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人巨细胞病毒感染对THP-1源性巨噬细胞自噬的影响
目的 了解人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)感染THP-1源性巨噬细胞后对细胞自噬的影响.方法 构建HCMV感染THP-1源性巨噬细胞模型,分别设HCMV感染组(HCMV组)、热灭活HCMV感染组(Heat-HCMV组)、模拟感染对照组(M组)和雷帕霉素(rapamycin,400 nmol)自噬阳性对照组(RAPA组),病毒感染复数=1.采用western blot检验测量各组自噬相关蛋白Beclin1表达量和LC3转化量(LC3-II/LC3-I)在感染后1 h、3 h、6 h、12 h、24 h和48 h的动态变化,并用透射电镜观察感染后6 h、12 h和24 h各组细胞胞质中自噬泡形成的数量.结果 在HCMV感染组,HCMV感染THP-1源性巨噬细胞后1 h,自噬相关蛋白Beclin1表达量明显增高,高于模拟感染组.LC3转化量在感染后6 h明显增高,高于模拟感染组.感染后24 h和48 h,Beclin1表达量和LC3转化量都降低,且均低于RAPA阳性对照组.用热灭活HCMV处理THP-1源性巨噬细胞,Beclin1在1 h就开始明显高表达,高于模拟感染组.LC3转化量在6 h开始明显增高,高于模拟感染组.用透射电镜观察到在HCMV感染THP-1源性巨噬细胞后6 h,自噬泡数目明显增加,但感染后24 h明显降低.热灭活HCMV处理THP-1源性巨噬细胞后6 h,自噬泡明显增加,并持续到48 h.结论 HCMV感染THP-1源性巨噬细胞早期可激活细胞自噬,其激活方式可能并不依赖于HCMV复制,而感染后期细胞自噬受到抑制,这可能与HCMV复制等因素有关,但需进一步实验证实.
关键词： 巨细胞病毒 巨噬细胞 自噬 THP-1源性巨噬细胞 -
人巨细胞病毒感染THP-1源性巨噬细胞对IL-1β表达的影响
目的 观察HCMV感染THP-1源性巨噬细胞后,促炎细胞因子IL-1β表达的时序性变化.方法 构建HCMV感染THP-1源性巨噬细胞模型,设立HCMV AD169标准毒株感染组、模拟感染对照组、LPS+ATP对照组和poly(dA:dT)对照组.用ELISA法测定THP-1源性巨噬细胞培养上清IL-1β水平在病毒感染细胞后lh、3h、6h、12h、24 h和48 h的时序性变化.分别用real-time PCR和western blot检测感染后6 h IL-1β基因和蛋白的表达水平.结果 HCMV感染THP-1源性巨噬细胞6h后,促炎细胞因子IL-1β基因的相对表达量是模拟感染组的7.77倍.HCMV感染THP-1源性巨噬细胞1h后,细胞上清IL-1β表达量逐渐显著增高,感染后3h和6h继续升高,感染后12h达到高峰,一直持续到48 h.HCMV感染THP-1源性巨噬细胞6h HCMV感染组IL-1β蛋白表达明显高于模拟感染对照组和poly(dA:dT)对照组,而与LPS+ATP对照组比较无统计学差异.结论 HCMV感染THP-1源性巨噬细胞可诱导IL-1β高表达,且呈时序性增高趋势.
关键词： 人巨细胞病毒 THP-1源性巨噬细胞 IL-1β -
Ibrolipim对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞三磷酸腺苷结合盒转运体Al表达及肿瘤坏死因子-α释放的影响
目的：为探讨巨噬细胞源性泡沫细胞肿瘤坏死因子-α的释放与新药Ibrolipim (NO-1886)抗动脉粥样硬化作用的关系。方法采用体外培养的THP-1细胞构建泡沫细胞模型，分别经Ibrolipim处理6、12、24 h后，高效液相色谱法检测细胞内胆固醇含量的变化，双抗体夹心法检测细胞培养液肿瘤坏死因子-α的水平，免疫印迹法检测细胞中三磷酸腺苷结合盒转运体A l蛋白的表达。结果与对照组比较，泡沫细胞经Ibrolipim处理6、12、24 h后，细胞内总胆固醇含量和游离胆固醇含量不断减少，细胞培养液中的肿瘤坏死因子-α水平逐渐降低，细胞中三磷酸腺苷结合盒转运体Al蛋白的表达升高。结论Ibrolipim抗动脉粥样硬化的作用与其减少泡沫细胞肿瘤坏死因子-α的释放有关。
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宁心痛颗粒含药血清及有效组分干预THP-1源性巨噬细胞泡沫化的效应与机制
目的 探讨宁心痛颗粒含药血清及主要药物的有效组分(黄芪多糖、藁本内酯)干预THP-1源性巨噬细胞泡沫化的效应与机制.方法 采用佛波酯诱导人THP-1细胞转化为巨噬细胞,再与oxLDL共培养建立泡沫细胞模型;分为空白对照组、模型对照组、宁心痛颗粒含药血清(CMS)组、空白血清组、黄芪多糖(APS)组、藁本内酯(LIG)组、黄芪多糖合藁本内酯(APS +LIG)组7组,对巨噬细胞泡沫化过程进行干预.运用高效液相色谱法检测泡沫化程度(CE/TC比值),Western blot法检测SRA-Ⅰ、CD36、ABCA1、LXR-α、PPAR-y的表达.结果 与空白对照组比较,模型对照组CE/TC值、SRA-Ⅰ、CD36、ABCA1及LXR-α 、PPAR γ蛋白表达升高(P＜0.05);与模型对照组比较,LIG组、APS+LIG组、CMS组CE/rC值降低(P＜0.05),除APS组ABCA1外,APS组、LIG组、APS+LIG组、CMS组SRA-Ⅰ、CD36蛋白表达降低,AB-CA1、LXR-α、PPARy蛋白表达升高(P＜0.05).与APS组比较,CMS组CE/TC值降低,ABCA1蛋白表达升高(P＜0.05).结论 宁心痛颗粒含药血清、主要药物的有效组分(APS、LIG)均可不同程度抑制THP-1源性巨噬细胞泡沫化,其机制可能与调节巨噬细胞脂质吞噬-逆转运间的平衡,即下调脂蛋白吞噬受体SRA-Ⅰ、CD36的表达,上调胆固醇逆转运通路中的ABCA1、PPARγ及LXR-α的表达有关.
关键词： 宁心痛颗粒 含药血清 有效组分 THP-1源性巨噬细胞 泡沫细胞 -
宁心痛颗粒含药血清及有效组分干预THP-1源性巨噬细胞泡沫化的效应与机制
目的 探讨宁心痛颗粒含药血清及主要药物的有效组分(黄芪多糖、藁本内酯)干预THP-1源性巨噬细胞泡沫化的效应与机制.方法 采用佛波酯诱导人THP-1细胞转化为巨噬细胞,再与oxLDL共培养建立泡沫细胞模型;分为空白对照组、模型对照组、宁心痛颗粒含药血清(CMS)组、空白血清组、黄芪多糖(APS)组、藁本内酯(LIG)组、黄芪多糖合藁本内酯(APS + LIG)组7组,对巨噬细胞泡沫化过程进行干预.运用高效液相色谱法检测泡沫化程度(CE/TC比值),Western blot法检测SRA-I、CD36、ABCA1、LXRα、PPAR-γ的表达.结果 与空白对照组比较,模型对照组CE/TC值、SRA-I、CD36、ABCA1及LXR-α、 PPARγ蛋白表达升高(P ＜0. 05);与模型对照组比较,LIG组、APS + LIG组、CMS组CE/TC值降低(P ＜ 0. 05),除 APS 组 ABCA1 外,APS 组、LIG 组、APS + LIG 组、CMS 组 SRA-I、CD36 蛋白表达降低,ABCA1、LXR-a、PPARγ蛋白表达升高(P ＜0.05).与APS组比较,CMS组CE/TC值降低,ABCA1蛋白表达升高(P＜0.05).结论 宁心痛颗粒含药血清、主要药物的有效组分(APS、LIG)均可不同程度抑制 THP-1源性巨噬细胞泡沫化,其机制可能与调节巨噬细胞脂质吞噬-逆转运间的平衡,即下调脂蛋白吞噬受体SRA-I、CD36的表达,上调胆固醇逆转运通路中的ABCA1、PPARγ及LXR-α的表达有关.
关键词： 宁心痛颗粒 含药血清 有效组分 THP-1源性巨噬细胞 泡沫细胞 -
鬼箭羽水溶成分抑制氧化型低密度蛋白诱导的THP-1源性巨噬细胞炎症因子表达
目的：探讨鬼箭羽水溶成分对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的THP-1源性巨噬细胞炎症因子表达的影响。方法将THP-1源性巨噬细胞分为五个组，即对照组、ox-LDL组、鬼箭羽1组、鬼箭羽2组、鬼箭羽3组。MTT (噻唑蓝)比色法检测THP-1细胞活力，酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)的含量。结果鬼箭羽能明显改善ox-LDL作用下THP-1源性巨噬细胞的细胞活力，抑制ox-LDL诱导的细胞炎症因子分泌，并且呈现浓度依赖性，差异有统计学意义(P<0.05)。结论鬼箭羽水溶成分抑制氧化型低密度脂蛋白诱导的THP-1源性巨噬细胞炎症因子表达有关。
关键词： 鬼箭羽 氧化型低密度脂蛋白 THP-1源性巨噬细胞 细胞活力 炎症因子 -
miR-148a 靶向DNA甲基转移酶1对 ATP结合盒转运体 G1基因甲基化的调节
目的 探讨微小RNA(miR-148a)在巨噬细胞中能否靶向DNA甲基转移酶1(DNMT1)从而调节ATP结合盒转运体G1(ABCG1)的甲基化水平.方法 运用生物信息学网站预测DNMT1是miR-148a靶基因,利用双萤光素酶报告基因系统验证miR-148a能否与DNMT1 (3'UTR)特异性结合;将miR-148a模拟物转染至THP-1源性巨噬细胞,运用实时荧光定量PCR技术检测DNMT1的mRNA水平,运用Western Blot技术检测DNMT1蛋白表达水平;运用焦磷酸测序技术观察miR-148a能否在巨噬细胞中影响ABCG1甲基化水平.结果 miR-148a能显著降低pmirGLO-DNMT1载体上的萤火虫萤光素酶活性;miR-148a在巨噬细胞中不能降低DNMT1的mRNA水平,但可以降低DNMT1的蛋白质水平,上述差异均有统计学意义(P＜0.05);焦磷酸测序发现在THP-1源性巨噬细胞miR-148a未影响ABCG1的甲基化水平.结论 miR-148a可以与DNMT1(3'UTR)特异性结合并且阻遏DNMT1蛋白质合成,但是在巨噬细胞中不能通过改变DNMT1的蛋白水平而影响ABCG1甲基化水平.
关键词： miR-148 DNA甲基转移酶1 甲基化 THP-1源性巨噬细胞 -
吡格列酮对THP-1源性巨噬细胞胆固醇流出调节蛋白ABCA1,ABCG1及SR-BⅠ表达的影响
目的:探讨吡格列酮对THP-1源性巨噬细胞ATP结合盒转运蛋白A1 (ABCA1)、ATP结合盒转运蛋白G1(ABCG1)及B族Ⅰ型清道夫受体(SR-B Ⅰ)表达的影响及可能作用机制.方法:Real time PCR及Westernblot检测不同浓度吡格列酮(1,10,20,30 μmol/L)作用24 h,THP-1源性巨噬细胞ABCA1,ABCG1及SR-BⅠmRNA和蛋白的表达.使用过氧化物酶体增殖物激活型受体γ(PPARγ)特异性拮抗剂GW9662(2 μmol/L)阻断吡格列酮(10 μmol/L),24 h后检测THP-1源性巨噬细胞ABCA1,ABCG1及SR-B Ⅰ mRNA和蛋白的表达.结果:吡格列酮可浓度依赖性增高24 h THP-1源性巨噬细胞ABCA1,ABCG1及SR-BⅠ mRNA和蛋白的表达,GW9662可显著抑制吡格列酮诱导的THP-1源性巨噬细胞ABCA1,ABCG1及SR-BⅠ mRNA和蛋白表达的增高(P＜0.05).结论:吡格列酮激动PPARγ上调THP-1源性巨噬细胞胆固醇流出调节蛋白ABCA1,ABCG1及SR-BⅠ基因的表达.
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荷叶生物碱下调THP-1源性巨噬细胞microRNA-33a-5p的表达及上调ABCA1/G1的表达
目的 探讨荷叶生物碱对THP-1源性巨噬细胞microRNA-33a-5p(miR-33a-5p)及三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)和三磷酸腺苷结合盒转运体G1(ABCG1)表达的影响.方法 用佛波酯将THP-1细胞诱导分化为巨噬细胞,再将巨噬细胞随机分成四组:空白对照组、氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)组、荷叶生物碱组、荷叶生物碱+ox-LDL组,油红O染色观察细胞内脂质变化,RT-PCR和Western blot检测各组细胞miR-33a-5p的表达及AB-CA1/G1 mRNA和蛋白的表达.结果 与空白对照组比较,ox-LDL组脂质蓄积明显增加,miR-33a-5p的表达减少,ABCA1/G1的表达增加.与空白对照组比较,荷叶生物碱组脂质蓄积无明显差异,miR-33a-5p的表达显著减少,ABCA1/G1的表达显著增加.与ox-LDL组比较,荷叶生物碱+ox-LDL组脂质蓄积明显减少,miR-33a-5p的表达显著减少,ABCA1/G1的表达显著增加.结论 荷叶生物碱下调THP-1源性巨噬细胞miR-33a-5p的表达,上调AB-CA1/G1的表达,增加细胞内胆固醇流出,抑制细胞泡沫化.
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阿托伐他汀对THP-1源性巨噬细胞自体吞噬的影响
目的 观察阿托伐他汀对THP-1源性巨噬细胞自体吞噬(自噬)的影响.方法 用Hank's液代替常规培养液的饥饿诱导的方法使THP-1源性巨噬细胞发生自噬,在诱导自噬过程中,使细胞分别与含有低浓度(1μmol/L)和高浓度(5μmol/L)阿托伐他汀钙的培养液共同孵育,以空白组作对照,运用间接免疫荧光染色法,采用荧光显微镜观察LC3-FITC点状聚集情况,应用透射电镜观测各组细胞自噬的发生情况.结果 与对照组相比,两组合阿托伐他汀钙培养液的巨噬细胞中的自噬泡占胞质总面积均明显增多(P＜0.05),高浓度阿托伐他汀组自噬泡占胞质总面积高于低浓度阿托伐他汀组,但无显著性差异(P =0.079).结论 阿托伐他汀钙可以促进THP-1源性巨噬细胞自噬.
关键词： 自体吞噬 阿托伐他汀 THP-1源性巨噬细胞 透射电镜 -
硫化氢对THP-1源性巨噬细胞脂质摄取的影响
目的 探索硫化氢对THP-1源性巨噬细胞脂质摄取的影响及可能机制.方法 采用荧光显微镜测DiI标记的氧化型低密度脂蛋白(DiI-ox-LDL)摄取、RT-PCR和免疫印迹法测定CD36 mRNA和蛋白表达.结果 巨噬细胞与DiI-ox-LDL孵育后大量摄取氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL),外源性硫化氢供体硫氢化钠显著抑制巨噬细胞摄取氧化型低密度脂蛋白,而炔丙基甘氨酸(一个硫化氢产生酶胱硫醚-γ-裂解酶抑制剂)加剧巨噬细胞摄取氧化型低密度脂蛋白.进而,硫氢化钠呈浓度依赖性抑制巨噬细胞CD36 mRNA和蛋白表达,而炔丙基甘氨酸促进巨噬细胞CD36 mRNA和蛋白表达.结论 硫化氢抑制巨噬细胞摄取脂质及清道夫受体CD36 表达.
关键词： 硫化氢 THP-1源性巨噬细胞 氧化型低密度脂蛋白 脂质摄取 -
THP-1源性巨噬细胞泡沫化过程中肝X受体-α乙酰化修饰改变与SIRT1有关
目的 为研究THP-1源性巨噬细胞泡沫化过程中,SIRT1与肝X受体-α是否发生相互作用、肝X受体-α的乙酰化修饰如何改变及其与细胞内胆固醇含量的关系.方法 采用体外培养的THP-1细胞构建泡沫细胞模型.高效液相色谱法检测细胞内胆固醇含量的变化,免疫共沉淀检测肝X受体-α与SIRT1是否结合,免疫印迹法检测肝X受体-α的乙酰化修饰改变及SIRT1的表达改变.结果 在氧化低密度脂蛋白诱导细胞分化12、24 h和48h后,细胞内胆固醇含量增加,SIRT1与肝X受体-α共沉降,去乙酰化的肝X受体-α蛋白水平升高,SIRT1蛋白的表达增加.结论 THP-1源性泡沫细胞形成过程中,肝X受体-α与SIRT1存在相互作用,肝X受体-α的乙酰化修饰逐渐降低,其机制与SIRT1的水平升高有关.
关键词： THP-1源性巨噬细胞 肝X受体-α SIRT1 乙酰化修饰 泡沫细胞 -
去甲肾上腺素对THP-1源性巨噬细胞转化生长因子β1表达的影响
目的 探讨去甲肾上腺素对人THP-1源性巨噬细胞转化生长因子β1表达的影响.方法 不同浓度的去甲肾上腺素(10 pmol/L～10 μmol/L)作用THP-1源性巨噬细胞24 h,运用逆转录多聚酶链反应检测转化生长因子β1 mRNA的表达,酶联免疫吸附试验检测转化生长因子β1蛋白的表达.结果 100 nmol/L、1 μmol/L及10 μmol/L去甲肾上腺素引起巨噬细胞中转化生长因子β1 mRNA水平分别下降9.3% (P＜0.05)、39.5% (P＜0.01)和47.8% (P＜0.01),1 μmol/L及10 μmol/L的去甲肾上腺素作用于THP-1巨噬细胞其细胞上清中转化生长因子β1蛋白含量分别下降24.7%(P＜0.01)和32.8%(P＜0.01).结论 应激浓度的去甲肾上腺素能降低THP-1源性巨噬细胞转化生长因子β1基因的表达.
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外源性硫化氢通过抑制SR-A表达减少THP-1源性巨噬细胞内脂质蓄积
目的 探索外源性硫化氢对THP-1源性巨噬细胞脂质蓄积的影响及机制.方法 以硫氢化钠(NaHS)做为外源性硫化氢的供体,采用油红O染色结合光密度法测细胞内脂质含量,RT-PCR和Westernblot法测SR-A mRNA和蛋白表达.结果氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)显著诱导巨噬细胞内脂质蓄积和SR-A表达,而NaHS呈浓度依赖性降低ox-LDL诱导的细胞内脂质蓄积,并显著下调SR-A mRNA和蛋白水平.结论 外源性硫化氢可能通过抑制SR-A表达减少ox-LDL诱导的THP-1源性巨噬细胞脂质蓄积.
关键词： 硫化氢 THP-1源性巨噬细胞 脂质蓄积 清道夫受体A -
白藜芦醇对H2O2诱导的THP-1源性巨噬细胞氧化损伤的影响
目的 探讨白藜芦醇(Res)对H2O2诱导的THP-1源性巨噬细胞氧化损伤的影响.方法 采用H2O2处理培养THP-1源性巨噬细胞,造成氧化应激模型.不同终度的Res预作用THP-1源性巨噬细胞组1 h后加入300 μmol/L H2O2作用24 h.应用MTT比色法检测细胞存活率,黄嘌呤氧化法检测超氧化物歧化酶(SOD)的活力,硫代巴比妥酸比色法检测丙二醛(MDA)含量.结果 与空白对照组比较,不同浓度H2O2处理THP-1源性巨噬细胞24 h后,THP-1源性巨噬细胞的存活率呈剂量依赖性下降(P<0.05).Res预处理组的细胞存活率均高于模型组(300 μmol/L H2O2)(P<0.05),且以40 μmol/L Res作用效果佳.40~100 μmol/L Res预处理组与模型组相比,MDA的含量明显减少,SOD的活力升高(P<0.05).结论 Res可减轻H2O2对THP-1源性巨噬细胞的损伤程度,其机制可能与其抗氧化作用有关.
关键词： 白藜芦醇 氧化应激 THP-1源性巨噬细胞 -
银杏黄酮对人单核细胞泡沫化形成的作用研究
目的：银杏黄酮具有多种生理活性，是临床治疗和预防心脑血管疾病的首选天然药物。通过观察银杏黄酮对人单核细胞 THP －1源性泡沫细胞胆固醇含量的影响，探讨银杏黄酮对人单核细胞 THP －1泡沫化形成的机制。方法：以氧化型低密度脂蛋白（ox －LDL）诱导人 THP －1单核细胞源性巨噬细胞形成泡沫细胞模型，通过油红 O 染色观察银杏黄酮对泡沫细胞形成的影响，胆固醇氧化酶法测定细胞内总胆固醇蓄积情况。结果：利用 ox －LDL 能使人单核细胞 THP －1形成稳定的泡沫细胞模型，用银杏黄酮干预后，泡沫细胞中总胆固醇的含量显著减少。结论：银杏黄酮能抑制 THP －1源性泡沫细胞的形成，并减少 THP －1源性泡沫细胞内脂质含量。
关键词： 银杏黄酮 THP-1源性巨噬细胞 泡沫细胞 胆固醇
