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激光针灸对慢性萎缩性胃炎大鼠胃黏膜三叶因子表达的影响
目的 观察激光针灸干预对慢性萎缩性胃炎(CAG)大鼠胃黏膜组织三叶因子家族1(TFF1)及三叶因子家族3(TFF3)表达的影响.方法 共选取清洁级健康Wistar大鼠50只,随机取9只大鼠纳入正常组,采用综合法将余下大鼠制成CAG动物模型,待病理检查确认造模成功后,将CAG造模动物随机分为模型对照组、给药组及激光针灸组.给药组大鼠采用延参健胃胶囊及康复新液进行灌服,激光针灸组选择足三里作为针灸穴位并给予氦氖激光穴位照射.经14 d干预后采集各组大鼠标本,采用免疫组织化学法检测各组大鼠胃黏膜中TFF1及TFF3表达.结果 正常组大鼠胃黏膜中TFF1表达较强,模型组TFF1表达较正常组明显减弱(P＜0.05),给药组、激光针灸组TFF1表达则较模型组明显增强(P＜0.05);正常组大鼠胃黏膜中TFF3表达较弱,模型组TFF3表达较正常组明显增强(P＜0.05),激光针灸组TFF3表达较模型组明显减弱(P＜0.05);给药组、激光针灸组TFF1及TFF3表达与正常组间差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 激光针灸干预对CAG大鼠胃黏膜具有防御及修复损伤功能,其治疗机制可能与促进TFF1表达、降低TFF3表达有关.
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胃泌素及其受体拮抗剂对人胃癌细胞株MKN45增殖及TFF1、TFF3表达的影响
目的 探讨17肽胃泌素(Gas-17)及其受体拮抗剂对人胃癌细胞株MKN45增殖及三叶因子1(TTF1)、三叶因子3(TFF3)表达的影响,并分析TTF1、TFF3在胃癌病变过程中的作用.方法 培养人胃癌细胞株MKN45后按药物干预分组:第1组:17肽胃泌素组,培养液中Gas-17终浓度为1～1000 nm0 1/L;第2组:丙谷胺(PGL)组,培养液中PGL终浓度为0.1～10 mmol/L;第3组:17肽胃泌素+丙谷胺组(联合用药组),培养液中Gas-17终浓度为100 nmol/L、PGL终浓度为1～10 mmol/L;以不加药培养液为对照组.采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法观察各组细胞增殖活力.蛋白免疫印迹法(Western blot)测定17肽胃泌素组(培养液中Gas-17终浓度为1～100 nmol/L),丙谷胺组(PGL终浓度为10mmol/L),联合用药组(Gas-17终浓度为100 nmol/L、PGL终浓度为10 mmol/L)及不加药对照组中TFF1和TFF3蛋白的表达变化.结果 MTT结果显示:Gas-17在1～1000 nmol/L时具有明显的促MKN45细胞增殖作用(P＜0.05);PGL在1～10 mmol/L时有显著的抑制MKN45细胞增殖作用(P＜0.05);Gas-17+PGL组中,PGL(1～10 mmol/L)能阻断并抑制Gas-17对胃癌细胞MKN45的促增殖作用(P＜0.05).Western blot结果显示:在Gas-17组中TFF1蛋白表达减弱(P＜0.05),而TFF3蛋白表达增强(P＜0.05);PGL组中TFF1蛋白表达增强而TFF3蛋白表达减弱;Gas-17+PGL组中,PGL能阻断Gas-17诱导的TFF1蛋白表达下调(P＜0.05),阻断Gas-17诱导的TFF3蛋白表达上调(P＜0.05).结论 Gas-17可诱导人胃癌细胞MKN45增殖,其受体抑制剂PGL能阻断并抑制这一作用.胃癌细胞株MKN45中有TFF1和TTF3蛋白的表达,Gas-17促进TFF1蛋白表达下调,而促进TFF3蛋白表达上调,这可能是胃泌素诱导胃癌发生发展的的机制之一.
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三叶因子3和SDF-1/CXCR4生物轴在甲状腺乳头状癌中的表达及临床意义
目的:研究三叶因子3、基质细胞衍生因子-1(SDF-1)及其受体CXCR4在甲状腺乳头状癌(PTC),中的表达,探讨三者在乳头状癌发生、发展和转归中的作用及相关性.方法:应用免疫组织化学法(SP法)检测92例PTC及癌旁组织中TFF3、SDF-1及CXCR4的表达,采用图像分析软件系统对免疫组织化学结果进行半定量分析.结果:①TFF3蛋白表达于癌细胞胞质,癌旁滤泡上皮细胞TFF3阴性或弱阳性,TFF3阳性率92.39％,其中临床Ⅲ～Ⅳ期强阳性率为71.19％(42/59),Ⅰ～Ⅱ期强阳性率为33.33％(11/33,P＜0.01);有淋巴结转移者明显高于无淋巴结转移者(100.00％ vs 86.27％,P＜0.05).TFF3的AOD值在PTC内高于癌旁、有淋巴结转移者高于无淋巴结转移者、临床Ⅲ～Ⅳ期高于Ⅰ～Ⅱ期(P＜0.05或P＜0.01).②SDF-1表达于胞质,转移淋巴结和癌旁细胞为弱阳性或阴性.SDF-1阳性率和AOD值在PTC内高于癌旁、有淋巴结转移者高于无淋巴结转移者、临床Ⅲ～Ⅳ期高于Ⅰ～Ⅱ期、45岁以上高于45岁以下者(P＜0.05或P＜0.01);CXCR4主要表达于胞质,少数表达于胞核,癌旁组织中呈弱阳性或阴性,PTC中CXCR4表达的阳性率和AOD值与SDF-1相似:癌内高于癌旁、与临床分级、淋巴结转移和年龄有关(P＜0.05或P＜0.01).③PTC中,TFF3与SDF-1蛋白、SDF-1与CXCR4蛋白表达水平呈正相关(r=0.971,P＜0.01).结论:TFF3、SDF-1、CXCR4在PTC中的高表达与癌的发生、发展有关,对判断PTC的恶性程度和病情进展有重要价值.
关键词： 甲状腺乳头状癌 三叶因子3 基质细胞衍生因子-1 CXCR4 免疫组织化学 -
人三叶因子3shRNA表达质粒的构建及有效序列筛选
目的:三叶因子3(trefoil factor 3,TFF3)除具有黏膜保护作用外还与恶性肿瘤的形成、生长、转移有关.本研究通过慢病毒表达质粒介导shRNA,瞬时转染自身表达TFF3的甲状腺乳头状癌K1细胞,筛选出了靶向人TFF3的有效的siRNA序列.方法:分别在人TFF3基因mRNA的132、170、258和537 bp处作为潜在靶位点,合成4条siRNA转录模板的发夹结构(shRN A1～4)以及1条阴性对照(shRNAC),体外退火后插入pLVX-shRNA-puro构建重组质粒,酶切鉴定,并测序.瞬时转染K1细胞、Real-time PCR及western-blot等检测TFF3 mRNA和蛋白在转染细胞的表达.结果:shRNA 1～2两条发夹结构序列有基因突变,shRNA 3～4对K1细胞TFF3表达有不同程度的抑制效应(P＜0.01).其中shRNA3 (TFF3 258～276)表现出了高的沉默效率(转染效率76.83％时,mRNA水平的沉默效率达60.67％;蛋白质水平的沉默效率达56.44％,均P＜0.01).结论:成功构建了pLVX-shRNA-puro-TFF3慢病毒质粒,并筛选出了有效的序列,为进一步研究TFF3的功能奠定了基础.
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三叶因子3和血管内皮生长因子在胃癌组织中的表达及意义
目的：观察三叶因子3（TFF3）和血管内皮生长因子（VEGF）在正常胃黏膜组织、癌旁组织和胃癌组织中的表达，探讨TFF3、VEGF表达与胃癌发生、浸润、转移的关系。方法采用SP免疫组织化学方法检测30例正常胃黏膜组织、60例癌旁组织和60例胃癌组织中TFF3和VEGF的表达情况。结果正常胃黏膜组织→癌旁组织→胃癌组织中，TFF3蛋白阳性表达率呈逐渐升高趋势（3.3％、38.3％、58.3％，均P＜0.05），TFF3的表达与胃癌的淋巴结转移、TNM分期、浆膜浸润深度有关（均P＜0.05）；VEGF蛋白阳性表达率表达亦呈逐渐升高趋势（0.0％、45.0％、68.3％，均P＜0.05），VEGF的表达与肿瘤分化程度、浆膜浸润深度、淋巴结转移、TNM分期有关（均P＜0.05）；TFF3的表达与VEGF呈正相关（rs ＝0.473，P＝0.000）。结论 TFF3、VEGF可能参与了胃癌发生、发展、浸润及转移，可能是胃黏膜癌变过程中的早期分子事件。两者在胃癌的发生中起了协同作用，两者联合检测可作为胃癌的早期诊断和预测胃癌发生转移的重要指标。
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三叶因子3和基质金属蛋白酶-9在胃癌中的表达及意义
目的:检测三叶因子3(TFF3)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在胃癌组织、癌旁组织和正常胃黏膜组织中的表达及临床意义.方法:分别收集临床术后胃癌组织、距癌缘3～5cm癌旁组织和正常胃黏膜组织标本各60例,采用免疫组织化学SP法检测TFF3和MMP-9的表达情况.结果:胃癌组织中TFF3和MMP-9表达水平明显高于癌旁组织中表达水平和正常胃黏膜中表达水平,其中在胃癌组中三者的表达与分化程度、浸润深度及淋巴结转移有关(P＜0.05),而与患者年龄、性别和胃癌组织学分型无关(P＞0.05),且TFF3的表达强度与MMP-9呈正相关(r=0.753,P＜0.05).结论:TFF3及MMP-9在胃癌中明显升高且表达一致性,提示二者有某种协同促进胃癌的发生、发展及演变的作用.
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三叶因子3和环氧合酶-2在胃癌组织中的表达
目的:检测三叶因子3 (TFF3)和环氧合酶-2(COX-2)在正常胃黏膜组织、癌旁组织和胃癌组织中的表达水平,探讨TFF3表达与胃癌发生的关系.方法:选取正常胃黏膜组织40例,癌旁组织和胃癌组织各60例,采用SP免疫组化方法检测各组标本中TFF3和COX-2的表达.结果:TFF3和COX-2在胃癌组织、癌旁组织、正常胃黏膜组织中的表达呈逐渐降低趋势(P＜0.05),TFF3和COX-2在胃癌中的异常表达与TNM分期、淋巴结转移相关(P＜0.05),TFF3在胃癌中的异常表达与肿瘤分化程度相关(P＜0.05),Spearman相关分析显示两者的表达呈正相关(r=0.462,P＜0.01).结论:TFF3与COX-2的表达增加有可能参与胃癌的发生;两者在胃癌中表达上调有可能使细胞增殖与凋亡的失衡,从而导致胃癌的发生;TFF3与COX-2在胃癌中可能呈协同作用.
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三叶因子3研究进展
在生理状态下,三叶因子3(TFF3)表达于胃肠道黏膜组织及其他黏膜组织中的分泌细胞,其通过增加上皮细胞的迁移、减少上皮细胞的凋亡来促进损伤的修复和愈合.当机体发生消化系统炎症、肿瘤等病理性改变时,TFF3会伴随病理过程而发生异常表达和/或持续分泌.大量研究资料表明TFF3的异常表达与疾病发生发展及预后相关.因此,对于消化道相关疾病的实验诊断及预后判断,TFF3可能是一个潜在的临床标志物.但其具体的生理病理功能及作用机制目前还不是很明确,故其实际应用于临床还需要更加充分的、进一步的深入研究,以及更多前瞻性的临床研究资料来加以判断.
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TFF3和ERK通路在甲状腺乳头状癌中的表达和意义
目的 探讨三叶因子3(Trefoil Factor 3,TFF3)、细胞外调节蛋白激酶2(Extracellular Regulated Protein Kinases 2,ERK2)及其磷酸化状态(p-ERK1/2)在甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)中的表达水平和临床意义.方法 采用Western Blot和免疫组织化学法检测60例甲状腺乳头状癌组织,30例甲状腺腺瘤组织(adenoma,A),30例瘤旁正常甲状腺组织(normal group,N)TFF3、ERK2、p-ERK1/2蛋白的表达情况,分析三种指标在甲状腺乳头癌中的表达阳性率与其临床病理特征的关系.结果 Western Blot结果显示TFF3、ERK2、p-ERK1/2蛋白在甲状腺乳头状癌组织表达水平均高于正常组和腺瘤组(P＜0.05).免疫组化结果显示TFF3、ERK2、p-ERK1/2阳性蛋白呈棕黄色颗粒,TFF3主要表达于胞浆,ERK2为胞浆(膜)阳性,p-ERK1/2以胞核阳性为主,部分细胞胞浆阳性.TFF3、ERK2、p-ERK1/2在甲状腺乳头状癌中阳性表达率分别为85.0％、81.7％、78.3％,明显高于腺瘤组和正常组(p＜0.05),并与病理分期和淋巴结转移密切相关(P＜0.05),TFF3与ERK2、p-ERK1/2的表达呈正相关(r=0.415,r=0.467,P＜0.01).结论 TFF3可能通过ERK通路促进了甲状腺乳头状癌的发展及转移.
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MUC2和TFF3在结肠腺瘤和腺癌组织的表达及意义
目的 检测肠杯状细胞标志物黏蛋白2 (MUC2)和三叶因子3(TFF3)在人正常结肠、结肠腺瘤和腺癌组织的表达,并探讨其临床意义.方法 收集正常结肠组织标本10例、结肠腺瘤15例以及结肠腺癌50例,采用免疫组化染色SP法检测MUC2和TFF3的表达,并分析其与临床病理特征的关系.结果 正常结肠、结肠腺瘤及腺癌组织的MUC2表达阳性率分别为:100％ (10/10)、73.3％ (11/15)、38.0％ (19/50);TFF3表达阳性率分别为:100％ (10/10)、66.6％ (10/15)、44.0％(22/50),二者表达均逐渐降低,不同组织间比较均差异显著(P＜0.05).MUC2和TFF3的表达均与结肠癌患者的年龄、性别、癌发生部位及分化程度无关(P＞0.05),而与结肠癌的TNM分期、淋巴结及远处转移相关(P＜0.05).结论 在结肠“正常黏膜-腺瘤-腺癌”的演变过程中,MUC2和TFF3表达逐渐减少,向正常的肠杯状细胞分化减少,二者的联合检测可能有助于对结肠癌变的早期预测;且该表达减少与结肠癌的TNM分期、淋巴结及远处转移相关,二者可能作为判断结肠癌进展和转移的预测因子.
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TFF3、ERα、ERβ在子宫内膜癌中的表达及临床意义
目的 探讨子宫内膜癌组织中三叶因子3(TFF3)和雌激素受体(ERα、ERβ)的表达及临床意义.方法 应用免疫组织化学法检测14例正常子宫内膜,22例不典型增生及82例子宫内膜癌组织中TFF3、ERα及ERβ的表达情况,分析其与组织学分级、浸润程度、临床分期和淋巴结转移间的关系.结果 在正常子宫内膜、不典型增生内膜、子宫内膜癌中TFF3阳性率分别为28.6%、36.4%和65.9%,ERα阳性率分别为92.8%、86.4%和53.7%,ERβ阳性率分别为78.6%、72.7%和48.8%,其差异均有统计学意义(χ2值分别为7.202、13.702、7.127,均P<0.05).TFF3的表达与内膜癌的组织学分级、临床分期、淋巴结转移有关(χ2值分别为11.709、10.125、4.840,均P<0.05),与浸润程度无关;而ERα、ERβ则与组织分化及肌层浸润程度有关(均P<0.05),同临床分期及淋巴结转移无关.结论 检测TFF3、ERα和ERβ的表达,有助于为子宫内膜癌患者制定个体化治疗方案,而TFF3的检测更有可能成为诊断子宫内膜癌的又一指标,并且为判断子宫内膜癌患者的预后提供依据.
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三叶因子3在胃溃疡大鼠脾脏不同部位的表达
目的 研究三叶因子3(TFF3)在胃溃疡大鼠脾脏不同部位的表达.方法 胃前壁黏膜下注射冰乙酸制备大鼠胃溃疡模型,免疫组织化学法分别检测正常组(6只)和溃疡组(42只)雄性大鼠脾脏TFF3的表达.结果 ①溃疡组大鼠脾脏明显肿大、充血;与正常组相比白髓面积明显增大(P＜0.05或P＜0.01),至6d组大,边缘区增厚(P＜0.05或P＜0.01),至10d组厚;红髓面积减少.②TFF3阳性反应物呈棕黄色颗粒状分布于胞质中.③TFF3在正常组大鼠脾脏中呈弱阳性表达,在溃疡组表达明显增高(P＜0.05或P＜0.01).溃疡组白髓中阳性细胞TFF3平均吸光度值各组与正常组相比明显增高(P＜0.05),以10d组增高为明显;边缘区阳性细胞TFF3吸光度值1、2d和6d组与正常组相比明显增高(P＜0.05或P＜0.01),以6d组增高为明显;红髓阳性细胞TFF3吸光度值1、2、6d和14d组与正常组相比明显增高(P＜0.05或P＜0.01),以6d组增高为明显.④溃疡组边缘区TFF3表达与损伤时间呈负相关(P＜0.05).结论 TFF3在胃溃疡大鼠脾脏各部位呈高水平表达,可能通过提高脾脏免疫反应性促进胃溃疡的愈合.
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IL-6在人胆管上皮细胞损伤修复中的作用
目的 探讨IL-6在人胆管上皮细胞(BECs)损伤修复中的作用机制.方法 IL-6按浓度分为5组:0 ng/L组,10 ng/L组,50 ng/L组,100 ng/L组,1000 ng/L组,将不同浓度的IL-6分别干预体外培养的BECs,并检测IL-6对转录激活子3(STAT3)磷酸化和三叶因子3(TFF3)表达的影响；将BECs分为未处理组、STAT3-RNAi组(细胞中转入STAT3 RNAi腺病毒)和Control-RNAi组(细胞中转入空RNAi腺病毒),检测行干扰后,IL-6对TFF3表达的影响；分别用未处理组、STAT3-RNAi组、Control-RNAi组BECs制备体外损伤模型,观察IL-6、TFF3对各组细胞的影响.两组数据间比较采用Student's t检验,多组间比较采用单因素方差或Sidak检验.结果 添加IL-6的50 ng/L组、100 ng/L组、1000 ng/L组磷酸化STAT3( p-STAT3)的表达水平分别为0.240±0.052、0.714 ±0.124、0.327± 0.069,明显强于0 ng/L组的0.033±0.011(q=5.246,17.260,7.451,P＜0.05).TFF3 mRNA及其蛋白表达水平随着IL-6浓度的增高而显著增加(q=12.045,9.889,P ＜0.05)；IL-6浓度为1000 ng/L时,TFF3 mRNA及其蛋白表达有所回落.行干扰后,STAT3-RNAi组BECs TFF3蛋白表达水平为0.037±0.005,明显低于Control-RNAi组的0.267±0.038和未处理组的0.301 ±0.042(q=12.135,13.929,P＜0.05).体外损伤模型中,IL-6干预BECs 12 h后,STAT3-RNAi组BECs移行速度为(9.1±1.5)μm/h,慢于Control-RNAi组的(25.1±3.8)μm/h(q=7.737,P＜0.05)；而STAT3-RNAi组中加入外源性人重组TFF31 g/L后,BECs移行速度为(39.2±4.7)μm/h,比Control-RNAi组显著提高(q=14.507,P＜0.05).结论 IL-6主要通过激活STAT3,继发上调TFF3表达,从而促进人胆管上皮细胞移行和损伤修复.
关键词： 胆管上皮细胞 损伤修复 IL-6 信号转导子和转录激活子3 三叶因子3 -
三叶因子3在糖尿病肾病中的研究
糖尿病肾病是引发末期肾功能衰竭的重要因素之一,其属于一种慢性微血管并发症,且一旦出现临床症状将不可逆转.因此,对糖尿病患者进行肾脏功能的实时监测,对肾脏功能损伤以及肾脏功能受损程度进行及时准确的判断与发现,是给予及时预防和治疗是急切需要解决的问题.三叶因子3 ((trefoilfactor3,TFF3)是一种多功能肽,血清和尿液TFF3水平为观察糖尿病肾病肾功能损害的新指标,其中血清TFF3水平为糖尿病肾病肾功能损害的一个独立预测指标,具有重要的意义.基于此,本文通过对80例糖尿病肾病患者血清和尿液TFF3水平检测和分析,针对三叶因子3在糖尿病肾病中的价值展开探讨,现报道如下.
