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埃博拉病毒病主要研究进展及援非实验室检测
埃博拉病毒病是由埃博拉病毒感染引起的急性、出血性人兽共患传染病,是人类目前已知为危险的传染病之一.该病病死率高可达90％,由于其对人类危害极大,《国际禁止生物武器公约》已将埃博拉病毒列为潜在的致死性生物战剂.2014年暴发的埃博拉疫情至今仍未平息,被定性为“埃博拉病毒史致命性暴发”.WHO发出警告,同时呼吁全球各国积极投身到疫情的应对中[1].为加深对该病的科学认识,提高科学防控水平,现就埃博拉病毒病的流行病学、临床表现和诊断等方面的近期研究进展和我国应急检测队赴塞拉利昂进行国际救援活动情况进行介绍.
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实时荧光定量PCR模板DNA快速制备的方法建立与应用
实时荧光定量PCR技术于1996年美国AppiedBiosystems公司推出,由于该技术不仅实现PCR从定性到定的飞跃,而且与常规PCR相比,具有特异性更强、敏感度更高、操作简便快速、可以有效解决常规PCR污染问题等优点[1-2],已广泛应用于突发公共卫生事件应急处置中病原体的检测.提高实时荧光定量PCR的检测速度,服务于突发公共卫生事件应急检测是当前备受关注的技术问题.实时荧光定量PCR由模板制备和PCR两部分组成,缩短模板制备时间就可提高实时荧光定量PCR的检测速度.我们研制了一种模板制备方法,使制备时间从原来的30 min以上缩短至5 min以内,制备效果与经典的煮沸裂解法和先进的柱式核酸提取试剂盒相同,用于实时荧光定量PCR可在15～30 min内完成病原体DNA检测.
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一起炭疽疫情中炭疽病原检测方法的应用与评价
目的 分析总结一起炭疽疫情中应急检测的经验与问题,为炭疽疾病预防控制提供参考依据.方法 采集报告的疑似皮肤炭疽患者皮损渗出液和静脉血标本,与病例相关的病死动物和土壤标本,渗出液采集采用载玻片直接蘸取和无菌棉签擦取2种方法,用涂片镜检、直接分离培养和肉汤增菌后分离培养细菌以及炭疽芽胞杆菌毒力基因PCR扩增方法检测病原,分析检测结果.结果 共采集标本57份,病例标本占91.23％,病死牛肉及剖牛处土壤标本占8.77％.病例标本采集时间距发病时间短1d,长23 d,平均6.62 d.29例疑似皮肤炭疽患者在采样时其中16例(占55.17％)已使用抗生素类药物治疗,4例(占13.79％)未曾使用抗生素.从2例未使用抗生素的患者皮损渗出液和1份病死牛肉中分离到炭疽芽胞杆菌,分离阳性率为5.26％；其中1例患者皮损渗出液涂片镜检阳性；全部标本PCR扩增结果均为阴性.结论 标本炭疽芽胞杆菌阳性检出率较低,与采样方法和采样时机关系较大,应加强部门间的沟通协作和人群的健康教育,做到疫情早报告、早确诊、早控制.
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GC/MS法检测中毒毒物中保留时间锁定的应用
保留时间锁定(RTL)是一种能够进行多残留检测并自动处理筛查目标化合物的应用软件,适用于突发事件中毒物的快速应急检测与筛查处理.文中简要介绍了该软件的内容及其在毒物分析中的应用方法,推荐各有关实验室应用.
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理化实验应急检测中的质量控制
开展分析质量控制是科学管理实验室的一种有效方法,是获得正确数据的重要手段[1].理化实验室经常面临食物中毒,饮用水污染和职业中毒等疫情检测.这类任务有着时间紧、强度大,责任重等特点,尽早出具准确的检测报告关系到病人的正确诊断、及时治疗以及疫情的控制.如果疫情检测的质量控制工作做得不好,会对社会造成较大的负面影响,直接关系到检测单位的形象和声誉.我们结合历年来参加的疫情检测的经验,提出几点质控措施,供同行参考.
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实时荧光定量PCR技术在食源性致病菌快速检测中的应用
目前我国对食源性致病菌的标准检测方法一直沿用传统的细菌培养法，由于其检测过程繁琐复杂，所用试剂繁多，检测周期较长［1］，已难以满足当前卫生应急检测快速诊断的需求［2］。因此，国内外学者都致力于建立以分子生物学为基础的快速检测方法。自美国Applied Biosystems 公司于1996年首先推出一种特异、敏感、操作简便的分子检测技术，即实时荧光定量PCR技术以来，国内外已利用此技术相继开发出一系列快速检测食源性致病微生物的试剂盒，具有快速简单的技术优势，在部分病原微生物快速检测方面已发挥出了重要的作用［3］。
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人感染2型猪链球菌快速多重PCR检测方法的建立
目的:用多重PCR从临床标本中同时检测猪链2型特异性及5个毒力相关基因,建立SS2实验室快速诊断及应急检测的核酸鉴定方法.方法:根据已报告的引物序列设计并合成8对引物(含1对内对照引物),经过PCR反应条件的优化与组合,采用同一PCR反应条件与循环程序,直接从临床标本或培养物中同时一次性扩增属特异性(tuf)、种特异性(16S rRNA)、荚膜多糖(cps2J)、溶菌酶释放蛋白(mrp)、细胞外蛋白因子(ef)、溶血素(sly)和甘油醛-3-磷酸脱氢酶(gapdh)等基因;并对方法的特异性和敏感性进行评估.结果:运用所建立的方法可直接从临床疑似猪链感染患者的脑脊液、血液、双相培养液和血培养物中一次性扩增出上述8对引物的目的基因,并经基因序列分析、细菌分离培养和生化鉴定进一步证实.其敏感性为78cfu(克隆形成单位).结论:所建立的方法具有敏感、特异、快速、简便的特点,可应用于SS2感染应急检测、流行病学监测和实验室快速诊断.
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突发事件中硼砂的应急检测
2012年6月10日晚,苏州市疾病预防控制中心接到苏州市卫生监督所电话,称苏州工业园区某酒店有厨师有人为非法添加硼砂的可能[1],并采集多个样本送达实验室,需进行快速检测,出具结果.接到报告后中心领导高度重视,立即组织食品卫生科和检验科相关人员进行调查及检测.
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便携式红外固液分析仪在毒物应急识别检测中的应用方法探讨
目前一些对突发事件应急响应的监测部门或实验室装备了便携式红外固液分析仪,例如美国SensIR公司的TravelIR系列、Smiths detection公司的ChemID系列及Thermo Electron公司的Nicolet系列仪器等,该类型仪器可应用于现场快速检测鉴别未知的固体、液体、粉末状、粘稠状样品,其技术原理为傅立叶变换红外光谱技术与金刚石取样界面衰减全反射感应技术相结合[1],技术特点为只需数秒就可快速扫描出未知物质的红外光谱并与仪器软件内置的上万种物质标准谱图的谱库作自动检索比对匹配分析[2].
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基层疾病预防控制中心应急检验能力储备的探讨
突发公共卫生事件,因涉及范围广,危害性大,在社会上日益被重视.疾病预防控制中心在介入突发公共卫生事件的调查处理中,担负着主要的职责.突发公共卫生事件发生后,如何快速准确地查明事件发生的原因,查清事件主要的危害因子,对有效的启动应急预案,防止事件进一步地扩大有着重要的作用.本文针对基层疾病预防控制中心的一些具体情况,对怎样做好应急检测技术的储备,提高检测能力,作一些探讨.
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水中诺如病毒浓缩与应急检测研究
目的 探索适合于基层实验室开展的水中诺如病毒浓缩与应急检测的方法,评估钙离子法对水体中诺如病毒的富集效果及检测灵敏度,为水源性诺如病毒突发疫情的病原检测提供可靠的检测数据.方法 将不同浓度的指示病毒(GⅡ型诺如病毒)加入到不同水样中,用钙离子法进行富集,用荧光定量PCR检测,根据富集前后的病毒浓度,评估方法的回收率;根据不同梯度的检测值,评估方法的灵敏度.同时制备不同的模拟水样进行荧光定量PCR检测.结果 钙离子法的平均回收率为81.6％,检测灵敏度为模拟样本中病毒浓度为10 copy/μl.而10份不同模拟水样荧光定量PCR检测阳性9份.结论 钙离子法浓缩水样中的诺如病毒,回收率与灵敏度均较高,操作简单;同时,荧光定量PCR检测方法具有快速、灵敏的优点,适用于基层实验室开展水体中诺如病毒的应急检测.
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突发性化学危害事件现场应急检测技术与仪器设备
从广义上讲,化学物质由于某种原因造成人员中毒、伤亡或财产损失的灾祸和损失,都可以称为化学危害.突发性化学危害事件的类型主要有:1)工作场所急性职业中毒事件;2)突发性环境污染事故引起的中毒事件;3)投毒事件;4)化学恐怖事件;5)生活性中毒事件.随着生产节奏的加快和生产活动的日益频繁,及由于个别不安定的社会因素,突发性化学危害事件发生的可能性大大增加,从民众公共卫生安全角度考虑,对于发生大量有毒有害气体或高挥发性有毒有害化学品突然外泄、扩散,造成较大面积污染,危及人群的突发事件,以及突发性有毒有害化学品污染饮用水水源的水污染灾害,特别要做好应急准备,我国国务院颁布实施<突发公共卫生事件应急条例>,把重大食物中毒和职业中毒列入突发公共卫生事件,要求建立完善突发公共卫生事件应急机制,强化预防与卫生应急准备,提高卫生应急处置能力.
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中毒事件中四种鼠药的快速检测
目的 建立对四种鼠药的实验室应急检测方法,以应对突发公共卫生毒物中毒事件.方法 采用气质联用法(GC/MS)测定毒鼠强、氟乙酰氨和高效液相色谱法(HOLC)测定敌鼠钠、溴敌隆,以鼠药标准和鼠药样品为对象,优化GC/MS和HPLC色谱、质谱条件,从而建立各鼠药的色谱图库和质谱图库.结果 GC/MS定性检测毒鼠强的特征离子和丰度比分别为212/240和2∶1,氟乙酰胺的分别为44/77和1.5∶1;敌鼠钠、溴敌隆以高效液相色谱双波长(285nm和260nm)检测,固体样品低检测浓度为0.80 mg/kg,液体样品低检测浓度为0.16 mg/L.结论 研究方法对中毒事件中四种鼠药检测快速、结果可靠,适用于鼠药中毒实验室应急检测.
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GC/MS法检测中毒毒物中保留时间锁定的应用
保留时间锁定(RTL)是一种能够进行多残留检测并自动处理筛查目标化合物的应用软件,适用于突发事件中毒物的快速应急检测与筛查处理.文中简要介绍了该软件的内容及其在毒物分析中的应用方法,推荐各有关实验室应用.
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采供血机构实验室突发事件应急检测风险管理初探
目的 通过使用风险管理措施对突发事件应急检测进行管理,建立应急检测质量管理体系,探讨风险管理在实验室管理中的应用.方法 制定实验室风险矩阵,根据2014年1月1日-2016年6月30日常规检测和应急检测对比分析结果,识别和分析应急检测过程中的风险情况,提出处理措施降低检测风险.结果 应急检测日检测量大,HBsAg、ALT和抗-TP检测结果与常规检测有差别,人员、设备、物料、标本接收与处理和检验报告发布5个风险点风险增加或风险不可接受,需制定应对措施.结论 突发事件发生后,必须建立针对应急检测的质量管理体系;风险管理应用在血站实验室管理中,促进了质量体系的持续改进,通过风险识别、分析和应对,根据风险变化,建立应急检测质量管理体系,确保检验质量.
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细菌性食物中毒的实验室应急检测分析
目的 优化细菌性食物中毒实验室应急检测工作方法及流程.方法 对采样、实验室检测及质量控制、结果报告等环节进行讨论分析.结果 采样的及时性和针对性是影响检测结果及时准确的关键因素;细菌的快速检测技术可以做为辅助手段为检测指明方向;传统的培养法是细菌性食物中毒应急检测的确认方法.结论 加强实验室人员能力培养,重视规范操作及培养基的质量控制,规范检测与辅助检测手段相结合,是提高细菌性食物中毒应急检测工作及时性和准确性的关键.
