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贝母素甲对多药耐药人白血病细胞活力和凋亡的影响及机制
目的 观察贝母素甲对多药耐药白血病人细胞K562/A02活力与细胞凋亡的影响,探讨活性氧(ROS)在此过程中的作用.方法 将K562/A02细胞成3组,药物组分别加入终浓度为100、200、400 μmol/L的贝母素甲;NAC预处理组采用5 mmlo/L ROS清除剂N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)预处理后,再加入终浓度为400 μmol/L的贝母素甲;对照组加等体积的药物溶解介质RPMI1640培养基.采用MTT法检测各组细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡情况,紫外分光光度法检测细胞内ROS、GSH水平.结果 与对照组比较,药物组细胞活力均降低(P<0.05或<0.01)、细胞内ROS水平增高(P均<0.01)、GSH水平下降(P均<0.01)、细胞凋亡率上升(P均<0.05),NAC预处理组的细胞活力、细胞凋亡率和ROS水平无明显变化(P均>0.05).结论 贝母素甲可抑制多药耐药人白血病细胞K562/A02的细胞活力、诱导其凋亡;其机制是通过诱导细胞ROS爆发,引起GSH水平下降,从而逆转多药耐药的发生.
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雷公藤红素提高人白血病细胞化疗敏感性的实验研究
目的 探讨雷公藤红素提高人白血病多药耐药细胞株(K562/A02)化疗敏感性的作用及其机制.方法 白血病细胞株K562和多药耐药细胞株K562/A02,培养至对数生长期分成6组,分别为K562/A02阴性组、K562/A02+62.5 μmol/L雷公藤红素组、K562/A02+ 125 μmol/L雷公藤红素组以及K562阴性组、K562+62.5 μmol/L雷公藤红素组、K562+125 μmol/L雷公藤红素组;设置K562+硼替佐米4 nmol/L为阳性对照组.采用Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率;采用反转录PCR法检测各组细胞中核转录因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)、survivin、死亡受体5(death receptor 5,DR5) mRNA表达水平;应用流式细胞术检测DR5蛋白阳性表达率.结果 K562阴性组与K562+62.5 μmol/L雷公藤红素组细胞凋亡率[(5.110±0.803)％、(6.283±0.889)％]以及K562/A02阴性组与K562/A02+62.5 μmol/L雷公藤红素组细胞凋亡率[(7.203±0.275)％、(8.753±0.951)％]比较差异均无统计学意义(P＞0.05);K562/A02阴性组NF-fcB mRNA(0.863±0.073)、survivin mRNA(0.989±0.018)、DR5 mRNA(0.114±0.037)表达水平高于K562阴性组(0.262±0.074、0.267±0.056、0.050±0.011) (P＜0.05);K562+62.5 μmol/L雷公藤红素组、K562+125 μmol/L雷公藤红素组NF-κB mRNA(0.210±0.053、0.128±0.076)、survivin mRNA(0.199±0.064、0.228±0.030)表达水平均低于K562阴性组,DR5 mRNA表达水平(0.312±0.075、0.464±0.073)表达水平高于K562阴性组(P＜0.05);K562/A02+62.5μmol/L雷公藤红素组、K562/A02+125 μmol/L雷公藤红素组NF-κB mRNA(0.492±0.040、0.359±0.069)、survivin mRNA (0.516±0.042、0.348±0.047)表达水平均低于K562/A02阴性组,DR5 mRNA表达水平(0.470±0.034、0.519±0.048)均高于K562/A02阴性组(P＜0.05);K562+62.5 μmol/L雷公藤红素组、K562+ 125 μmol/L雷公藤红素组DR5蛋白阳性表达率[(5.438±0.517)％、(6.250±0.897)％]高于K562阴性组[(0.093±0.015)％](P＜0.05),K562/A02+ 62.5μmol/L雷公藤红素组、K562/A02+125 μmol/L雷公藤红素组DR5蛋白阳性表达率[(19.900±0.526)％、(20.703±1.045)％]高于K562/A02阴性组[(6.980±0.925)％](P＜0.05).结论 雷公藤红素提高K562/A02耐药细胞株化疗敏感性的作用可能与下调NF-κB、survivin表达,上调DR5表达有关.
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蝎毒多肽提取物对白血病细胞株K562/A02荷瘤鼠耐药性的影响
目的 探讨蝎毒多肽(peptide extract from scorpion venom,PESV)逆转白血病干细胞(leukemiastem cells,LSC)在体内多药耐药(multidrug resistance,MDR)的分子机制.方法 以多药耐药的K562/A02细胞株成模白血病BALB/c裸鼠为例,成模鼠随机分为6组:模型对照组、阿霉素(ADM)组、PESV组、ADM+PESV(H)组、ADM+PESV(M)组、ADM+PESV(L)组.模型对照组给予等体积0.9％氯化钠溶液腹腔注射,其余各组予相应剂量ADM和(或)PESV腹腔注射,连续给药14天.第21天观察各组裸鼠移植瘤生长情况,分别检测瘤块中LSC:细胞膜上P-gp的表达,细胞质中ALDH、PI3K的变化及细胞核中MDR1、NF-κB的活性.结果 K562/A02细胞经免疫磁珠分选前后的CD34+CD38-细胞比率和IC50值分别为31.5％、(60.33±10.68)μg/ml和92.8％、(58.33±9.72)μg/ml,分选后细胞干性显著提高,而耐药性无差异性损失;各组造模裸鼠成瘤率100％.瘤体中LSC:流式细胞仪检测细胞膜上P-gp表达结果:检测对照组89.8％、ADM组91.9％、PESV组88.4％、ADM+PESV(H)组53.9％、ADM+PESV(M)组78.0％、ADM+PESV(L)组78.7％;半定量RT-PCR检测MDRl mRNA的表达:PESV组＞ADM+PESV(L)组＞ ADM+PESV(M)组＞ADM+PESV(H)组＞ADM组;免疫组织化学检测ALDH,显示灰度值ADM组＞PESV组＞ADM+PESV(H)组＞ADM+PESV(M)组＞ADM+PESV(L)组;Western blot检测PI3K分子与Elisa检测NF-κB因子结果一致,在ADM组、PESV组表达上调,在ADM+PESV组中表达下调,下调强度与PESV剂量呈正相关.结论 PESV具有下调白血病干细胞膜上P-gp,细胞质内ALDH、PI3K及细胞核中MDR1、NF-κB的表达水平,增强了白血病K562/A02干细胞在体内对ADM的敏感度,逆转其多药耐药特性.
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白桦脂酸增强 K562/A02细胞株对阿霉素敏感性的研究
目的：探讨低剂量白桦脂酸对 K562/A02细胞对阿霉素敏感性的影响及其相关机制。方法单用阿霉素和低剂量白桦脂酸联用阿霉素处理 K562/A02细胞，分别采用 MTT 法和流式细胞术检测低浓度白桦脂酸对阿霉素诱导的 K562/A02细胞增殖、凋亡及胞内 pH 值的影响；通过 real-time PCR 和 Western Blot 分别检测低浓度白桦脂酸对阿霉素诱导的 K562/A02细胞 NHE1及 MDR1 mRNA 及蛋白表达的影响。结果低浓度的白桦脂酸可以显著提高阿霉素诱导的 K562/A02细胞的增殖抑制效应（P<0.05），使其凋亡显著增强（P<0.05）。低浓度白桦脂酸联合阿霉素作用 K562/A02细胞后，胞内 pH 值降低（P<0.05），同时 NHE1和 MDR1 mRNA 的表达减少（P<0.05），NHE1和 P-gp 蛋白表达下降（P<0.05）。给予 NHE1抑制剂Amiloride 处理 K562/A02细胞后，再用白桦脂酸联合阿霉素处理，P-gp 的表达与单用 Amiloride 处理 K562/A02细胞相比无明显变化，而 BA 处理组、Amiloride 处理组、BA 联合 Amiloride 处理组的 NHE1和 P-gp 的表达均较对照组显著下降（P<0.05）。结论低浓度白桦脂酸可以增强 K562/A02细胞株对阿霉素的敏感性，这可能与其降低 NHE1表达，进而减少 P-gp 的表达，改变细胞内 pH 值有关。
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Puerarin逆转K562/A02耐药的分子机制
目的:研究黄酮类化合物puerarin对K562/A02(人红白血病多药耐药细胞系)细胞耐药逆转作用的分子机制.方法:免疫荧光染色方法检测阿霉素(ADR)和puerarin对K562(人红白血病细胞系)和K562/A02两种细胞NF-кB活性的影响;免疫细胞化学染色方法检测ADR和puerarin对K562和K562/A02的survivin表达的影响;流式细胞仪检测ADR和puerarin对K562和K562/A02的P-gP表达的影响.结果:经ADR处理后的K562细胞和K562/A02细胞NF-кB的活性明显高于K562细胞空白对照组;经puerarin预处理后再加ADR处理的K562细胞中的NF-кB的活性明显低于只用ADR处理的K562细胞.经puerarin干预后的K562/A02细胞的NF-кB的活性明显低于未经puerarin干预的K562/A02细胞;经ADR处理后的K562细胞和K562/A02细胞的p-gP,survivin表达明显高于K562细胞空白对照组;经puerarin预处理后再加ADR处理的K562细胞中的p-gp,survivin表达明显低于未经pu-erarin预处理的K562细胞;经puerarin干预后的K562/A02细胞的p-gp,survivin表达明显低于未经puer-arin干预的K562/A02细胞.p-gp和survivin表达呈正相关.结论:NF-кB的活化使p-gp和survivin表达增多可能是K562细胞多药耐药形成的机制之一.Puerarin能预防和阻止K562细胞耐药形成,并能逆转K562/A02对ADR的耐药,其机制与抑制NF-кB活性及survivin和p-gp的表达有关.
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甲基莲心碱在K562/A02细胞对STI 571敏感性中的作用
目的:研究甲基莲心碱(Nef)在多药耐药白血病细胞K562/A02对STI 571敏感性中的作用,并探讨其逆转耐药的机制.方法:MTT法比较STI 571单独或与Nef联合应用对K562/A02细胞的抑制作用;RT-PCR法检测mdr1 mRNA转录水平及Western Blot法检测P-gp表达水平.结果:Nef与STI 571联合应用对K562/A02细胞增殖的抑制作用明显增强.单独应用STI 571对K562/A02细胞的IC50为3.02 μmol/L,加Nef后,IC50为0.689 μmol/L,逆转倍数为4.38倍(P＜0.05).STI 571与Nef联合应用使mdr1 mRNA转录水平下调(45.4±2.5)%(P＜0.01),使P-gp的表达下调40.58%(P＜0.05).结论:甲基莲心碱能增强K562/A02细胞对STI 571的敏感性,下调其mdr1 mRNA的转录和阻断P-gp的表达,从而逆转白血病的多药耐药性.
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中药拮新康对K562/A02细胞内阿霉素积聚浓度的影响
目的探讨中药拮新康对K562/A02细胞内阿霉素积聚浓度的影响.方法采用高效液相色谱法测定细胞内阿霉素(ADM)浓度.结果10%拮新康血清加ADM组较10%正常血清加ADM组细胞内ADM浓度明显升高(P＜0.05).结论拮新康能增加ADM在K562/A02细胞内的积聚浓度,逆转K562/A02细胞耐药.
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核糖体蛋白L6在K562/A02和K562细胞株中的表达差异
目的 探讨核糖体蛋白L6(ribosomal protein L6,RPL6)在急性髓细胞性白血病耐药细胞系K562/A02和敏感细胞系K562中的差异表达.方法 分别从K562/A02和K562细胞中提取总RNA,以内参对照RT-PCR检测RPL6基因表达.结果 RPL6在K562/A02细胞中的表达较K562高(P＜0.001).结论 在耐药细胞系K562/A02高表达RPL6可能与白血病耐药有关.
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亚砷酸对白血病K562/A02细胞的作用及机制
目的 研究亚砷酸对白血病多药耐药细胞株K562/A02细胞的作用及对多药耐药基因1(mdr1)、P糖蛋白(P-gp)和血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响,探讨亚砷酸逆转白血病多药耐药(MDR)的作用机制.方法 将K562/A02细胞与不同浓度的亚砷酸(0、0.5、2.0、5.0μmol/L)共同孵育,分别在24、48、72 h时,用Wright's染色法观察K562/A02细胞形态,流式细胞术(FCM)检测凋亡细胞,MTT法检测细胞增殖活性,RT-PCR法检测mdrl mRNA的表达,免疫组织化学法观察P-gp表达,并用ELISA法检测YEGF的浓度.结果 随着亚砷酸作用浓度和时间的增加,K562/A02细胞的数目减少,并出现凋亡形态学改变,FCM显示随着作用浓度和时间的增加,细胞凋亡率逐渐上升；从作用48h组开始,mdrl mRNA及P-gp的表达出现显著降低(P＜0.05),mdrl mRNA条带颜色较空白对照组明显变浅,mdrl/GAPDH灰度比值下降,此时,P-gp的灰度值上升,且随亚砷酸作用浓度和时间的增加,mdtl mRNA条带颜色进一步变浅,表达水平进一步下降;ELISA法检测表明从0.5 μmol/L作用24h组开始,VEGF浓度即下降至405.02pg/mL(P＜0.05),相同作用时间下以5.0 μmol/L组较其它浓度组下调VEGF的作用为显著.结论 亚砷酸呈药物浓度—时间依赖性抑制K562/A02细胞增殖,诱导其凋亡,下调VEGF表达,有效抑制了mdrlmRNA的产生和P-gp的合成.
