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幽门螺杆菌黏附素AlpA保守区基因的克隆、序列测定及其生物信息学分析
目的克隆幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, Hp)4种黏附素(babA、alpA、alpB和hopZ)基因的保守区, 并对其进行序列及生物信息学分析.方法利用ANTHEPROT V4.3c 软件, 分析已证实的Hp 4种黏附素蛋白序列, 发现4种黏附素的C-端氨基酸存在保守区. 选取AlpA的C-端结构基因序列作为引物进行PCR, 将PCR产物定向插入载体pET-22b(+), 以DNA自动分析仪进行序列测定, 并以生物信息学软件分析其生物学特性.结果克隆片段的长度为588 bp, 与发表的黏附素AlpA保守区基因的序列完全一致.ANTHEPROT V4.3c软件预测其蛋白质的Mr约为22 500, 并显示出良好的抗原性和疏水性.结论用PCR方法, 从幽门螺杆菌ss1中获取到黏附素AlpA保守区的基因序列, 为研究Hp黏附素的分子机制和免疫原性奠定了基础.
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人源抗幽门螺杆菌黏附素HpaA噬菌体单链抗体库的构建和筛选
目的 构建人源噬菌体单链抗体库, 筛选抗幽门螺杆菌(Hp)黏附素HpaA特异性抗体.方法 首先检测献血员抗Hp和rHpaA抗体,分离阳性者外周血淋巴细胞,提取总RNA并等量混合.利用RT-PCR 扩增全套重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)基因, 采用overlap方法连接,插入噬菌体载体pComb3x构建噬菌体单链抗体库,以纯化rHpaA为靶标筛选特异性抗体.结果 成功获得VH和VL基因,分子量分别约为400bp和350bp.将VH 和VL纯化后采用overlap方法连接,插入噬菌体载体pComb3x构建成库容量为3.9×108的单链抗体噬菌体库.以纯化rHpaA为靶标筛选获得与HpaA发生反应强的克隆ScFv2,通过免疫印迹的方法证明,ScFv2仅与HpaA和Hp菌株反应,不与非Hp菌株反应.结论 人源抗Hp噬菌体抗体库的建立为重组人抗Hp sIgA分子的构建表达奠定了基础.
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过氧化氢酶和黏附素保守区二价疫苗治疗小鼠幽门螺杆菌感染
目的:利用人类幽门螺杆菌(H.pylori)感染的小鼠模型研究过氧化氢酶和黏附素保守区二价疫苗治疗H.pylori感染的作用. 方法: 把已感染H.pylori的小白鼠分成7组, 分别通过灌胃方法给予过氧化氢酶和黏附素保守区(各100 μg)加霍乱毒素CT(2 μg)、过氧化氢酶(100 μg)加CT (2 μg)、黏附素保守区(100 μg)加CT (2 μg),PBS,单纯过氧化氢酶(100 μg)、单纯黏附素保守区(100 μg)、单纯CT (2 μg),1次/wk,共4次,治疗结束后4 wk处死动物,取胃黏膜行半定量细菌培养检查H.pylori情况. 结果: 治疗实验各组H.pylori根除率分别为: 过氧化氢酶和黏附素保守区加CT组69.2%(18/26)、过氧化氢酶加CT组30.8%(8/26)、黏附素保守区加CT组38.5%(10/26);生理盐水组、单纯过氧化氢酶、单纯黏附素保守区、单纯CT组根除率均为0%. 未根除H.pylori的小鼠,疫苗治疗组H.pylori的定植密度明显低于其他4组(P<0.05). 此外,二价疫苗组的H.pylori根除率及定植密度较单价疫苗组均有显著性差异(P<0.05). 结论: 由过氧化氢酶和黏附素保守区加免疫佐剂组成的二价口服疫苗较单价口服疫苗有更好的免疫治疗效果,多价疫苗是未来H.pylori疫苗的研制方向.
