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前S2区突变LHBs与C53蛋白相互作用对HepG2细胞生物学功能的影响
目的 明确肝癌细胞系HepG2中前S2区突变乙型肝炎表面抗原大蛋白(hepatitis B virus large surface protein,LHBs)与C53蛋白相互作用对细胞生物学功能的影响.方法 分别构建pCMV-5a-pre S2 LHBs和pCDNA-4-C53质粒,共同转染肝癌细胞系HepG2后,分别检测其相互作用对Chk1活性的影响；BrdU法细胞增殖检测明确其对细胞有丝分裂及增殖的影响.结果 成功构建pCMV-5a-pre S2 LHBs和pCDNA-4-C53质粒；其在细胞内的相互作用增加细胞Cdk1活性并促进细胞的增殖和有丝分裂过程.结论 肝癌细胞系HepG2内pre S2 LHBs及C53的相互作用对细胞生物学功能存在影响,提示可能与HBV后肝癌的发病机制相关.
关键词： 乙型肝炎表面抗原大蛋白 C53 HepG2 Cdk1 有丝分裂 -
LHBs与C53蛋白相互作用对肝癌细胞生物学功能的影响
目的 研究肝癌细胞系HepG2中乙型肝炎表面抗原大蛋白(hepatitis B virus large surface protein,LHBs)与C53蛋白结合后对细胞生物学功能的影响.方法 分别构建pCDNA-LHBs、pC-MV-5a-C53和pAdTrack-CMV-C53的shRNA干扰质粒,转染肝癌细胞系HepG2.采用BrdU标记试验、3H掺入试验和WB实验研究对细胞生物学功能的影响.结果 成功构建pCDNA-LHBs、pCMV-5a-C53和pAdTrack-CMV-C53质粒;BrdU和H3标记试验证实,在HepG2细胞内LHBs通过与C53蛋白结合促进细胞进入有丝分裂期,进而促进细胞增殖,该作用与Cdk1相关.结论 肝癌细胞系HepG2中LHBs通过与C53蛋白结合促进细胞进入有丝分裂期,进而促进细胞增殖,该作用与Cdk1相关.
关键词： 乙型肝炎表面抗原大蛋白 C53 HepG2 有丝分裂 细胞增殖 -
LHBs与C53蛋白在肝癌细胞系HepG2中的共定位及结合区域研究
目的 研究肝癌细胞系HepG2中乙型肝炎表面抗原大蛋白(hepatitis B virus large surface protein,LHBs)与C53蛋白是否存在共定位,查明LHBs与C53蛋白的结合区域.方法 分别构建pEGFP-C1-LHBs和pDsRed1-N1-C53质粒,共同转染肝癌细胞系HepG2,激光共聚焦观察它们在细胞内的共定位.构建质粒pCDNA-3.1(-)myc/his-LHBs和pCMV-5a-C53,并将C53基因截短构建质粒pCMV-5a-C53N、pCMV-5a-C1、pCMV-5a-C2和pCMV-5a-C3,将pCDNA-3.1(-)myc/his-LHBs和pC-MV-5a-C53及各截短质粒共转染HepG2细胞,免疫共沉淀方法验证LHBs结合的C53区域.结果 成功构建pEGFP-C1-LHBs、pDsRed1-N1-C53、pCDNA-3.1(-)myc/his-LHBs、pCMV-5a-C53、pCMV-5a-C53N、pCMV-5a-C1、pCMV-5a-C2和pCMV-5a-C3质粒；用激光共聚焦的方法证实了LHBs与C53在HepG2细胞内存在共定位；免疫共沉淀方法证实了在HepG2细胞内LHBs与C53的结合区域为其C1区.结论 LHBs与C53在肝癌细胞系HepG2内存在明确的相互作用,但仍需做进一步的功能研究.
关键词： 乙型肝炎表面抗原大蛋白 C53 HepG2 共定位 结合区域 -
肿瘤抑制因子C53抑制肿瘤血管再生作用的研究
目的 模拟肿瘤中的低氧状态,研究人类脐静脉内皮细胞(HUVEC)中C53水平的变化及其在血管再生中的调控作用.方法 采用2%O2浓度低氧培养HUVEC作为实验组,且依据低氧培养时间段不同分为4组:12 h组、24 h组、36 h组及48 h组,常氧培养HUVEC组作为对照组,共计5组.分别收集各组细胞样本,检测胞内C53、p38MAPK、phos-p38MAPK等多种蛋白水平.分别收集各组细胞培养上清液,检测其中血管内皮生长因子(VEGF)水平.采用5组不同的细胞培养上清液培养HUVEC,分别检测各组HUVEC的增殖率、迁移率及管腔形成能力.结果 与常氧对照组相比,低氧培养36 h及48 h组HUVEC中C53蛋白水平降低,而p38MAPK活化水平增高.与常氧对照组相比,低氧培养12、24、36及48 h组HUVEC的VEGF分泌水平均高于常氧对照组(P<0.05).同常氧培养上清液相比较,低氧培养上清液可提高内皮细胞血管再生能力的增殖、迁移及管腔形成能力,尤以36 h和48 h组表现更为明显(P<0.05).结论 肿瘤中的低氧微环境可抑制C53蛋白的表达,通过减轻C53对p38MAPK通路的抑制作用,有效激活p38MAPK通路及下游的效应分子VEGF的合成及表达,达到促进血管再生目的.
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肝癌中C53的表达及临床病理表现初探
目的 探讨周期素依赖性蛋白激酶5激活物结合蛋白(C53)在不同肝癌组织及肝硬化组织中的表达及其临床病理指标关系.方法 应用免疫组化方法检测高分化肝细胞癌及癌旁组织5例,中低分化肝细胞癌及癌旁组织各5例,肝内胆管癌及癌旁组织各5例,轻微早期肝脏纤维化5例,并分析其表达与临床病理指标关系. 结果高分化肝细胞癌常规组5例,3例强阳性,1例弱阳性,1例为阴性,癌旁组织常规组1例阳性,3例弱阳性,1例为阴性,热修复组均为阴性;中低分化肝细胞癌常规组5例,1例强阳性,3例弱阳性,1例在操作中掉片.癌旁组织常规组5例,2例弱阳性,3例为阴性;肝内胆管癌常规组5例,1例阳性,1例弱阳性,3例为阴性,而热修复组均为阳性.癌旁组织常规组1例阳性,4例为阴性,热修复组均为阴性.轻微早期肝脏纤维化组5例,C53均无表达. 结论 C53主要定位在肝细胞胞浆中,其表达的强弱与肝细胞癌的分化程度有关,癌旁组织也有低表达,轻微早期肝脏纤维化没有表达.
