纳米技术在声/光动力抗菌化学疗法中的应用进展

声/光动力抗菌化学疗法(SACT/PACT)是利用超声或特定波长光源激活声/光敏剂产生的活性氧,以及系列声/光化学反应及物理作用,对微生物进行杀伤的新型抗菌治疗方法,具有无创性、低毒副作用且无耐药性等优点.然而,多数声/光敏剂水溶性较差、活性氧产量不理想,极大地制约了其在临床的广泛应用.引入纳米技术,不仅可削弱声/光敏剂分子的沉淀或聚集现象,还可促使它们与特定微生物病原体靶向结合.此外,纳米材料可增强声/光敏剂对激发源的敏感性,使体系中产生更多的活性氧,进而促进SACT/PACT的抗菌效果.本文从纳米材料为载体或制备纳米级的声/光敏剂两个角度,介绍了纳米技术在SACT/PACT中的应用和进展,并分析了可能的作用机制,为后续研究提供参考.

多药耐药性相关ATP结合盒转运蛋白

ATP结合盒(ABC)转运蛋白超家族是一大类以ATP水解为动力的转运蛋白,在肿瘤细胞和正常组织都有分布,有多种重要功能.ABC转运蛋白家族中与多药耐药性相关的转运蛋白有P-糖蛋白、多药耐药性相关蛋白、乳腺癌耐药蛋白.本文对这些多药耐药性ABC转运蛋白的生理、生化特性进行综述.

某些抗肿瘤药物的多药耐药性机制

肿瘤细胞的多药耐药性(MDR)是阻碍化疗药物达到理想治疗效果的主要原因之一.本文通过分析所选化疗药物产生MDR的机制表明,糖蛋白的表达、谷胱甘肽作用的改变、拓扑异构酶Ⅰ和Ⅱ表达的降低均与产生MDR有关.文章同时还介绍了化疗增敏剂的应用现状、副作用及今后相关领域的研究重点等问题.

078一种在体内外实验中对多药耐药性人卵巢癌细胞有抑制作用的微管抑制剂ME012

洛美利嗪逆转K562/ADM细胞多药耐药性

目的研究洛美利嗪(lomerizine,Lom)逆转K562/ADM细胞多药耐药性的作用及机制.方法 MTT法检测细胞毒作用,流式细胞仪研究Lom对ADM和长春新碱(vincristine,vCR)的K562/ADM细胞凋亡诱导作用的影响及对罗丹明123(rhodamine 123,Rh123)外排和P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)表达的作用.结果 Lom明显提高ADM对K562/ADM多药耐药细胞的细胞毒作用及ADM和VCR的凋亡诱导作用,3,10和30unol·L-1Lom使K562/ADM对A1DM的IC50值由79.03 μmol·-1分别降至28.14,8.16和3.16 μmol·L.Lom增加胞内ADM的蓄积浓度并抑制Rh123外排;但作用72 h后对K562/ADM细胞P-gp表达无影响.结论 Lon通过抑制P-gp的活性逆转K562/ADM细胞的多药耐药性.

粉防己碱、甲基莲心碱和蝙蝠葛碱增强长春新碱诱导人乳腺癌MCF-7多药耐药细胞凋亡

目的　观察粉防己碱、甲基莲心碱和蝙蝠葛碱与长春新碱合用对多药耐药肿瘤细胞诱导凋亡的作用。方法　采用荧光染料Hoechst 33342和碘化丙锭联染技术、流式细胞术和琼脂糖凝胶电泳技术，检测长春新碱及其与上述单体合用诱导耐药株瘤细胞MCF-7/Dox的凋亡程度。结果　单用长春新碱可引起约10%细胞凋亡，而长春新碱与粉防己碱、甲基莲心碱或蝙蝠葛碱合用明显地增加细胞凋亡的百分率，其中粉防己碱的作用强。联合用药的细胞凋亡数显著地大于单用长春新碱的作用。结论　粉防己碱、甲基莲心碱和蝙蝠葛碱均有明显的增强长春新碱诱导人乳腺癌MCF-7多药耐药细胞的凋亡作用。

基于TPGS的纳米递药系统在逆转P-糖蛋白介导肿瘤多药耐药中的应用

肿瘤多药耐药性(multidrug resistance,MDR)严重影响了化疗药物的临床疗效.P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)过度表达则是引发肿瘤MDR的主要原因之一,P-gp抑制剂的应用可以达到逆转肿瘤MDR的效果,是一种增强化疗药物抗肿瘤作用的有效手段.近年来,由于聚乙二醇1000维生素E琥珀酸酯(D-α-tocopheryl polyethylene glycol 1000 succinate,TPGS)安全无毒,抑制P-gp效果出色,其在纳米递药系统的应用得到广泛研究.本文对P-gp及其抑制剂研究、TPGS及其抑制P-gp机制研究和TPGS在纳米载药系统中逆转肿瘤MDR应用进行综述.

SIRT1去乙酰化酶抑制剂引起人乳腺癌MCF-7耐药细胞凋亡的机制

研究SIRT1去乙酰化酶抑制剂引起人乳腺癌MCF-7耐多柔比星(doxorubicin,DOX)细胞及其敏感细胞凋亡的机制.MTT法检测细胞生长抑制作用;Western blotting方法检测蛋白表达;DNA特异染料Hoechst 33342染色检测染色质凝集;Annexin V检测细胞凋亡;流式细胞仪测定细胞周期分布.结果表明.SIRT1去乙酰化酶抑制剂烟酰胺(nicotinamide,NAM)和Sixtinol对人乳腺癌细胞MCF-7敏感和耐药细胞表现出相同的生长抑制作用,但没有增强DOX活性的作用.NAM使MCF-7和MCF-7/DOX细胞阻滞在(G<,2/M期.50 mmol·L-1NAM作用MCF-7细胞后,激活caspase凋亡通路,出现PARP、caspase-6、-7、-9切割片段,并且染色质发生凝集和Annexin V阳性细胞.而在MCF-7/DOX耐药细胞中,NAM作用24 h后,才开始出现PARP、caspase-6、-7切割片段,48 h后明显增加,可以检测到较多的细胞出现染色质凝集和Annexin V阳性细胞.SIRT1去乙酰化酶抑制剂对人乳腺癌MCF-7耐药细胞和敏感细胞均有相似的抑制作用,无交叉耐药性.其作用通过激活caspase凋亡通路实现.

基因mdr1高表达多药耐药肿瘤细胞对力达霉素的药物敏感性

目的 利用经药物诱导获得的mdr1基因高表达细胞株以及通过mdr1基因转染建立的稳定高表达细胞株,研究多药耐药肿瘤细胞对力达霉素(C-1027)的药物敏感性.方法 构建mdr1重组真核表达质粒pcDNA3.1/mdr1,利用脂质体转染技术,获得mdr1高表达HepG2肝癌细胞.经RT-PCR、细胞荧光免疫化学及罗丹明外排实验,鉴定了细胞的mdr1表达水平和药物外排活性.MTT方法 测定敏感细胞及相对应的多药耐药细胞对力达霉素等多种抗肿瘤药物的药物敏感性.结果 mdr1稳定转染细胞株HepG2/mdr1、多药耐药KBv200细胞和MCF-7/ADR细胞对力达霉素的IC50值分别为(0.020±0.011) nmol·L-1,(0.24±0.20) nmol·L-1和(0.028±0.011) nmol·L-1.相对于各自的敏感细胞,多药耐药细胞HepG2/mdr1,KBv200和MCF-7/ADR对力达霉素的抗药倍数分别是1.3,6.8和1.6倍,对阿霉素的抗药倍数分别是8.8, 37.2和181.3倍,对紫杉醇的抗药倍数分别是40.3, 336.8和49.2倍.结论 mdr1高表达的多药耐药肿瘤细胞对力达霉素仍高度敏感,未表现出抗药性.

鬼臼毒素衍生物CIP-36抗肿瘤多药耐药的机制

研究鬼臼毒素衍生物CIP-36对耐药人口腔鳞状上皮癌细胞KBV200的抗肿瘤活性及其作用机制.采用MTT法观察CIP-36对多种肿瘤细胞和正常细胞的体外抑制作用以及对KB和KBV200细胞生长曲线的作用,Hoechst荧光染色进行细胞凋亡检测,RT-PCR检测CIP-36对KB及KBV200细胞p53、p21、caspase-3、bax、mdr-1和bcl-2的mRNA表达的影响,免疫组织化学检测观察CIP-36对KBV200细胞P-gp表达的影响.结果表明,CIP-36对多种肿瘤细胞均有较好的抑制作用,且对耐药株细胞均有明显抑制作用.荧光染色结果显示,CIP-36可诱导KBV200细胞凋亡.同时CIP-36可剂量依赖性地增加KBV200及KB细胞的p53、p21、caspase-3及bax 的mRNA表达,同时降低mdr-1和bcl-2的mRNA表达,与对照组比较差异均有统计学意义.免疫组织化学检测结果显示,CIP-36显著降低KBV200的P-gp表达.提示CIP-36可能通过影响多个与肿瘤耐药相关基因和蛋白的表达来克服肿瘤细胞株的多药耐药性.

盐酸千金藤碱逆转K562/ADR细胞多药耐药性及其机制

研究盐酸千金藤碱(cepharanthine hydrochloride,CH)逆转K562/ADR细胞多药耐药性及其机制.采用MTT法检测多柔比星(adriamycin,ADR)单用及分别与CH、维拉帕米(verapamil,VER)合用的细胞毒作用;采用流式细胞仪,测定CH对细胞内ADR蓄积、罗丹明123 (Rho123)蓄积和泵出及P糖蛋白(P-gp)表达的影响.结果表明,CH(4 μmol·L-1)使K562/ADR细胞对ADR的敏感性增加7.43倍,逆转活性是VER的3.19倍,但对K562敏感株基本无影响.同时CH浓度依赖性地增加K562/ADR细胞内ADR和Rho123的蓄积,减少Rho123的泵出,抑制P糖蛋白的表达,但对K562细胞均无明显影响.CH在体外逆转肿瘤细胞多药耐药性的作用可能与其抑制P糖蛋白的功能和表达有关.

盐酸千金藤素逆转EAC/ADR细胞多药耐药性的作用及其机制

目的研究盐酸千金藤素对艾氏腹水癌耐药细胞株EAC/ADR多药耐药性的逆转作用及其与核因子κB(NF-κB)的关系,探讨其作用机制.方法 MTT法、小鼠移植瘤模型实验观察盐酸千金藤素体外和体内逆转细胞多药耐药性的作用;Dot-ELISA法检测细胞核NF-κB水平及药物作用后的变化.结果盐酸千金藤素体外能逆转EAC/ADR细胞的耐药性,逆转倍数为13倍;体内能延长荷瘤小鼠的生存时间,生命延长率为75.37%;并能降低EAC/ADR细胞中NF-κB的持续性活性及化疗药物对其的激活.结论盐酸千金藤素具有逆转多药耐药性的作用,其机制可能与抑制NF-κB的活性有关.

功劳木中异汉防己碱对P-糖蛋白介导的人乳腺癌细胞多药耐药性的逆转作用

本文探讨了异汉防己碱对P-糖蛋白(P-gp)介导的人乳腺癌细胞多药耐药性的逆转作用.首先以RT-PCR和免疫组化方法分别从RNA和蛋白水平检测MCF-7/DOX细胞P-gP表达情况,以明确MCF-7/DOX细胞的耐药特征;然后采用MTT法检测异汉防己碱的内在细胞毒性及其对阿霉素(DOX)的增敏作用,并以RF(reversal fold)值评价其逆转效果:同时应用流式细胞仪(FCM)对细胞内DOX的蓄积量进行了分析;再以免疫组化方法检测异汉防己碱对MCF-7/DOX细胞P-gp表达水平的影响;后采用罗丹明蓄积和外排试验检测了异汉防己碱对P-gp功能的影响.整个试验以维拉帕米作为阳性对照.实验结果表明:MCF-7/DOX细胞是具有多药耐药表型且P-gp表达阳性的细胞株;无毒剂量异汉防己碱可明显增强DOX对MCF-7/DOX细胞的细胞毒性(RF=3.89),明显高于维拉帕米(RF=2.54)的逆转活性(P＜0.05),但其几乎不影响DOX对MCF-7细胞的抑制作用;异汉防己碱对MCF-7/DOX细胞P-gp表达水平无明显影响,但其可有效抑制P-gp的药物外排功能.因此,异汉防己碱可有效逆转P-gp介导的人乳腺癌细胞的多药耐药性,它可能成为有效多药耐药逆转剂的候选药物.

GGI/MDR1 siRNA逆转A549/DDP细胞多药耐药的研究

通过RNA干扰(RNAi)技术靶向耐药性人肺腺癌细胞内的MDR1基因实现多药耐药性的逆转作用.构建聚乙二醇-聚谷氨酸-聚乙烯亚胺(PEG-b-PLG-g-PEIs,GGI)阳离子聚合物载体,通过1H NMR表征确认结构,动态光散射法测定GGI/siRNA的粒径及电位,并以A549敏感株和A549/DDP耐药株细胞系为模型,采用MTT法考察GGI的细胞毒性,以流式细胞术评价新型聚合物载体GGI递送siRNA的效率和强度,RT-PCR法考察GGI转染A549和A549/DDP (cisplatin)后MDR1 mRNA水平的表达;Western blot法测定A549/DDP细胞中P-gp的表达.同时,以MTT法和Annexin V-FITC/PI双染法考察siRNA干扰后抗肿瘤药物对药物敏感性的变化.结果显示,GGI/siRNA复合物粒径为150～200 nm,电位稳定在16～28 mV.GGI细胞毒性远低于PEI25K,且具有更高运载siRNA至细胞内的效率,并能极大降低A549/DDP细胞内MDR1 mRNA和P-gp的表达,能更大程度地增强耐药细胞株对顺铂的敏感性,说明GGI有望在基因传递系统中成为一种新型的聚合物载体并广泛应用.

新型阿霉素抗耐药性隐形脂质体的体外细胞毒和体内毒性研究

目的多药耐药(multidrug resistance,MDR)是目前临床肿瘤治疗的主要障碍.本文研制了新型阿霉素抗耐药性隐形脂质体(DARSLs),并对其体外细胞毒和体内毒性进行评价.方法采用硫酸铵梯度法将阿霉素(DOX)和维拉帕米(VER)药物同时包载到隐形脂质体内,制备成DARSLs;采用耐药性鼠前列腺肿瘤细胞株MLLB2和人子宫肉瘤细胞株MES-SA/DX5进行体外细胞毒性评价;采用SD大鼠对阿霉素抗耐药性隐形脂质体进行体内毒性评价.结果在药脂比(DOX/VER/Lipid,w/w/w)为1:0.11:10时,阿霉素包封率大于90%,维拉帕米包封率约为70%.平均粒径为(118.1±22.3)nm.体外细胞毒性实验证实该脂质体能够在体外有效地逆转肿瘤细胞耐药性,并导致耐药肿瘤细胞生长抑制.体内系统毒性及心脏毒性实验结果显示,该脂质体能够明显改善游离阿霉素单独使用或与维拉帕米联合使用时产生的全身毒性,尤其是心脏毒性.结论DARSLs具有相对较低的毒性,且能有效抑制耐药肿瘤的生长.

microRNA-214的下调表达对不同种类淋巴瘤细胞耐药性的影响

目的 研究microRNA-214对不同种类淋巴瘤细胞耐药性的影响.方法 选择几种不同的淋巴瘤细胞,分别命名为Jurkat细胞实验组、OCI-Ly3细胞实验组及Raji细胞实验组,将健康人外周血淋巴细胞(Scr)作为对照组.细胞分别被敲除miR-214并给予不同的药物刺激.用荧光定量PCR法检测不同淋巴瘤细胞内miR-214的表达量;以CCK-8法检测敲除miR-214后的淋巴瘤细胞存活率;以MTT比色法检测敲除miR-214后不同淋巴瘤细胞对不同药物的敏感性;以蛋白质免疫印迹法检测BCL11B蛋白表达水平;用荧光素酶报告技术检测BCL11B是否为miR-214的靶基因.结果 Jurkat、OCI-Ly3及Raji细胞在实验组的miR-214的表达量分别为27.21±1.37,17.13±2.11,19.31±2.46,均明显高于对照组的1.17±0.28,差异有统计学意义(均P ＜0.05).敲除miR-214后,与对照组的Scr细胞存活率(86±12)％相比,Jurkat、OCI-Ly3及Raji细胞在实验组的细胞存活率分别为(42±13)％,(65±11)％,(58±7)％,差异有统计学意义(均P ＜0.05).抑制miR-214表达后,对照组Scr细胞对阿霉素、环磷酰胺、柔红霉素、丝裂霉素C和长春新碱的耐药敏感性分别为0.46±0.11,1.96±0.13,1.15±0.22,3.90±0.52,0.52±0.15,Jurkat细胞对5种药物的耐药敏感性分别为0.32±0.07,0.76±0.16,0.73±0.13,2.36±0.16,0.37±0.06,OCI-Ly3细胞对5种药物的耐药敏感性分别为0.28±0.06,0.91±0.12,0.55±0.09,2.01±0.36,0.23±0.07,Raji细胞对5种药物的耐药敏感性分别为0.36±0.04,0.82±0.08,0.64±0.07,3.31±0.21,0.35±0.05,与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).BCL11B是miR-214的靶基因.结论 抑制miR-214表达能够降低不同种类淋巴瘤细胞的存活率,并降低白血病淋巴细胞的多药耐药性,这种作用可能与miR-214抑制其靶基因BCL11B的表达相关.

岩舒注射液影响人HL-60白血病耐药细胞耐药性的机制

目的:研究复方中药岩舒注射液能否抑制人白血病HL-60多药耐药细胞增殖及其相关机制.方法:采用人白血病HL-60敏感细胞及其HR-20耐药细胞进行研究.MTT法检测药物对细胞增殖的影响,流式细胞术检测多柔比星的荧光强度变化,免疫印迹方法检测P-糖蛋白含量的变化.结果:岩舒注射液作用耐药和敏感细胞的IC50值相近,没有明显的交叉耐药性.岩舒注射液增加高三尖杉酯碱对耐药细胞的增殖抑制作用,增加多柔比星在耐药细胞内的积聚.免疫印迹法检测到:岩舒注射液处理后明显降低耐药细胞的P-糖蛋白水平.结论:岩舒注射液能克服人白血病HL-60细胞的多药耐药性,其机制与降低P-糖蛋白的水平有关.

博宁霉素克服人肿瘤细胞多药耐药性的机制

目的:研究博来霉素族新抗生素博宁霉素能否克服肿瘤细胞的多药耐药性.方法:选用耐多柔比星的人乳腺癌MCF-7细胞(MCFa/DOX)、耐长春新碱的人口腔上皮癌KB细胞(KBV200)及其相应的敏感细胞.MTT法检测细胞增殖的抑制作用；流式细胞仪检测细胞周期的变化以及细胞内活性氧自由基的水平；DNA特异染料Hoeehst 33342染色检测染色质凝集；Western blot检测蛋白的表达.结果:MTT法检测到博宁霉素抑制MCF-7/DOX和敏感MCF-7细胞的IC50值分别为0.17和0.10μmol·L-1；抑制KBV200和敏感细胞的IC50值分别为0.38和0.21μmol·L-1.耐药细胞对博宁霉素没有交叉耐药性.博宁霉素使耐药细胞停滞在G2/M期,细胞内活性氧自由基水平增加,染色质发生凝集,引起细胞凋亡,Western blotting检测到降低多药耐药相关蛋白P-糖蛋白的含量.结论:博宁霉素能克服肿瘤细胞的多药耐药性,其作用机制与引起细胞凋亡和降低P-糖蛋白表达有关.

组蛋白去乙酰化酶抑制剂调节肿瘤细胞多药耐药性的机制

肿瘤的多药耐药性往往导致化疗失败,其主要原因是外排抗肿瘤药物的ABC蛋白过度表达所致.文中以研究较多的mdr-1基因的表达调控为例,综述从表观遗传修饰方面克服多药耐药性的研究进展.组蛋白去乙酰化酶抑制剂不仅具有良好的抗肿瘤活性,对肿瘤耐药细胞也无交叉耐药性,通过诱导耐药细胞凋亡而起作用.在mdr-1基因的活化表达过程中,需要其启动子区域DNA的去甲基化和组蛋白乙酰化的协同作用.目前的研究表明:以表观遗传修饰为药物靶标,发展克服多药耐药性药物具有诱人的前景.

浙贝母总生物碱对人肺腺癌A549/顺铂细胞耐药性的逆转作用

目的 研究浙贝母总生物碱(TAF)对人肺腺癌A549/顺铂(DDP)细胞DDP耐药性的逆转作用.方法 ①离体实验:采用MTT法观察TAF(12.5～200 mg·L-1)对A549和A549/DDP细胞的毒性作用；采用MTT法检测TAF 9 mg·L-1对A549/DDP细胞耐药的逆转作用,同时设环孢菌素A(Cys A)1 mg·L-1和汉防己甲素(Tet)1 mg·L-1为阳性对照；实时荧光定量PCR检测A549/DDP细胞多药耐药基因1(MDR1)mRNA相对表达；Western蛋白免疫印迹法检测A549/DDP细胞P-糖蛋白(P-gp)相对表达.②在体实验:制备BALB/c裸鼠A549/DDP移植瘤模型,随机分为模型对照、DDP 5 mg·kg-1、TAF2 mg· kg-1、DDP 5 mg·kg-1 +TAF0.5,1和2 mg·kg-1联用组,每两天ip给予DDP,每天ig给予TAF,持续13d,检测移植瘤体积和质量的变化.结果 TAF作用72 h抑制A549和A549/DDP细胞存活的IC50值分别为141±5和(298±22) mg· L-1；IC10值分别为15.3±1.9和(9.0±1.2)mg·L-1.DDP 0.01 ～100 mg·L-1与TAF 9 mg·L-1合用后,DDP抑制A549/DDP细胞存活的IC50值由(14.06±3.72) mg·L-1降至(0.79±0.14)mg·L-1,抑制A549细胞存活的IC50值无明显变化；TAF对A549/DDP细胞DDP耐药性的逆转倍数为17.80倍,高于Cys A(10.16倍)和Tet(14.05倍).TAF可明显降低A549/DDP细胞MDR1 mRNA及P-gp相对表达(P＜0.01).DDP 5 mg·kg-1体内抑瘤率为49.9％,与TAF 2 mg·kg-1合用后抑瘤率增至67.4％(P＜0.01).结论 TAF在体内外均可逆转A549/DDP细胞对DDP的耐药性,可降低MDR1 mRNA和P-gp蛋白表达.