因表达抑制对多胺类似物CPENSpm抗瘤活性的影响.方法 用siRNA技术获得SMO基因表达抑制的人A549肺癌细胞株,QT-RT-PCR法和酶活性分析法用于鉴定SMO基因的表达水平,MTT法检测细胞的存活率,DNA降解分析和流式细胞/亚凋亡峰分析检测细胞凋亡状况.结果 成功获得SMO基因表达抑制的人A549肺癌细胞株.用SMO-siRNA质粒转染的细胞中,SMO mRNA和酶活性的基础水平分别降低53%和14%.用10 μmol·L~(-1) CPENSpm处理对照细胞24 h可使SMO mRNA和酶活性分别升高10倍和20倍,但在SMO-siRNA质粒转染的细胞中,这种药物对SMO的表达诱导被抑制.细胞增殖实验发现,SMO表达抑制的细胞对CPENSpm(0～20 μmol·L~(-1))的药物敏感性低于对照细胞.细胞凋亡分析发现,与对照细胞相比,CPENSpm诱导SMO表达,抑制细胞发生细胞凋亡的能力明显减弱.结论 CPENSpm诱导肿瘤细胞内SMO高表达可能是其抗癌药理活性的分子基础之一.
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多胺类似物CPENSpm通过干扰多胺代谢抑制肺癌细胞的增殖
目的 研究多胺类似物CPENSpm对肺癌细胞株A549增殖和细胞凋亡的影响,以探讨CPENSpm抗肿瘤的作用机制.方法 MTS法分析细胞的增殖速度,化学分析法测定多胺代谢酶的活性,HPLC法分析细胞内的多胺含量,亚凋亡峰测定法和DNA片段化分析法鉴定细胞程序性凋亡.结果 CPENSpm处理A549肺癌细胞可导致:①癌细胞生长抑制并激发细胞凋亡;②抑制多胺合成关键酶ODC的活性,活化多胺降解代谢关键酶SSAT和SMO的活性;③耗竭细胞内多胺含量.SMO抑制剂MDL72527可拮抗CPENSpm对A549细胞的生长抑制作用.结论 CPENSpm通过干扰A549细胞的多胺代谢途径,耗竭肿瘤快速生长必需的多胺成分,诱导产生活性氧H2O2从而抑制癌细胞生长并激发细胞程序性凋亡.
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多胺类似物DENSPM诱导U87细胞凋亡
目的 探讨多胺类似物二乙基去甲精胺(DENSPM)诱导人胶质瘤细胞株U87细胞凋亡的机制.方法 体外培养U87细胞,经DENSPM处理后,单溶液细胞增殖检测法(MTS)检测细胞增殖率,流式细胞术检测细胞过氧化氢水平、细胞凋亡和线粒体膜电位的变化,western blot法检测PI3K/Akt/mROT介导的蛋白含量.结果 MTS法分析显示DENSPM能显著抑制U87细胞的增殖,抑制率呈药物浓度依赖性.流式细胞术分析显示DENSPM能引起U87细胞内过氧化氢水平升高,且是时间依赖性；同时显示U87细胞内线粒体受到损伤,其膜电位显著增高(P＜0.0),药物处理后U87细胞的凋亡率明显增加(P＜0.01).western blot 显示细胞色素C在线粒体和细胞质中的分布没有变化,同时DENSPM降低U87细胞内PI3K/Akt/mTOR介导的蛋白表达水平(P＜0.01).结论 DENSPM可诱导人胶质瘤U87细胞的凋亡,其机制可能与抑制PI3K/Akt/mTOR介导的蛋白质翻译起始途径密切相关.
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精胺氧化酶高表达对人宫颈癌Hela细胞生长和药物敏感性的影响
目的 研究精胺氧化酶(SMO)稳定性高表达对人宫颈癌Hela细胞生长和药物敏感性的影响.方法 含SMO全长编码序列的真核表达质粒用脂质体法稳定转染人宫颈癌Hela细胞后,QT-RT-PCR和酶活性分析法筛选SMO高表达的细胞株.MTS法检测细胞的增殖和对抗癌药物的敏感性.流式细胞分析法检测细胞周期和细胞凋亡.结果 成功获得SMO稳定高表达的人Hela宫颈癌细胞株.MTS分析发现,SMO高表达细胞的生长速度显著性高于对照细胞,且对多胺类似物抗癌药物CPENSpm的敏感性明显下降.与对照细胞相比,CPENSpm诱导SMO高表达细胞发生细胞凋亡的能力明显减弱.结论 SMO稳定性高表达可降低宫颈癌细胞对抗癌药物CPENSpm的敏感性.
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多胺类似物抑制肿瘤细胞的机制研究进展
迄今为止,关于多胺的功能尚无定论,但有研究表明它参与稳定DNA构象、染色质浓缩、DNA转录以及细胞生长和发育过程,可特异性地修饰某些RNA分子,稳定或激活RNA酶,参与mRNA的翻译以及影响蛋白质合成等.多胺是真核细胞生存所必需的小分子物质.
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多胺类似物四丁基丙二胺对人早幼粒白血病细胞HL-60生长的影响
目的：研究新多胺类似物四丁基丙二胺（TBP）对人早幼粒白血病细胞HL-60生长的影响及其作用机制。方法：MTT比色法分析TBP对HL-60细胞增殖的影响，流式细胞术检测TBP对HL-60细胞周期的影响，DNA片段化和线粒体膜电位分析用于检测细胞凋亡，化学发光法检测TBP对多胺降解代谢酶精胺氧化酶（SMO）和乙酰多胺氧化酶（APAO ）活性的影响。结果：TBP通过抑制细胞周期和诱导细胞凋亡显著抑制HL-60细胞增殖；随TBP药物浓度增高，HL-60细胞凋亡水平增加，SMO和APAO的活性亦显著增高。结论：新多胺类似物TBP能够通过诱导多胺降解代谢途径关键酶活性和诱导细胞凋亡而抑制 HL-60细胞增殖，具有抗白血病治疗的潜在应用前景。
关键词： 急性早幼粒细胞白血病 四丁基丙二胺 多胺类似物 细胞凋亡 -
多胺类似物四丁基丙二胺对人A549肺癌细胞的影响
目的:研究新多胺类似物四丁基丙二胺(tetrabutyl propanediamine,TBP)对人A549肺癌细胞增殖、细胞迁移能力和多胺代谢的影响及其机制.方法:MTT法用于分析细胞增殖；流式细胞术用于分析细胞周期；QT-RT-PCR技术用于分析多胺代谢酶的表达水平；高效液相色谱用于检测细胞内多胺含量.结果:TBP处理A549细胞后导致:(1)显著抑制人A549细胞增殖,其抑制效应呈浓度和时间的依赖性；(2)G1期和G2期细胞显著减少,但S期细胞显著性增加；(3)显著诱导多胺降解代谢限速酶SSAT的表达,但对其他酶影响较小；(4)细胞内多胺含量显著性下降.结论:上述研究结果提示TBP具有抑制人A549肺癌细胞增殖的药理活性,有作为肺癌治疗药物的潜在临床应用前景.其机制可能与干扰DNA复制、抑制细胞周期和降低细胞内多胺水平相关.
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多胺类似物DENSPM对人胶质瘤LN229细胞增殖的抑制作用
目的 探讨多胺类似物二乙基去甲精胺(DENSPM)对人的胶质母细胞瘤LN229细胞的抑制作用.方法 用DENSPM处理LN229细胞后,采用单溶液细胞增殖检测(MTS)法、细胞流式术、高效液相色谱法、定量逆转录酶-聚合酶链反应(qRT-PCR),分别检测其细胞增殖率、细胞周期变化和细胞内过氧化氢水平、细胞内多胺表达水平、亚精胺/精胺N1-乙酰基转移酶(SSAT)、多胺氧化酶(PAO)、鸟氨酸脱羧酶(ODC)mRNA表达变化.结果 LN229细胞经DENSPM处理后,其存活率随着药物浓度的增加而逐渐降低(F=124.051,P＜0.001),并于体外培养72 h后在细胞增殖周期中出现典型的亚凋亡峰；细胞内过氧化氢水平于72 h后显著升高(F=57.27,P＜0.001)；细胞内腐胺、亚精胺和精胺水平显著下降(P≤0.001),而乙酰亚精胺和乙酰精胺水平显著上升(P ＜0.001)；亚精胺/精胺-N1-乙酰基转移酶、多胺氧化酶和鸟氨酸脱羧酶水平上升(P＜0.001).结论 DENSPM可能通过降低肿瘤细胞内多胺表达水平,来抑制LN229细胞的生长并诱导其发生凋亡.
