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小盾纤恙螨自然双重感染汉坦病毒和恙虫病东方体及叮刺传播的研究
目的 了解汉坦病毒(HV)和恙虫病东方体(OT)可否在小盾纤恙螨体内双重自然感染及通过叮刺传播的状况.方法 在肾综合征出血热(HFRS)和恙虫病混合流行区,将采集的3459只鼠体恙螨和用小黑板诱集的3265只游离恙螨,按1、5、10只螨数分组,每组叮刺6只小白鼠.15 d后取小白鼠肺和脾脏制成悬液,经脑内途径接种小白鼠传6代,每代均采用间接免疫荧光法(IFAT)和Giemsa法检测HV和OT病原体;取不同恙螨数的螨制成无菌悬液接种Vero-E6细胞传代,分离检测HV和OT病原体.采用PCR法检测HV-RNA和OT-DNA.结果 经传代后HV和OT双重感染鼠的检测情况为,HV单纯阳性鼠体螨5、10只组在第6代各检测到1只,OT单纯阳性鼠体螨10只组在第6代检测到1只,HV、OT双重阳性鼠体螨1只组在第5、6代均检测到1只,HV、OT双重阳性鼠体螨5、10只组在第6代各检测到1只.1、5、10只游离螨组叮刺小白鼠后,在第6代各检测到1只.Veto-E6细胞在第4代时,HV、OT双重阳性的鼠体螨5、10只螨组.各有1份检测到HV和OT双重阳性的感染细胞.传至第6代时,HV、OT双重阳性的鼠体螨1只螨组和游离螨1、5、10只螨组均检测到HV和OT双重阳性的感染细胞.经PCR检测到HV-RNA、OT-DNA.结论 小盾纤恙螨体内可自然双重感染HV和OT病原体,并可经叮刺传播.
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小风鼓草的性状及显微鉴别
小风鼓草为野牡丹科植物东方肉穗草Sarcopyramis bodinieri Levi.et Van.var.delicata (C.B.Robins.)C.Chen.,又名肉穗草、风鼓斗草(福建闽南)、肉穗野牡丹(台湾)的干燥全草.产于福建、台湾[1-2],常成群分布林下阴湿处,土壤肥沃、腐殖质层较厚的沟边、阴坡.小风鼓草是福建闽南珍贵中草药,具有清热解毒、清肝泻火之功效,用于急性肝炎、肺热咳嗽、蛇头疔、无名肿毒、胃肠炎等.东方肉穗草林下栽培技术试验,取得了良好的效果[3],采用植物组织培养技术繁育种苗,供生产使用[4].有关生药学研究目前尚未见报道.本试验对小风鼓草的药材性状及根、茎、叶的组织构造和全草粉末显微特征进行鉴别研究,为准确用药和进一步开发利用提供依据.
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地黄叶片器官形态建成中几种内源激素的变化
地黄Rehmannia glutinosa Libosch.为玄参科草本植物,是我国著名的"四大怀药"之一[1].目前,地黄的组织培养多以叶片、块根和花粉等为外植体,经脱分化诱导生成愈伤组织,再分化成再生植株,但都存在植株再生率低、分化周期长、重复性差的问题[2],而且这一途径往往表现出遗传上的不稳定性[3],因此使得地黄组织培养技术在生产和育种上的应用受到限制.
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复方降压片和西拉普利对人脐静脉内皮细胞功能的影响
血管内皮功能已经越来越受到人们的重视，研究表明高血压时血管内皮功能受到损害。本文旨在通过细胞培养的方法研究和比较目前临床常用的两种抗高血压药物复方降压片和西拉普利对血管内皮细胞功能的影响。1 材料和方法1.1 材料1.1.1 脐带取自协和医院产科病房。1.1.2 M-199、胎牛血清、胰酶、L-谷氨酰胺为GIBCO公司产品；ECGF、Hepes为Boehringer Mannheim公司产品；I型胶原酶为Sigma公司产品。氢氯噻嗪纯品由常州制药厂提供，西拉普利由罗氏药厂惠赠。TNF由邦定公司提供，AngⅡ为Sigma公司产品。1.2 方法1.2.1 内皮细胞培养：按鄂征的“组织培养技术”中的方法［1］进行脐静脉血管内皮细胞原代培养。24～36h换液，4～6d细胞铺满瓶底，用胰酶消化传代，1～3代细胞用于实验。1.2.2 将细胞传入96孔板中，待细胞贴壁生长后，用M-199洗两次，加入含有刺激剂及药物的培养基。TNF用量为500u/mL。西拉普利(C)，利血平(R)，氢氯噻嗪(H)的浓度均为1×10-6。分组：空白组：TNF组；TNF+C；TNF+R；TNF+H；TNF+R+H。作用24h后吸取上清测定NO2-/NO3-、内皮素-1含量，样本数n=8。1.2.3 一氧化氮测定：Griess法。采用解放军总医院提供的一氧化氮检测药盒。1.2.4 内皮素-1测定：放免法。采用解放军总医院提供的内皮素-1检测药盒。1.2.5 结果用均值±标准差(x—±s)表示，采用t检验比较结果的显著性。
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改良组织块法培养C57BL/6小鼠胰腺星状细胞
目的 通过改良传统组织块法培养C57BL/6小鼠胰腺星状细胞(PSCs),建立一种简便易行、快速获得大量小鼠PSCs的培养方法.方法 分离C57BL/6小鼠胰腺组织,经胎牛血清清洗后剪切成0.5 ～1 mm3组织块,经贴壁培养4d取原代PSCs,并传代.采用油红O染色观察细胞内脂滴变化,采用细胞免疫法及蛋白质印迹法检测细胞α-SMA、Desmin表达.结果 贴壁4d的原代PSCs多呈椭圆形或星形,胞质内大量脂滴,表达α-SMA及Desmin蛋白的细胞少;传代后细胞变大、伪足丰富,脂滴减少或消失,原代、传代PSCs的α-SMA蛋白相对表达量分别为0.653±0.071、2.290±0.055,传代细胞的表达显著高于原代细胞(P＜0.05),表达Desmin蛋白的细胞数量显著增加.结论 改良组织块法可高产和高纯度地获得小鼠静息态和激活态两种状态的PSCs,可以满足体外研究的需要.
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SD 大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞组织贴块法培养及鉴定
目的：建立SD大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells ，VSMC）组织贴块培养法并进行鉴定。方法无菌条件下取大鼠胸主动脉，4～6 h后加入含20％胎牛血清的DM EM培养液，原代培养2周并用免疫荧光染色对培养的VSMC进行鉴定。结果组织贴块法成功培养了大鼠胸主动脉VSMC ，5～7 d细胞迁出，10～14 d细胞融合至80％进行传代。体外培养的VSMC可传至20代，培养的细胞呈典型的“峰谷”样生长，免疫荧光染色鉴定细胞纯度达95％。结论组织贴块法培养大鼠胸主动脉VSMC培养体系稳定，操作简单、方便，纯度较高，免疫荧光是鉴定VSMC的较佳方法。
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组织工程技术:适时从临床回归实验室
组织工程技术正逐渐从实验室向临床应用转化,作为该技术的临床试验中心之一,笔者遇到了一些限制该技术应用和推广的问题.本文将目前面临的临床问题及相应有望的解决措施,依据组织工程三要素(种子细胞、支架材料及培养环境)的分类原则进行了总结.为解决这些问题,研究者们还是需要回归实验室,从初的体外培养阶段开始寻找思路.
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一种组合式组织工程动态培养仪
随着组织工程技术应用的多样化,为不同的目标组织提供不同的培养条件,改进工程组织的化学和生物力学性能,或通过不同的培养条件诱导干细胞向不同方向分化,这些得到了学者们越来越多的关注.结合中国现有的实验室条件,中国医学科学院,北京协和医学院 整形外科医院自主研发了一种组合式组织工程动态培养仪,以为不同的目标工程组织提供不同的动态培养环境.
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一种可提供循环可控的动态力学刺激的组织工程动态培养仪
为工程组织提供力学刺激,以提高培养效果的组织工程动态培养越来越受到关注.研究表明,周期性变化的力学刺激相比持续恒定的力学刺激更能模拟人体生理环境,因而更有利于工程组织的生长和分化.但现有的组织工程动态培养仪或生物反应器多采用恒定的力学刺激为工程组织提供培养环境.为了利用周期性变化的力学刺激改善培养效果,笔者研发了此组织工程动态培养仪.该培养仪通过单片机控制系统实现其核心功能,提供可以调节的周期性的力学刺激.
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组织培养技术发展百年回顾及展望
组织培养是生物学中为重要的实验技术,在医学研究中应用极为广泛,促进着众多前沿科学如分子生物学、基因工程、蛋白质工程等的发展,尤其对癌变机理的探索起着十分突出的作用.
关键词： 组织培养技术 -
人泪腺腺样囊性癌细胞的原代培养及其形态学特征
目的 探讨人泪腺腺样囊性癌细胞的原代培养方法.方法 实验研究.取2011年5月16日至6月1日在天津医科大学眼科医院接受手术治疗的1位泪腺腺样囊性癌患者的术中标本,采用组织块培养法获得原代细胞.运用连续传代、机械刮除、反复贴壁和消化排除等方法去除杂细胞.通过相差显微镜、扫描电镜、透射电镜等观察细胞形态.免疫细胞化学法检测细胞波形蛋白(vimentin)、结蛋白(desmin)、S-100蛋白、细胞角蛋白(cytokeratin,pan)、CD34等蛋白的表达情况.免疫组织化学法检测肿瘤组织vimentin、desmin、S-100蛋白、cytokeratin(pan)等蛋白的表达情况.消化法绘制细胞生长曲线,计算细胞倍增时间.结果 组织块原代培养第5天见周围开始有细胞爬出,此后细胞缓慢增殖,至第32天进行首次传代,第69天发现典型的上皮样细胞克隆.运用多种方法去除杂细胞后,至第8代细胞基本纯化.纯化后细胞现已稳定传至100代以上.相差显微镜下观察第25代细胞呈典型的上皮样细胞形态,可出现接触抑制消失.扫描电镜和透射电镜下第25代细胞呈现低分化恶性肿瘤细胞的典型特点,细胞间信号沟通丰富.细胞免疫化学法检测第25代癌细胞vimentin、cytokeratin (pan)和S-100蛋白呈阳性,desmin、CD34蛋白呈阴性,与源肿瘤组织染色结果一致.细胞生长曲线类似“S”形,细胞倍增时间37.1 h.结论 采用组织块培养法可以获得基本纯化的人泪腺腺样囊性癌细胞,有可能通过此法获得稳定的人泪腺腺样囊性癌细胞系.
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病毒性脑膜炎
1 引言病毒性脑膜炎是由各种病毒感染软脑膜(软膜和蛛网膜)后引起弥漫性炎症的一组临床综合征.临床主要表现发热、头痛和脑膜刺激征.病毒性脑膜炎是临床常见的无菌性脑膜炎,后者则常指脑脊液中未找到常见病原菌的一组脑膜炎综合征.随着组织培养技术的发展和多聚酶链反应技术的应用,使病毒性脑膜炎的诊断阳性率明显提高.
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糖尿病足感染患者拭子和组织细菌培养的临床意义
糖尿病足感染(DFI)是糖尿病(DM)患者常见住院和截肢的原因[1].因此确定感染致病茵并合理选用抗生素在DFI治疗中至关重要.目前从足部伤口获取病原菌标本的方法包括:拭子,刮除术,组织活检,细针抽吸活检2-3.有研究认为组织活检是确定DFI病原体的金指标4.
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结肠镜活检组织培养确诊肠结核病例分析
目的：探讨肠结核的临床特点及诊治要点，以提高诊断水平。方法对误诊为Crohn病的肠结核1例的临床资料进行回顾性分析。结果本例因反复腹泻半年，再发伴发热、咳嗽10 d入院。在当地医院行肠镜检查诊断为Crohn病，予柳氮磺吡啶及泼尼松等治疗后好转，后症状又复发，入驻地医院后行肠镜活检示黏膜慢性炎症，抗酸染色未找到结核杆菌，进一步行组织细菌培养分离出结核分支杆菌，复查X线胸片及肺部CT均提示右肺内侧段炎症性改变；钡剂灌肠造影检查示右半结肠下段管腔狭窄，黏膜紊乱，符合结核病表现，诊断为肠结核。予抗结核治疗，症状逐渐好转。结论肠结核与Crohn病的鉴别尤为困难，临床应加强认识，接诊症状不典型的回盲部病变者，及时行内镜下活检及肠组织细菌培养可尽早明确诊断。
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培养去原胸腺细胞胸腺小叶理想条件的探讨
目的 探讨培养去原胸腺细胞的胸腺组织的理想方法.方法 取6个月龄利凡诺引产儿胸腺,分离胸腺小叶,采用气液交界面培养法,培养于含1.35 mmol/L 2'-脱氧鸟苷的培养基,以不含2'-脱氧鸟苷的培养基培养的胸腺小叶作为对照,分别于0 d,3 d,5 d,7 d,9 d,10 d,14 d,21 d,28 d取培养的胸腺小叶经HE染色观察结果.结果 用含2'-脱氧鸟苷的培养基培养5 d后,小叶中胸腺细胞大部分被清除,而对照组在培养的前14 d小叶中胸腺细胞数量均无明显减少.在培养21d后实验组和对照组胸腺小叶中胸腺细胞都明显减少,但胸腺间质也出现不同程度坏死,而且随着培养时间的延长,坏死程度亦加重.结论 使用含2'-脱氧鸟苷的培养基培养5 d,是制备去原胸腺细胞胸腺小叶的理想条件.
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浅谈在研究生中开设《细胞组织培养技术》课程的重要性
组织培养技术课程作为一门实验科学在研究生中开设对于培养学生动手能力、科学思维能力及科研能力极为重要,可以为他们将来实际工作及研究打下一个良好的基础.
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快速血清学检验和微生物快速培养在小儿肺炎支原体感染中的诊断应用
目的 分析快速血清学检验与微生物快速培养检测对小儿肺炎支原体感染的诊断价值.方法 选取2015年3月至2017年5月我院收治的92例肺炎支原体感染小儿患者为研究对象,分为对照组46例和研究组46例.给予对照组患儿采取快速血清学检验,研究组采取微生物快速培养进行检验,将2组的阳性检出率进行对比.结果 研究组支原体感染阳性检出率(87％)显著高于对照组(67％),2组差异具有统计学意义(P<0.05).和1～3岁、9～12岁的阳性检出率(59％,60％)相比,4～8岁患儿的阳性检出率(84％)明显较高,差异有统计学意义(P<0.05).结论 微生物培养检验和快速血清学检验均有利于早期诊断小儿肺炎支原体感染,微生物快速培养检验法对小儿肺炎支原体感染的阳性检出率明显高于快速血清检验,4～8岁患儿的阳性检出率较高.
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甲型肝炎病毒感染性与抗原性的抗力比较
在甲型肝炎(HAV)灭活研究中,常以抗原性作破坏指标.由于HAV组织培养及消毒技术要求较高,试验过程复杂且不易掌握,难以广泛开展,使HAV消毒研究受到局限.本研究通过应用组织培养技术增殖HAV,并对HAV感染性及抗原性的抗力进行比较.现将结果报告如下.
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四甲基偶氮唑盐法观察三水白虎汤血清对体外培养关节炎滑膜细胞增殖的影响
目的:采用四甲基偶氮唑盐比色法观察三水白虎汤含药血清对体外培养热痹证型关节炎滑膜细胞增殖的影响.方法:实验于2006-06/09在南方医科大学动物实验中心、中医药学院实验中心及组织工程研究中心完成.实验材料:滑膜组织取自南方医院脊柱外科收治的膝骨关节炎患者(女,68岁)行膝关节镜手术中切除的滑膜组织,患者知情同意.SPF级45 d龄Wistar雌性大鼠15只,体质量(120±10)g.三水白虎汤中草药制剂(由南方医院中药房提供,主要成分水牛角、寒水石、白芥子、虎杖、鸡血藤等),来氟米特片(由美国欣凯公司提供).实验分组:大鼠随机分为三水自虎汤组、来氟米特组以及生理盐水组,分别给予相应药液灌胃7 d,制取含药血清.细胞培养实验共分4组,包括正常对照组以及三水白虎汤组、来氟米特组、生理盐水组3组含药血清组.实验干预:滑膜采自膝骨关节滑膜炎滑膜组织,采用体外细胞组织块培养技术,含药血清法接种培养.将第4代的滑膜细胞浓度为5×106L-1接种于板孔,在3组含药血清终浓度分别为10%,20%,30%,40%,50%下培养,正常对照组为完全培养液组.实验评估:①用四甲基偶氮唑盐检测法观察滑膜细胞的增殖.②锥虫蓝染色计数活细胞数,并进行B型细胞鉴定.结果:①滑膜细胞活性鉴定、计数及B型细胞鉴定:滑膜组织块培养后锥虫蓝拒染细胞计数为2×107,测得活性率达97%.免疫组织化学示Vimentin阳性,为B型滑膜细胞特征染色.②各组含药血清对滑膜细胞增殖的影响:生理盐水组和正常对照组的活细胞均明显增加;与生理盐水组和正常对照组比较,三水白虎汤组及来氟米特组的细胞增殖显著受抑致,活细胞数剧减(P＜0.001).在培养前5 d,同一含药血清浓度下,三水白虎汤组随着培养天数增加,对细胞增殖的抑制作用增强,5 d后抑制作用不再明显增加.同条件下比较活细胞数,三水白虎汤组和来氟米特组之间差异不明显(P＞0.05),生理盐水组和正常对照组的活细胞数之间差异不明显(P＞0.05).结论:三水白虎汤含药血清对体外培养关节炎滑膜细胞增殖有显著抑制作用,抑制滑膜增生的途径可能为三水白虎汤治疗类风湿关节炎(热痹证型)的作用机制之一.
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保存人鼻中隔软骨活性的3种体外方法比较
背景:软骨损伤后难以自身修复,以活性软骨进行修复效果较好,但活性软骨的可靠来源尚未根本解决.目的:以3种不同方法体外保存成人鼻中隔软骨块的活性比较.设计、时间及地点:单一样本观察,实验于2007-06/2008-03在解放军第四军医大学唐都医院耳鼻喉科实验室及西京医院全军耳鼻咽喉-头颈外科中心实验室完成.材料:材料为临床常规手术中切除的成人正常鼻中隔软骨20块,按国务院2006年<医疗机构管理条例>规定,已与患者签订知情同意书.方法:将所取软骨,块剪成大小约15 mm×10 min×2mm软骨块,分别置于4,-20,80℃冷冻及RPMI-1640液于37℃培养保存,于保存24h,7,14,21 d和30d时取样品.主要观察指标:以苏木精-伊红、AB/PAS及Masson三色染色和锥虫蓝排斥试验检测软骨活性.结果:用RPMI-1640培养液保存的成人鼻中隔软骨,在整个保存期中均能保持较好活性,软骨细胞活件率保持在80%左右.以-80℃冷冻保存7d及-20℃保存14d时,软骨基本失去活性.当4℃保存在21d时,软骨可保持较好活性,保存30d时,软骨活性明显降低.结论:与低温保存方法相比,用组织培养法保存成人软骨块能较好地保持其活性,有望为临床治疗提供一种取材方便、新型有效的软骨修复材料.
