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蛇葡萄素对K562/ADR细胞耐药性的逆转作用及机制研究
目的:研究蛇葡萄素与阿霉素合用对人白血病多药耐药细胞株K562/ADR增殖的抑制作用及其机制.方法:MTT法测定蛇葡萄素与阿霉素合用对K562/ADR细胞的细胞毒作用,应用金正均公式进行联合用药效果分析;藻红蛋白标记抗体检测蛇葡萄素对K562/ADR细胞膜表面P-糖蛋白表达的影响;流式细胞术测定蛇葡萄素对K562/ADR细胞内阿霉素累积的影响.结果:1.25～5 mg·L~(-1)的蛇葡萄素能够明显逆转K562/ADR细胞对阿霉素的耐药性.1.25 mg·L~(-1)蛇葡萄素与低浓度阿霉素合用可表现出拮抗效应,而浓度在2.5 mg·L~(-1)以上的蛇葡萄素与阿霉素合用可表现出相加至协同效应.蛇葡萄素能够浓度依赖性减少K562/ADR细胞膜P-糖蛋白表达,增加细胞内阿霉素的浓度.结论:蛇葡萄素能通过抑制P-糖蛋白外排药物,促进抗癌药物在细胞内的累积,增强抗癌药物对耐药细胞的细胞毒作用,逆转肿瘤多药耐药.
关键词： 蛇葡萄素 白血病 多药耐药 P-糖蛋白 K562/ADR细胞 -
生姜中二苯庚烷类化合物的抗氧化和细胞毒活性研究
目的:研究生姜中二苯庚烷类化合物(1～5)的抗氧化和细胞毒活性.方法:采用吸光度测试法检测化合物于50mg·L~(-1)清除超氧阴离子的效果,同法检测化合物(1～5)清除1,1-二苯基苦基苯肼(DPPH)自由基之半数清除浓度(IC_(50)),用MDA检测法检查化合物于100 mg·L~(-1)浓度下抑制大鼠脑匀浆脂质过氧化的能力,以及用MTT法研究化合物抑制过氧化氢(H_2O_2)诱导的大鼠肾上腺嗜铬瘤细胞(PCl2)损伤的活性,并采用MTT法检测化合物对人慢性髓源性白血病细胞株(K562)及其阿霉素耐药株(K562/ADR)的细胞毒活性(IC_(50)). 结果:化合物1～5对DPPH自由基有较好的清除作用,化合物5的清除作用强,IC_(50)(22.6±2.4)μmol·L~(-1);化合物1,3和4有抑制大鼠脑匀浆脂质过氧化作用,100mg·L~(-1)其抑制率分别为(66.3±15.4)%,(68.7±15.8)%,(72.2±10.6)%;化合物1,3和4对H_2O_2诱导的PCl2细胞损伤有明显的保护作用,且呈量效关系;化合物3对K562及其阿霉素耐药株(K562/ADR)体外增殖有抑制作用,其IC_(50)分别为(34.9±0.6),(50.6±23.5)μmol·L~(-1).结论:生姜中的二苯庚烷类化合物1～5具有特异性的抗氧化作用,化合物3对K562和K562/ADR细胞均显示出显著的细胞毒作用.
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大黄素可能通过Akt-Caspase 3信号通路诱导K562/Adr细胞凋亡
目的:观察大黄素(emodin)对多药耐药白血病细胞株K562/Adr凋亡的影响及Akt-Caspase 3信号通路在其中的作用.方法:采用Annexin V/PI双染的流式细胞术和DNA倍体分析法检测细胞凋亡;Western blot法检测大黄素作用后不同时间段caspase-3前体蛋白、PARA、Akt、p-Akt表达水平的变化.结果:大黄素能够诱导K562/Adr细胞凋亡,并呈量效关系.大黄素作用K562/Adr细胞后caspase-3前体蛋白、Akt、p-Akt、PARA 116 KD表达水平下调,PARP 85 KD表达水平增加,并呈时效关系.结论:Akt-Caspase 3信号通路可能参与大黄素诱导K562/Adr细胞凋亡的过程.
关键词： 大黄素 K562/ADR细胞 凋亡 AKT Caspase-3 -
亚硒酸钠对K562/ADR多药耐药的逆转作用及其机制
本研究探讨亚硒酸钠对白血病耐药细胞株K562/ADR细胞的多药耐药性的逆转作用及其逆转机制.用噻唑蓝(MTT)法检测亚硒酸钠对K562/ADR细胞的生长抑制作用及其对K562/ADR细胞耐药性的逆转作用;应用流式细胞仪检测亚硒酸钠对K562及K562/ADR细胞凋亡率的影响;用半定量RT-PCR法检测K562/ADR细胞中mdr1和bcl-2基因的表达情况.结果表明,10μmol/L亚硒酸钠可以明显增加K562/ADR细胞对阿霉素敏感性,其耐药逆转倍数为2.31;早期凋亡率在10 μmol/L亚硒酸钠作用于K562细胞48小时是升高的;而中、晚期凋亡率在亚硒酸钠5、10 μmol/L作用48、72小时时均明显升高;两种浓度亚硒酸钠在作用48小时可使K562/ADR细胞早期凋亡率增加,作用48、72小时可使K562/ADR的细胞中、晚期凋亡率增高,10 μmol/L的亚硒酸钠所致凋亡率高于5μmol/L,作用72小时的凋亡率高于48小时;亚硒酸钠可使K562/ADR细胞mdr1 mRNA及bcl-2 mRNA表达下降.结论:亚硒酸钠可部分逆转K562/ADR细胞的耐药性,其机制可能是增加K562/ADR细胞凋亡率,下调mdr1 mRNA和bcl-2 mRNA的表达.
关键词： Na2SeO3 K562/ADR细胞 多药耐药 细胞凋亡 -
盐酸千金藤碱逆转K562/ADR细胞多药耐药性及其机制
研究盐酸千金藤碱(cepharanthine hydrochloride,CH)逆转K562/ADR细胞多药耐药性及其机制.采用MTT法检测多柔比星(adriamycin,ADR)单用及分别与CH、维拉帕米(verapamil,VER)合用的细胞毒作用;采用流式细胞仪,测定CH对细胞内ADR蓄积、罗丹明123 (Rho123)蓄积和泵出及P糖蛋白(P-gp)表达的影响.结果表明,CH(4 μmol·L-1)使K562/ADR细胞对ADR的敏感性增加7.43倍,逆转活性是VER的3.19倍,但对K562敏感株基本无影响.同时CH浓度依赖性地增加K562/ADR细胞内ADR和Rho123的蓄积,减少Rho123的泵出,抑制P糖蛋白的表达,但对K562细胞均无明显影响.CH在体外逆转肿瘤细胞多药耐药性的作用可能与其抑制P糖蛋白的功能和表达有关.
关键词： 多药耐药性 P糖蛋白 盐酸千金藤碱 K562/ADR细胞 -
地西他滨联合阿霉素逆转白血病K562细胞株多药耐药作用观察
目的 观察地西他滨(DCA)联合阿霉素(ADR)对白血病K562细胞株多药耐药的逆转作用,探讨其治疗白血病的可行性.方法 以不同浓度DCA+ADR处理K562/ADR细胞,用台盼蓝法观察药物对细胞生长曲线的影响,MTT法检测不同浓度DCA与ADR对K562/ADR细胞的杀伤活性,流式细胞技术检测细胞膜P糖蛋白及细胞内ADR浓度.结果 DCA+ADR对白血病K562细胞株多药耐药有明显逆转作用,可降低细胞膜P糖蛋白表达,提高K562耐药细胞株对ADR的敏感性.结论 DCA联合ADR可逆转白血病K562细胞株多药耐药性.
关键词： 白血病 地西他滨 阿霉素 K562/ADR细胞 -
盐酸千金藤素逆转K562/ADR细胞的多药耐药性及其与bcl-2的关系
目的研究盐酸千金藤素(CEP)对K562/ADR细胞多药耐药性的逆转作用及逆转机制.方法采用MTT法测定阿霉素(ADR)单用及与CEP,维拉帕米(VER)合用对K562,K562/ADR细胞的直接细胞毒作用;采用免疫组织化学(IHC)法测定K562细胞,K562/ADR细胞内bcl-2的表达,以及药物对bcl-2表达水平的影响.结果联合应用ADR和4μmol/L CEP使K562/ADR细胞对ADR的IC5o由13.5μmol/L降至1.73μmol/L,其逆转倍数为7.8倍,但对K562细胞无明显影响;联合应用ADR和4μmol/L VER使K562/ADR细胞对ADR的IC50降至7.50μmol/L,其逆转倍数为1.8倍,但对K562细胞也无明显影响.用IHC法检测bcl-2的表达,K562/ADR细胞中bcl-2的表达量为26.79%,远高于K562细胞中表达量4.98%,而联合应用ADR和4μmol/L CEP使K562/ADR细胞中bcl-2的表达量降至13.16%.结论CEP可部分逆转K562/ADR细胞的耐药性,其机制可能与降低bcl-2的表达有关.
关键词： 盐酸千金藤素 K562细胞 K562/ADR细胞 Bcl-2 阿霉素 -
DC-CIK细胞对K562/ADR细胞多药耐药的逆转作用
目的 探讨共培养树突状细胞(dendritic cell,DC)和细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer cell,CIK),即DC-CIK逆转白血病细胞多药耐药的作用及相关机制.方法 采用RT-PCR方法检测DC-CIK处理后的耐药细胞株(K562/ADR细胞)中多药耐药基因(mdr1基因)的表达;利用MTT法检测DC-CIK细胞处理后的耐药细胞株对阿霉素敏感性的变化.结果 经DC-CIK作用后的K562/ADR细胞mdr1表达明显低于未经DC-CIK处理的K562/ADR细胞组(P<0.05),而且其对阿霉素的敏感性也明显高于未经DC-CIK处理的K562/ADR细胞(P<0.05).结论 DC-CIK可逆转耐药细胞的多药耐药,其作用机制可能与下调耐药细胞中mdr1的表达有关.
关键词： DC-CIK K562/ADR细胞 多药耐药 逆转 -
千金藤素协同多柔比星逆转K562/ADR耐药的分子机制研究
目的 探讨千金藤素协同多柔比星逆转K562/ADR细胞耐药的分子机制.方法 MTT法测定K562、K562/ADR细胞存活率;Western blot检测多药耐药蛋白Mdr-1、凋亡相关蛋白以及线粒体分裂关键蛋白Drp1和p-Drp1(Ser637)、线粒体外膜蛋白Tom20蛋白的表达:流式细胞仪检测K562/ADR细胞凋亡以及ROS生成量;免疫共沉淀技术检测Drp1、Tom20蛋白之间特异性结合.结果 梯度浓度多柔比星均会降低K562、K562/ADR细胞存活率,两者的IC50值分别为(0.75±0.11)、(75.97±2.17) μmol/L,差异有统计学意义(P＜0.01).K562细胞中检测不到多药耐药蛋白,而在K562/ADR细胞中Mdr-1高表达.千金藤素与多柔比星协同作用于K562/ADR细胞,导致K562/ADR存活率明显降低并呈较好的量效关系,协同系数均小于1,K562/ADR细胞凋亡率显著增加(P＜0.01).千金藤素与多柔比星协同作用于K562/ADR细胞导致ROS生成量显著升高,Drp1线粒体转位增加.抑制ROS则可阻断两种药物协同作用引起的Drp1线粒体转位,降低K562/ADR细胞凋亡率(P＜0.01).结论 千金藤素协同多柔比星诱导ROS生成促进Drp1线粒体转位,导致线粒体过度分裂和细胞凋亡,终逆转K562/ADR耐药.
关键词： 千金藤素 K562/ADR细胞 耐药 线粒体分裂 凋亡 -
三唑类抗真菌药联合多柔比星逆转白血病细胞株耐药性研究
目的 探讨三唑类抗真菌药伊曲康唑、氟康唑联合多柔比星逆转白血病细胞株耐药的作用.方法 伊曲康唑、氟康唑或PSC833(阳性对照)分别联合多柔比星与人类慢性粒细胞白血病红白血病耐多柔比星细胞株K562/ADR共同培养,采用CCK-8法检测K562/ADR细胞增殖,流式细胞术检测K562/ADR细胞内多柔比星平均荧光强度,蛋白印迹法检测K562/ADR细胞γH2AX的表达.结果 1 μg/ml伊曲康唑及0.5 μg/ml PSC833可将K562/ADR对多柔比星的IC50从38.30 μg/ml降至8.59 μg/ml和24.64 μg/ml,且呈剂量依赖性.1μg/ml伊曲康唑或0.5 μg/ml PSC833联合多柔比星作用K562/ADR细胞3h和6h后,细胞内多柔比星平均荧光强度相对单加多柔比星组增加了1.54倍(3 h)、1.50倍(6 h)或5.97倍(3 h)、5.83倍(6 h).伊曲康唑或PSC833联合多柔比星可显著增加K562/ADR细胞γH2AX的表达.结论 伊曲康唑通过提高细胞内多柔比星浓度及协同增强细胞DNA的损伤,恢复K562/ADR对多柔比星的敏感性,而氟康唑则无作用.
