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老鹳草素抗骨质疏松作用机制研究进展
老鹳草素是来源于大戟科叶下珠的多酚类化合物，具有抗骨质疏松、抗病毒、抗癌等多种药理作用。现将国内外关于老鹳草素抗骨质疏松药理作用的相关研究文献进行综述。
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老鹳草素药理研究进展
多酚类化合物老鹳草素广泛分布于老鹳草、叶下珠和睡莲花等植物中,具有抗氧化、抗辐射、抗肿瘤和抗病毒等多种药理作用.本文综述了近年来老鹳草素在药理方面的国内外研究进展,以期为其进一步开发提供依据.
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老鹳草素对小鼠骨髓基质干细胞增殖及成骨分化的影响
目的：研究老鹳草素对小鼠骨髓基质干细胞（ BMSCs）增殖及成骨分化的影响。方法分离、培养小鼠BMSCs，细胞分4组：空白组（加完全培养基），3个剂量老鹳草素实验组（老鹳草素，1×10－7，1×10－8，1×10－9 mol· L－1），CCK－8法检测细胞增殖，流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期变化，碱性磷酸酶（ ALP）试剂盒检测细胞ALP活性，茜素红染色检测成骨分化过程中钙结节形成数量。结果在成骨诱导培养1，3，5，7 d，老鹳草素各剂量组明显促进BMSCs的增殖，同时细胞凋亡率显著降低，呈剂量依赖性。第3天，3个剂量老鹳草素实验组A450值分别为0.41±0.06，0.37±0.04，0.33±0.05，较空白组（0.29±0.03）显著增加（P ＜0.05），细胞凋亡率分别为（2.53±0.40）％，（3.02±0.46）％，（3.71±0.54）％，较空白组（4.22±0.58）％显著降低（ P＜0.05）；与空白组比较，G0／G1期细胞比例显著降低， S 期细胞比例及细胞 ALP 活性显著增加（均P＜0.05）。在成骨诱导培养21 d，与空白组比较，各剂量老鹳草素组的矿化结节数量显著增加（P＜0.05）。结论老鹳草素通过调控BMSCs细胞周期、抑制凋亡促进BMSCs的增殖，还明显促进BMSCs向成骨方向分化。
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不同产地叶下珠中4种酚酸类成分的测定
目的 建立RP-HPLC同时测定不同产地叶下珠中没食子酸、柯里拉京、老鹳草素和短叶苏木酚酸的方法.方法 采用Diamonsil C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),以乙腈-0.2％醋酸水溶液为流动相,梯度洗脱,检测波长为270 nm,体积流量1 mL/min,柱温35℃.结果 没食子酸、柯里拉京、老鹳草素和短叶苏木酚酸的线性范围分别为0.062 2～0.622 0 μg(r=0.999 7)、0.130 4～1.304 0μg (r=0.999 4)、0.246 4～2.464 0 μg (r=0.999 2)、0.081 2～0.488 0 μg (r=0.999 3);平均回收率分别为103.62％、101.20％、100.09％、100.27％,RSD分别为1.29％、2.08％、1.40％、2.98％.结论 本测定方法简便、准确、重复性好,可用于叶下珠中没食子酸、柯里拉京、老鹳草素和短叶苏木酚酸的测定.
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老鹳草素通过Wnt/β-catenin信号通路影响小鼠骨髓基质干细胞的增殖和成骨分化
目的:观察Wnt/β-catenin信号通路在老鹳草素诱导小鼠骨髓基质干细胞(BMSCs)增殖和成骨分化中的作用机制.方法:分离、培养小鼠BMSCs,分为对照组(DMEM/F12完全培养基)、老鹳草素低剂量组(10-9mol·L-1老鹳草素+ DMEM/F12完全培养基)、老鹳草素中剂量组(10-8 mol·L-1老鹳草素+ DMEM/F12完全培养基)、老鹳草素高剂量组(10-7 mol·L-1老鹳草素+ DMEM/F12完全培养基)、老鹳草素高剂量+DKK1(Wnt/β-catenin信号通路特异性阻断剂)组和DKK1组.成骨诱导第7天时,采用CCK-8法检测细胞增殖,碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(OCN)试剂盒测定ALP活性及OCN含量.成骨诱导48 h时,采用Real time-PCR和Western-blot检测各组Wnt/β-catenin信号通路的关键信号分子Wnt3a、β-catenin、GSK-3β、Axin2、Runx2 mRNA和蛋白表达.结果:成骨诱导第7天时,老鹳草素各剂量组明显促进BMSCs的增殖,呈剂量依赖性(均P＜0.05);同时ALP活性及OCN含量较对照组显著升高,呈剂量依赖性(均P＜ 0.05).成骨诱导48 h时,老鹳草素各剂量组Wnt3a、β-catenin、Axin2、Runx2 mRNA和蛋白表达较对照组显著上调,GSK-3β mRNA和蛋白表达较对照组显著下调,呈剂量依赖性(均P＜0.05).加入DKK1后,细胞增殖受到显著抑制,ALP活性及OCN含量显著降低(均P＜0.05);同时Wnt3a、β-catenin、Axin2、Runx2 mRNA和蛋白表达显著下调,GSK-3β mRNA和蛋白表达显著上调(均P ＜0.05).结论:老鹳草素能够明显促进BMSCs的增殖及向成骨方向分化,其机制与Wnt/β-catenin信号通路的激活有关.
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老鹳草素诱导人前列腺癌细胞株PC-3凋亡及其分子机制的研究
目的 研究老鹳草素对人前列腺癌细胞株PC-3的诱导凋亡效应及其分子机制.方法 用MTT法研究老鹳草素对肿瘤细胞株生长的影响;采用流式细胞仪检测线粒体膜电位及细胞凋亡;用Western blot法检测凋亡相关基因;用分光光度计检测Caspase-3和Caspase-9的吸光值.结果 老鹳草素对人前列腺癌细胞PC-3细胞的抑制作用强,差异具有统计学意义(P＜0.05).老鹳草素促使细胞色素C大量由线粒体向细胞质中释放,激活Caspase-3和Caspase-9功能,具有统计学意义(P＜0.05).结论 老鹳草素通过激活线粒体凋亡途径及调节一些凋亡相关蛋白的表达诱导肿瘤细胞PC-3凋亡.
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老鹳草素的研究进展
老鹳草素是一种在自然界中分布广泛的多酚类化合物,具有多种生物活性.文章综述了近年来自然界中发现的老鹳草素的分离纯化及其在植物界的分布,其主要存在于栊牛儿苗科中的老鹳草属和大戟科的叶下珠属,并重点对其生物活性进行了概述,包括抗氧化、抗肿瘤、抗感染、代谢调节和免疫活性等.为进一步开发利用老鹳草素提供参考.
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老鹳草素对破骨细胞Ⅱ型碳酸酐酶蛋白表达的影响
目的 评价老鹳草素(geraniin)对培养的破骨细胞Ⅱ型碳酸酐酶蛋白表达的影响,探讨其抗骨质疏松症作用的分子机制.方法 机械法分离获得破骨细胞(osteoclast,OC),应用抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)染色技术,观察不同浓度老鹳草素对OC数量的影响.应用免疫细胞化学技术ABC方法检测不同浓度老鹳草素和乙酰唑胺干预下对培养的OC CA Ⅱ蛋白表达的影响.结果 老鹳草素呈浓度依赖性减少破骨细胞的数目；老鹳草素呈浓度依赖性下调pOC和mOC中CA Ⅱ蛋白阳性单位的数量.结论 老鹳草素抗骨质疏松症作用的机制可能与老鹳草素明显抑制体外培养OC的生成,下调OC中CA Ⅱ蛋白的表达有关.
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老鹳草素对地塞米松诱发大鼠骨质疏松症的影响
目的 观察老鹳草素对地塞米松诱发大鼠骨质疏松症的影响.方法 将6个月龄雌性Wistar大鼠随机分为对照组、模型组、5、10、20 mg/kg老鹳草素组和2 mg/kg阿仑膦酸钠组.大鼠肌肉注射地塞米松(1 mg/kg),老鹳草素连续灌胃90d,对股骨和腰椎进行骨密度及骨组织形态计量学检测.结果 对照组股骨和椎骨骨密度分别为(0.20±0.01)和(0.18±0.01) g/cm2,模型组分别为(0.15±0.01)和(0.10 ±0.01) g/cm2,差异有统计学意义(P＜0.05).与模型组比较,10、20 mg/kg老鹳草素能显著提高股骨和椎骨的骨密度.5 mg/kg老鹳草素可增加模型组大鼠股骨骨小梁表面积百分率、骨小梁间距和骨小梁节点数;10、20 mg/kg老鹳草素明显增加模型组大鼠股骨和椎骨骨小梁计数、骨小梁宽度和骨小梁表面积百分率,增多小梁节点数、减少骨小梁间隙距离和小梁游离末端数.结论老鹳草素具有抑制地塞米松引起大鼠骨质疏松症的作用,并呈剂量-效应关系.
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老鹳草素对成骨细胞增殖和骨保护素表达的影响
目的 观察老鹳草素对成骨细胞增殖和骨保护素(OPG)表达的影响.方法 培养小鼠成骨细胞MC3T3-E1,噻唑蓝(MTT)法观测老鹳草素对成骨细胞增殖能力的影响.免疫细胞化学染色法和原位杂交技术检测老鹳草素对成骨细胞OPG蛋白和mRNA表达的影响.结果 MTT法测得对照组成骨细胞吸光度值为0.777±0.088、10-12 ～ 10-8 mol/L老鹳草素组分别为0.958±0.054、0.943±0.029、0.918±0.070、0.899±0.048和0.793±0.074;与对照组比较,除10-8 mol/L组外,差异有统计学意义(P＜0.01).对照组和10-11～10-8 mol/L老鹳草素组OPG蛋白平均吸光度值分别为0.231±0.022、0.249±0.015、0.255±0.021、0.302±0.025和0.328±0.021;OPG mRNA平均吸光度值分别为0.297 ±0.041、0.307±0.039、0.318 ±0.035、0.394±0.036和0.429±0.050,提示老鹳草素呈浓度依赖性上调成骨细胞OPG表达.结论 老鹳草素具有促进成骨细胞增殖的作用,OPG表达上调可能是其中的机制之一.
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老鹳草素对破骨细胞Ⅱ型碳酸酐酶mRNA表达的影响
目的:研究老鹳草素(geraniin)对培养的破骨细胞(OC)Ⅱ型碳酸酐酶(CA Ⅱ) mRNA表达的影响,探讨其抗骨质疏松症作用的分子机制.方法:应用原位杂交技术检测不同浓度老鹳草素和乙酰唑胺干预下对培养的OC CAⅡ mRNA表达的影响.结果:与空白对照组和乙酰唑胺组比较老鹳草素10-7 mol/l浓度组能明显降低OC CAⅡ mRNA表达.与空白对照组比较,老鹳草素10-8 mol/l、10-9mol/l浓度组能降低OC CAⅡ mRNA表达,但作用弱于乙酰唑胺组.老鹳草素10-10mol/l浓度组对OC CAⅡ mRNA表达无影响.随着老鹳草素浓度的增加(10-10 mol/l～10-7 mol/l),DAB染色变浅,阳性表达减少,呈浓度依赖性降低积光分度和阳性单位,升高平均灰度.结论:老鹳草素抗骨质疏松症作用的机制可能与老鹳草素下调OC中CA Ⅱ mRNA的表达有关.
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老鹳草素对破骨细胞体外骨吸收功能的影响
目的 观察老鹳草素(geraniin,Ge)对体外培养破骨细胞(OC)的形成及其骨吸收功能的影响.方法 由1日龄SD大鼠四肢长骨分离OC,和象牙骨片共同培养,或直接接种于培养板中,分别采用抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)和甲苯胺蓝染色技术观察不同浓度的Ge对体外培养OC形成及OC性骨吸收功能的影响.结果 Ge呈浓度依赖性减少体外培养的TRAP染色阳性多核细胞即成熟破骨细胞(mature osteoclast,mOC)数目；与空白对照组比较,Ge各浓度组均使OC性骨吸收陷窝个数和面积减少、灰度变浅.结论 Ge减少体外培养OC的形成并抑制体外培养OC的骨吸收功能.
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老鹳草素对血小板聚集和血小板-中性粒细胞之间相互作用的影响
目的 研究老鹳草素抗血小板聚集作用及其对血小板与中性粒细胞之间相互作用的影响.方法 采用Born方法观测老鹳草素在体内和体外对家兔血小板聚集功能的影响,运用玫瑰花结实验测定血小板与中性粒细胞的黏附反应,以Fura-2-AM为荧光指示剂,检测老鹳草索对激活的血小板内钙水平的影响.结果 老鹳草素在体外呈浓度依赖性明显抑制花生四烯酸(AA)、腺苷二磷酸(ADP)及血小板活化因子(PAF)诱导的血小板聚集功能.其半数抑制浓度(IC50)分别为2.4、0.4和1.1μmol/L;5 mg/kg的老鹳草素灌胃亦明显抑制AA、ADP和PAF诱导的血小板聚集;老鹳草素显著降低洗涤血小板内钙离子浓度、减少细胞外钙内流及内钙释放,其IC50分别为71.9、84.9、62.9 μmol/L.老鹳草素明显阻抑凝血酶激活的血小板与中性粒细胞之间的黏附作用,并抑制肉豆蔻佛波醇(fMLP)激活的中性粒细胞上清液诱导的血小板聚集功能,其IC50分别为3.2和10.2 μmol/L.结论 老鹳草素明显抑制血小板聚集功能,降低血小板内钙水平,同时阻抑血小板与中性粒细胞之间的相互作用.
关键词： 老鹳草素 血小板聚集 细胞内钙 血小板-中性粒细胞相互作用 -
老鹳草素对实验性骨质疏松症及破骨细胞生成的影响
目的 评价老鹳草素(geraniin,Ge)对实验性骨质疏松症的影响并探讨其初步作用机制.方法 用维甲酸建立大鼠骨质疏松模型,观察Ge 20 mg/kg灌胃给药1周后对骨质疏松相关指标的影响.机械法分离1日龄SD大鼠四肢长骨获得破骨细胞(osteoclast,OC),接种于培养板中培养,在培养液中分别加入不同浓度的Ge和Ⅱ型碳酸酐酶(carbonic anhydrase Ⅱ,CA Ⅱ)阻断剂乙酰唑胺(acetazolamide,Az),应用抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)和甲苯胺蓝染色技术,观察不同浓度Ge对OC生存率的影响.结果 维甲酸70 mg/kg体重灌胃15 d,模型组大鼠的体重下降,卵巢指数下降,血清碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)升高,骨钙含量减少,骨小梁稀疏,骨小梁表面积减小,骨小梁间隙面积增大,表明大鼠骨质疏松模型复制成功.与模型组比较,Ge组和尼尔雌醇片阳性对照组的卵巢指数高,骨钙增高,骨小梁较密集,骨小梁间隙面积小,骨小梁表面积大,Ge可降低血清ALP同时升高血清钙水平.Ge呈浓度依赖性减少体外培养的TRAP染色阳性的多核细胞(成熟破骨细胞,mature osteoclast,mOC)数目.结论 老鹳草素对维甲酸致大鼠骨质疏松症有对抗作用,明显抑制体外培养OC的生存率可能是抗骨质疏松作用的机制之一.
