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流式细胞技术在毒理学研究中的应用
流式细胞仪(FCM)是在上世纪70年代发展起来的一种测量细胞荧光染色强度,定量测定细胞和亚细胞成分(微粒)的细胞分析仪.它也是在单细胞分析和分选基础上发展起来的对细胞的物理或化学性质进行快速测量并可分选高纯度细胞亚群的一项新技术[1].近年来,随着细胞和分子生物学技术尤其是单克隆抗体技术的发展和分子探针的开发,流式细胞技术日见成熟,它以快速、灵活、灵敏和定量的特点,在国内外被广泛应用于医学基础研究和临床实践多方面.目前,流式细胞技术在毒理学多个分支研究领域已得到广泛应用,在研究外源化合物的细胞毒性和致癌分子机理方面显现出重要价值.笔者就目前FCM技术在免疫毒理、生殖和遗传毒理、发育毒理、环境以及神经毒理学方面的应用作一综述.
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肠道微生态研究技术在代谢综合征中的应用
哺乳动物肠道内定居着数量庞大且组分复杂的微生物群,它们共同构成了肠道微生物组.近年来,人们逐渐认识到肠道微生物与一些疾病的发生和发展密切相关,如代谢性疾病、炎症性肠病、肿瘤、免疫系统以及神经系统疾病等,使得肠道微生物成为研究的热点.迅猛发展的微生物研究技术为我们提供了高效有力的技术平台,推动了对肠道微生态的系统认知,也为疾病的诊断及治疗开辟了新思路.本文旨在总结与分析目前常用微生态研究技术的新进展及其局限性,为进一步的肠道微生物组研究提供参考,并简要介绍肠道微生态与代谢综合征的相关研究成果.
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流式细胞术测定CD3+细胞胞内IL-2表达的研究
几乎所有的细胞因子均可由各种不同类型细胞在体外由有丝分裂原、钙离子载体、佛波醇酯（PMA）等物质诱导产生，从而为各种因子调控机理的研究提供了方便。传统的生物测定技术、酶联免疫法等只能检测分泌在体液或细胞培养上清中的因子，也不能确切分析产生各类因子的细胞类型。而流式细胞术（Flow cytometry，FCM）以单细胞分析为基础，通过特异性染色技术，可快速及准确地多参数定性和定量细胞膜、浆、核内多种物质，从而精确判断各细胞亚群中因子的表达情况〔2〕。本研究用PMA和钙离子载体（ionomycin，IONO）共刺激人外周血单个核细胞，通过monensin阻断、三聚甲醛（paraformaldehyde）固定、皂角素（saponin）破膜等方法，借助抗CD3、抗IL-2单克隆抗体，用FCM同时检测CD3+细胞和胞内IL-2阳性的细胞，分析了不同PMA及IONO浓度条件下，IL-2阳性CD3+细胞的百分率，为细胞亚群中各种因子的测定和研究提供了实验依据。
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全基因组测序在病原微生物学中的应用及研究进展
全基因组测序技术的问世，为基因组研究带来了极大便利，目前已应用于解决许多微生物方面的问题。本文对微生物全基因组测序技术进行了简要概述，主要从病原微生物的发现和培养诊断、病原体特性的快速鉴定、疫情暴发监测及流行病学溯源、疫苗开发及变异监测、宏基因组学以及单细胞测序6个方面，总结归纳了新一代全基因组测序技术在病原学检测中的作用，并对该研究目前存在的问题进行了回顾总结。全基因组测序具有快速、准确及相对便宜的特点，但是就目前来说，将其应用到临床实验室进行常规病原学检测仍存在一些困难。（中华检验医学杂志，2016，39：319－321）
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从单细胞水平看肿瘤异质性
在过去的二十多年里,很少有疾病像乳腺癌一样获得如此多的研究进展,特别是近年来,单细胞研究技术不断进步,掀起了肿瘤异质性研究的热潮。2012年,Gerlinger等[1]的研究有力证实了肿瘤异质性的存在,随后,肿瘤异质性问题越来越多地被提及。对于临床医师而言,肿瘤异质性对临床工作和转化研究有哪些影响,本文将就此回顾新进展,分享个人观点。
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制糖企业空气细菌的拉曼光谱分析
目的 了解糖厂空气微生物的分布特点和多样性程度,探索新的空气微生物检测方法.方法 采集分离自糖厂甘蔗喂料口、甘蔗渣堆场等作业岗位的12个细菌菌株的单细胞拉曼光谱,并应用化学计量学进行分析.结果 糖厂车间空气富含各种细菌,从源自吡啶二羧酸钙的1017/cm峰或成对出现的源自类胡萝卜素的特征基团的1 155～1 160/cm和1 520～1 529/cm峰,可以快速判断空气细菌中含有产芽孢细菌和产类胡萝卜素细菌;主成分分析可以将不同菌株归类为不同的类群,即使在不同的培养条件下,依然可以得到相似的结果;单细胞分析显示,多数菌株的细胞信号较弱而且细胞间相对均一,但部分菌株的信号极强且胞内物质含量极不均匀,显示出极大的异质性.结论 单细胞拉曼光谱可以用于检测空气细菌,依据特征拉曼峰可以快速判别细菌类型,对于含有特殊光谱的细菌极易检出,但在缺少大型数据库和参照菌株下,难以直接鉴别菌株的分类地位或者是否属于病原菌.
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CEIA-LIF法在重型再生障碍性贫血患者干扰素-γ水平检测中的应用
目的:检测再生障碍性贫血(再障)患者单个CD8+T细胞内干扰素-γ(IFN-γ)的绝对含量.方法:用毛细管电泳免疫分析激光诱导荧光法对再障患者外周血单个CD8+T细胞内IFN-γ的水平进行定量检测.结果:2例重型再障(SAA)患者免疫治疗前外周血单个CD8+T细胞内IFN-γ的水平分别为(151.53±28.92)z mol和(223.72±45.23)z mol,免疫治疗后相应的降为(45.57±13.90)z mo1和(36.44±9.66)z mol,正常对照为(47.47±17.97)z mol.经统计分析,SAA患者治疗前、后及与正常对照比较差异均有统计学意义.结论:毛细管电泳免疫分析激光诱导荧光法可以检测到外周血单个CD8+T细胞内IFN-γ的z mol水平,有望成为一种新的检测方法应用于临床.
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单细胞测序技术在血液系统恶性疾病克隆演变方面的研究进展
由于血液系统恶性疾病具有高度异质性,传统批量测序技术难以识别异质性细胞群体,可能丢失在疾病克隆演变中起重要作用的信息.单细胞测序技术的迅速发展,使其可在单个细胞水平进行全基因组、转录组及表观遗传组学分析,有利于揭示肿瘤异质性,追踪细胞谱系,理解肿瘤克隆演变的复杂机制,从而为肿瘤的早期识别、治疗指导、预后评估与复发监测成为可能.笔者拟就单细胞测序技术的原理、检测流程、存在的挑战及未来发展方向进行综述,并且探讨其在血液系统恶性疾病克隆演变方面的研究进展及应用价值.
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单细胞测序在血液系统疾病中的应用进展
近年来,单细胞测序技术在医学领域中的应用呈现井喷式增长.2017年第59届美国血液学会(ASH)年会报道了多项与血液系统疾病相关的单细胞测序研究结果,包括造血干细胞(HSC)、急性白血病(AL)、成熟淋巴瘤和骨髓纤维化(MF)等的基础与临床研究,主要涉及基因组学、甲基化组学和转录组学等研究领域.文章结合ASH年会报道对单细胞测序在血液系统疾病中的应用进展进行概述.
