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前S2区突变LHBs与C53蛋白相互作用对HepG2细胞生物学功能的影响
目的 明确肝癌细胞系HepG2中前S2区突变乙型肝炎表面抗原大蛋白(hepatitis B virus large surface protein,LHBs)与C53蛋白相互作用对细胞生物学功能的影响.方法 分别构建pCMV-5a-pre S2 LHBs和pCDNA-4-C53质粒,共同转染肝癌细胞系HepG2后,分别检测其相互作用对Chk1活性的影响；BrdU法细胞增殖检测明确其对细胞有丝分裂及增殖的影响.结果 成功构建pCMV-5a-pre S2 LHBs和pCDNA-4-C53质粒；其在细胞内的相互作用增加细胞Cdk1活性并促进细胞的增殖和有丝分裂过程.结论 肝癌细胞系HepG2内pre S2 LHBs及C53的相互作用对细胞生物学功能存在影响,提示可能与HBV后肝癌的发病机制相关.
关键词： 乙型肝炎表面抗原大蛋白 C53 HepG2 Cdk1 有丝分裂 -
LHBs与C53蛋白相互作用对肝癌细胞生物学功能的影响
目的 研究肝癌细胞系HepG2中乙型肝炎表面抗原大蛋白(hepatitis B virus large surface protein,LHBs)与C53蛋白结合后对细胞生物学功能的影响.方法 分别构建pCDNA-LHBs、pC-MV-5a-C53和pAdTrack-CMV-C53的shRNA干扰质粒,转染肝癌细胞系HepG2.采用BrdU标记试验、3H掺入试验和WB实验研究对细胞生物学功能的影响.结果 成功构建pCDNA-LHBs、pCMV-5a-C53和pAdTrack-CMV-C53质粒;BrdU和H3标记试验证实,在HepG2细胞内LHBs通过与C53蛋白结合促进细胞进入有丝分裂期,进而促进细胞增殖,该作用与Cdk1相关.结论 肝癌细胞系HepG2中LHBs通过与C53蛋白结合促进细胞进入有丝分裂期,进而促进细胞增殖,该作用与Cdk1相关.
关键词： 乙型肝炎表面抗原大蛋白 C53 HepG2 有丝分裂 细胞增殖 -
LHBs与C53蛋白在肝癌细胞系HepG2中的共定位及结合区域研究
目的 研究肝癌细胞系HepG2中乙型肝炎表面抗原大蛋白(hepatitis B virus large surface protein,LHBs)与C53蛋白是否存在共定位,查明LHBs与C53蛋白的结合区域.方法 分别构建pEGFP-C1-LHBs和pDsRed1-N1-C53质粒,共同转染肝癌细胞系HepG2,激光共聚焦观察它们在细胞内的共定位.构建质粒pCDNA-3.1(-)myc/his-LHBs和pCMV-5a-C53,并将C53基因截短构建质粒pCMV-5a-C53N、pCMV-5a-C1、pCMV-5a-C2和pCMV-5a-C3,将pCDNA-3.1(-)myc/his-LHBs和pC-MV-5a-C53及各截短质粒共转染HepG2细胞,免疫共沉淀方法验证LHBs结合的C53区域.结果 成功构建pEGFP-C1-LHBs、pDsRed1-N1-C53、pCDNA-3.1(-)myc/his-LHBs、pCMV-5a-C53、pCMV-5a-C53N、pCMV-5a-C1、pCMV-5a-C2和pCMV-5a-C3质粒；用激光共聚焦的方法证实了LHBs与C53在HepG2细胞内存在共定位；免疫共沉淀方法证实了在HepG2细胞内LHBs与C53的结合区域为其C1区.结论 LHBs与C53在肝癌细胞系HepG2内存在明确的相互作用,但仍需做进一步的功能研究.
关键词： 乙型肝炎表面抗原大蛋白 C53 HepG2 共定位 结合区域 -
e抗原阴性慢性乙型肝炎患者血清表面抗原大蛋白水平与乙型肝炎病毒DNA之间的关系
我国约1/3的慢性乙型肝炎患者乙型肝炎e抗原(HBeAg)阴性,但仍然伴有高水平的乙型肝炎病毒(HBV)复制[1].在不能进行HBV DNA检测的单位,对这些患者HBV复制程度的判定难以进行.现探讨HBeAg阴性慢性乙型肝炎患者血清中乙型肝炎病毒表面抗原大蛋白(LHBs)与HBV DNA的关系,试图明确LHBs是否可以用作HBeAg阴性乙型肝炎患者病毒复制程度的判定指标.
