薯蓣皂苷对胰腺癌MiaPaCa-2细胞凋亡的影响及机制

目的 探讨薯蓣皂苷对胰腺癌细胞MiaPaCa-2凋亡的作用及其对细胞中过氧化还原酶1(PRDX1)表达水平的影响.方法 采用四甲基偶氮唑蓝法检测不同浓度薯蓣皂苷对MiaPaCa-2细胞增殖抑制的影响,流式细胞术检测细胞的凋亡,Western blot检测PRDX1以及凋亡相关蛋白的表达,DCFH-DA荧光探针检测细胞中活性氧簇(ROS)的水平.结果 薯蓣皂苷可以抑制MiaPaCa-2细胞的增殖,且有剂量-效应依赖关系.薯蓣皂苷可以诱导MiaPaCa-2细胞内ROS水平明显上升.2.5 μmol/L和5μmol/L薯蓣皂苷处理MiaPaCa-2细胞12 h后,细胞凋亡率分别为(28.4±0.9)％和(49.6±2.7)％,与空白对照组[(3.5±0.7)％]比较,差异均有统计学意义(均P ＜0.05).Western blot检测结果显示,与对照组比较,薯蓣皂苷组的抗凋亡蛋白表达降低,而凋亡蛋白表达上调,但加入N-乙酰半胱氨酸(NAC)后,薯蓣皂苷组的这种诱导作用受到抑制.10 mmol/L NAC和2.5 μ.mol/L薯蓣皂苷、10 mmol/L NAC和5μmol/L薯蓣皂苷处理MiaPaCa-2细胞12h后,凋亡率分别为(10.8±2.3)％和(18.8 ±3.0)％.薯蓣皂苷可以降低MiaPaCa-2细胞的PRDX1蛋白表达.过表达PRDXI后,薯蓣皂苷诱导MiaPaCa-2细胞内ROS水平上升和凋亡的作用明显受到抑制,凋亡率为(21.3±5.9)％.结论 薯蓣皂苷可以下调胰腺癌MiaPaCa-2细胞中PRDX1的表达水平,进而导致ROS过度蓄积引起细胞凋亡.

薯蓣皂苷对胶原性关节炎模型大鼠环氧合酶2及NF-κB的抑制作用

目的 研究薯蓣皂苷对大鼠胶原性关节炎(CIA)的治疗作用并探讨其可能的作用机制.方法 第1天大鼠左后足底皮内注射胶原乳剂制备CIA模型,第7天加强注射.第12天ig给予薯蓣皂苷30,60和120 mg·kg-1,吲哚美辛8 mg· kg-1,连续14d.给药前和给药开始,每4d测量1次右后足跖肿胀程度；处死后光镜观察右后足组织形态变化；检测CIA大鼠脏器指数；Western印迹法检测踝关节滑膜组织中NF-κB p65亚基和环氧合酶2蛋白(COX-2)表达；放射免疫法检测足爪肿瘤坏死因子α(TNF-α)及前列腺素E2(PGE2)含量.结果 与正常对照组相比,CIA模型大鼠右后足跖明显肿胀(P＜0.01)；病理切片发现明显增生和大量炎症细胞浸润；胸腺指数和脾指数明显增高(P＜0.01)；踝关节滑膜组织中NF-κB p65亚基和COX-2的水平显著升高(P＜0.01)；足爪TNF-α及PGE2含量亦显著增高(P＜0.01).与模型组相比,薯蓣皂苷60和120 mg· kg-1治疗可抑制CIA大鼠的足趾肿胀,明显改善大鼠病变关节的病理组织结构,降低大鼠胸腺指数,显著降低NF-κB p65亚基和COX-2的水平(P＜0.01),降低足爪TNF-α及PGE2含量(P＜0.01),对关节炎大鼠有明显的治疗作用.结论 薯蓣皂苷对CIA大鼠具有较强的抗炎作用,机制可能与抑制NF-κB p65亚基和COX-2的表达有关.

薯蓣皂苷药理作用、潜在肝毒性及药代动力学研究进展

薯蓣皂苷属于甾体皂苷中的异螺旋甾烷醇型衍生物,是多种植物药、中成药和中药复方的药效物质基础及质控成分.文章综述了近年来薯蓣皂苷的药理学作用、潜在肝毒性及药代动力学研究成果.薯蓣皂苷药理作用广泛,尤其在心血管药理方面,临床应用潜力巨大,但其潜在的肝毒性需要被关注,同时药代动力学方面其胃肠道吸收差、代谢缓慢并且生物利用度极低,亦需被关注.薯蓣皂苷的肝毒性与剂量相关,由于薯蓣皂苷存在潜在的肝毒性,临床应用相关药物时应加以防范.

薯蓣皂苷通过降低胶质细胞活化及维持SOD水平减轻脑卒中小鼠的神经损伤

本实验主要是探究天然甾体皂苷-薯蓣皂苷对小鼠大脑中动脉阻断术后引起的局灶性脑缺血的神经保护作用及其相关作用机制.在本实验中,我们发现薯蓣皂苷(1.5 mg/kg,侧脑室注射)术前30 min给药后明显减少小鼠脑梗死体积和神经损伤症状,同时脑梗死区神经细胞(神经元细胞、胶质细胞)的死亡及海马区神经胶质细胞的活化也显著减少;另外,1.5 mg/kg薯蓣皂苷干预明显提高脑梗死区SODs的表达.这些结果表明薯蓣皂苷通过抑制胶质细胞活化及提高SODs的表达对脑缺血再灌注小鼠发挥神经保护作用.

薯蓣皂苷含药血清抗氧化损伤致心肌细胞凋亡的研究

目的 采用血清药理学方法探讨薯蓣皂苷含药血清对氧化损伤心肌细胞凋亡的作用及其机制.方法 以血清药理学方法采集含药血清.培养原代乳鼠心肌细胞,建立氧化损伤模型,以含药血清进行干预,MTT法检测细胞存活率.Hoechst33258荧光染色法观察药物作用后心肌细胞形态学变化.caspase-3活性测定方法探讨薯蓣皂苷抗凋亡途径.Western blot方法测定薯蓣皂苷对Bcl-2及Bax蛋白表达的影响.结果 MTT法作用结果显示,将原始收集血清稀释为相当于灌胃0.4、0.8、1.2 g(生药)·kg-1浓度时,相对于H2O2单纯损伤组和空白血清组心肌细胞有较高的存活率(P＜0.01),且呈现一定的剂量依赖性.Hoechst33258荧光染色结果显示:与H2O2组相比,含药血清组随着药物浓度升高细胞核固缩凝聚减轻,碎片依次减少.与H2O2组相比,caspase-3活性随含药血清浓度增高而降低.与H2O2组相比,薯蓣皂苷给药组能够下调Bax水平,上调Bcl-2水平,且呈现剂量依赖性.结论 薯蓣皂苷能够提高H2O2诱导的原代乳鼠心肌细胞存活率,降低caspase-3活性;减轻细胞核固缩和聚集,减少细胞核碎片;且能够降低Bax表达水平,提高Bcl-2表达水平.

穿山龙提取物质量标准研究

目的 建立穿山龙提取物的质量控制标准.方法 通过薄层色谱(TLC)法和高效液相色谱(H PLC)法对穿山龙提取物进行质量控制.结果 穿山龙提取物中薯蓣皂苷测定的线性范围0.06～0.48 mg·mL-1,回归方程Y=3518071.80X-25061.85,r=0.9992,平均回收率为99.62％,RSD为1.83％.结论 本试验建立的薄层色谱鉴别和薯蓣皂苷HPLC含量测定方法,可为穿山龙提取物的质量标准制定提供参考.

中药材黄药子质量标准研究

目的：修订中药材黄药子的质量标准。方法药材粉末的显微鉴别，选用合适的方法测定浸出物，采用高效液相色谱法测定薯蓣皂苷的含量。结果显微鉴别组织特征典型，根据检测结果，暂规定本品水溶性浸出物不得少于15.0%；含薯蓣皂苷应为0.12%～0.29%，薯蓣皂苷在0.01958μg～0.3916μg范围内与峰面积呈良好的线性关系，平均回收率为99.30%（RSD＝0.8%,n＝6）。结论所建立的质量标准方法可靠、准确、专属性强，可有效控制黄药子的质量。

薯蓣皂苷治疗冠心病心绞痛临床观察

1资料与方法1.1一般资料本组病例为2000年3月-2003年5月我院住院患者,诊断符合1979年WHO标准[1].随机选择160例,观察组和对照组各80例,观察组中男42例,女38例,平均年龄59.3岁,其中不稳定型心绞痛53例,稳定型心绞痛21例,陈旧性心肌梗死6例,心电图均有ST段水平或下斜型下降≥1rmV或T波改变.对照组的性别、年龄、病程及病情与观察组差异无统计学意义(P＞0.05).

穿龙骨刺片提取工艺研究

目的 确定穿龙骨刺片提取及干燥工艺参数.方法 以薯蓣皂苷、淫羊藿苷为指标确定工艺.结果 穿山龙用80% 乙醇渗漉提取,渗漉液的量为药材量8 倍时,薯蓣皂苷提取率可达90%.淫羊藿等水煎条件加6 倍水,水煎3 次,每次2h,淫羊藿苷提取率67% 以上,浸膏干燥采用80℃减压干燥,薯蓣皂苷和淫羊藿苷损失均<3%.结论 提取工艺能够充分提出有效成分,干燥条件有效成分损失小.

高效液相色谱法测定柴黄益肾颗粒中薯蓣皂苷的含量

柴黄益肾颗粒是我院临床医学研究所药物药理室在研开发的新药,由黄芪、当归、穿山龙、柴胡、石韦、猪苓、水蛭7味药组成,具有益气活血,清热利水之功效.柴黄益肾颗粒中薯蓣皂苷的含量是评价药品质量的重要成分,建立一种实用、高效、可靠的检测方法对柴黄益肾颗粒的开发应用是非常重要的.本试验用高效液相色谱法测定柴黄益肾颗粒中薯蓣皂苷的含量,为控制该药品的质量提供快速、准确、方便的测定方法.

盾叶薯蓣中甾体皂苷的研揪

目的 研究盾叶薯蓣中甾体皂苷的组成.方法 用溶剂法提取,色谱法分离盾叶薯蓣中的甾体皂苷.用核磁共振法鉴定其结构.结果 从盾叶薯蓣的正丁醇萃取相中分离到8个甾体皂苷,经1H.NMR、13C-NMR、135DEPT测定分析,其结构分别为原薯蓣皂苷元-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1-3)-β-D-吡喃葡萄糖基(1-4)-[α-L-吡哺鼠李糖基(1-2)]-β-D-吡喃葡萄糖基(1)、原薯蓣皂苷元-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1-4)-[α-吡喃鼠李糖基(1-2)-α-吡喃葡萄糖基(Ⅱ)、原薯蓣皂苷元-3-O-α-L-吡哺鼠李糖基(1-2)-p-β-D-吡喃葡萄糖基(Ⅲ)、22α-甲氧基-原薯蓣皂苷元-3-O-β-D)-吡喃葡萄糖基(1-4)-[α-L一吡喃鼠李糖基(1-2)]-β-D-吡喃葡萄糖基(Ⅳ)、3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1-3)-β-D-吡喃葡萄糖基(1-4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1-2)]-β-D-吡喃葡萄糖基-薯蓣皂苷元(V)、3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1-4)一[α-L-吡喃鼠李糖基(1-2)]-β-D-吡喃葡萄糖基一薯蓣皂苷元(Ⅵ)、3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1-4)-β-D-吡喃葡萄糖基一薯蓣皂苷元(Ⅶ)、3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1-4),[α-L-吡喃鼠李糖基(1-2)]-β-D-吡喃葡萄糖基-薯蓣皂苷元(Ⅷ).结论 盾叶薯蓣的正丁醇萃取相部分主要含有两类甾体皂苷,其苷元分别为原薯蓣皂苷元和薯蓣皂苷元.

鄂西鹿药甾体化学成分研究

目的 研究鄂西鹿药Smilacina henryi根茎的化学成分.方法 采用柱硅胶、葡聚糖凝胶、半制备薄层等色谱技术分离纯化,根据理化性质及波谱数据(1D、2D-NMR,HR-ESI-MS,IR)进行结构鉴定.结果 从鄂西鹿药中分离鉴定了7个化合物,分别为(25S)-5α-螺甾-9(ll)烯-3β,17α-二醇3-O-p-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-β-D-吡喃半乳糖苷(1)、(25S)-5α-螺甾-9(11)烯-3β,17α-二醇(2)、(25S)-5α-螺甾-9(11)烯-3β,17α-二醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(3)、薯蓣皂苷元(4)、薯蓣皂苷(5)、henryiosideA(6)、henryiosideB(7).结论 化合物1为1个新的罕见的9(11)烯螺甾皂苷类新化合物,命名为鄂西鹿药苷D,化合物2～5为首次从该植物中分离得到.

薯蓣皂苷含药血清对大鼠心室肌细胞钠离子通道的影响

目的 研究薯蓣皂苷含药血清对正常大鼠心室肌细胞钠离子通道电流(INa)的影响,探讨其保护心肌细胞及抗心律失常的离子机制.方法 大鼠ig给予300 mg/kg薯蓣皂苷,2次/d,连续4d,末次给药后1h从腹主动脉取血,离心分离得含药血清;采用酶解法分离大鼠单个心室肌细胞,以全细胞膜片钳技术记录薯蓣皂苷含药血清低、中、高剂量(1、10、100 μL)分别对大鼠正常心室肌细胞INa的影响.结果 薯蓣皂苷含药血清1、10、100μL均使Ⅰ-Ⅴ曲线下移,内向电流增加;1μL薯蓣皂苷含药血清使INa峰值增大,而10、100 μL的薯蓣皂苷含药血清使INa峰值由(-52.10±3.80)pA/pF变为(-76.44±4.09)pA/pF和(-81.96±4.70)pA/pF (P＜0.01),呈剂量依赖性.1、10、100 μL薯蓣皂苷含药血清剂量依赖性加速钠离子通道激活过程,半数稳态激活电压分别由(-57.69±1.86)mV变为(-59.71±2.57)、(-66.56±1.32)(P＜0.01)、(-68.52±3.91)mV (P＜0.01),但对失活过程无明显影响.1、10、100 μL薯蓣皂苷含药血清剂量依赖性加速钠离子通道的复活过程,拟合复活曲线τ值由(150.73±21.49) ms分别变为(143.19±13.88)、(84.83±18.03) (P＜0.01)、(80.63±13.89) ms (P＜0.01).结论 薯蓣皂苷含药血清通过加快激活过程及复活过程促进钠离子的内流.

HPLC-DVD变波长法同时测定跌打止痛散中6种指标成分

目的 建立HPLC-DVD波长切换联合梯度洗脱法同时测定跌打止痛散(DZS)中6种指标成分羟基红花黄色素A、薯蓣皂苷、原薯蓣皂苷、甲基原薯蓣皂苷、伪原薯蓣皂苷和纤细薯蓣皂苷的量.方法 采用HPLC-DVD法,Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱;乙腈-0.4％甲酸水溶液为流动相,体积流量0.9 mL/min,梯度洗脱;羟基红花黄色素A的检测波长为403 nm,薯蓣皂苷、原薯蓣皂苷、甲基原薯蓣皂苷、伪原薯蓣皂苷和纤细薯蓣皂苷的检测波长为203 nm;进样量为20 μL.结果 6种指标成分羟基红花黄色素A在3.46～69.20 μg/mL(r=0.999 4)、薯蓣皂苷在9.52～190.40 μg/mL(r=0.999 7)、原薯蓣皂苷在8.74～174.80 μg/mL (r=0.999 6)、甲基原薯蓣皂苷在4.45～89.00 μg/mL (r=0.999 9)、伪原薯蓣皂苷在2.64～52.80 μg/mL (r=0.999 5)、纤细薯蓣皂苷在3.28～65.60 μg/mL (r=0.999 8)质量浓度与峰面积具有较好的线性关系:精密度、重复性良好,RSD均小于2.0％;供试品溶液在室温条件下12 h内稳定;平均加样回收率和相应的RSD分别为98.57％、1.59％;97.64％、1.28％;99.43％、1.07％;97.98％、1.64％;98.57％、1.16％;97.17％、1.37％.结论 建立的HPLC波长切换联合梯度洗脱法同时测定DZS中的6种成分,方法操作简便、快速、准确,可作为DZS全面可靠的质量控制方法.

球状活性炭对几类中药有效成分的吸附性能研究

目的研究球状活性炭对几类中药成分的静态吸附性能,探讨其应用于中药精制的可行性.方法对适宜的高分子树脂进行炭化、活化处理,制备球状活性炭.测定静态吸附条件下球状活性炭对目标成分的吸附等温线,并运用Langmuir单层分子吸附模型对实验数据进行计算机拟合,求出实验条件下吸附剂的表观吸附容量和平衡状态下的理论吸附容量.同时考察75%乙醇溶液的洗脱效果.结果球状活性炭对盐酸小檗碱和薯蓣皂苷的表观吸附容量以干基计分别为35.46,47.12mg/g,相应的理论平衡吸附容量为96.16,102.04mg/g,对芦丁的表观吸附量也达到40.88mg/g.3种成分的静态洗脱率分别为83.71%,91.45%和87.69%.结论球状活性炭对生物碱、黄酮和皂苷类物质有良好的吸附与洗脱性能,适于在中药精制纯化中推广应用.

薯蓣皂苷对大鼠心肌收缩与钠-钙交换体的影响

目的:观察薯蓣皂苷(Dio)对大鼠心肌收缩作用以及胞内Ca2+浓度的影响,并初步探讨其作用机制与Na+-Ca2+交换体(NCX)的关系.方法:采用Langendorff逆行主动脉灌流法对大鼠离体心脏进行灌流,利用压力感受器插管法测定左心室相关心功能参数,记录及其在应用NCX选择性抑制剂SEA0400情况下对左心室收缩压(LVSP)、左心室舒张末期压(LVEDP)、左心室内压大上升/下降速率(±dp/dtm.)以及心率(HR)的影响;利用激光共聚焦显微观察薯蓣皂苷及SEA0400对大鼠心肌细胞H9c2细胞内Ca2+浓度的影响.结果:离体心脏灌流结果显示,1 μmol/L Dio可显著增加LVSP,增加约19.7％(P＜0.01);增加左室内压大上升速率(+dp/dtmax),增加约9.6％;激光共聚焦测定Ca2+荧光强度实验结果显示:1 μmol/L Dio可使H9c2细胞中Ca2+相对荧光强度增加(P＜0.01);而在SEA0400存在的情况下,1μmol/L的Dio使细胞内Ca2+相对荧光强度变为(17.09±0.63),给予Dio后差异有显著性(P＜0.01).在细胞液中无Ca2+或无Na+时,给予lμmol/L的Dio使Ca2+相对荧光强度减小,与给予lmol/L的Dio差异有显著性(P＜0.01).结论:Dio可增加左心室收缩压和大上升速率,表现正性肌力作用;Dio可使细胞内Ca2+浓度增加,其作用机制与增加Na+内流,促进NCX反向转运有关.

HPLC法测定不同产地穿山龙中原薯蓣皂苷、原纤细薯蓣皂苷、甲基原薯蓣皂苷、伪原薯蓣皂苷、薯蓣皂苷和纤细薯蓣皂苷

目的 建立HPLC法同时测定不同产地穿山龙药材中原薯蓣皂苷、原纤细薯蓣皂苷、甲基原薯蓣皂苷、伪原薯蓣皂苷、薯蓣皂苷和纤细薯蓣皂苷.方法 穿山龙药材粉末经50％甲醇超声处理.采用Agilent SB-Aq色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈-水,梯度洗脱;检测波长203 nm;体积流量1.0 mL/min;柱温25℃;进样体积20μL.结果 原薯蓣皂苷、原纤细薯蓣皂苷、甲基原薯蓣皂苷、伪原薯蓣皂苷、薯蓣皂苷和纤细薯蓣皂苷在1.0540～10.5400、0.5190～5.1900、0.2870～2.8700、0.0212～0.2120、0.0614～0.6140、0.0614～0.6140μg线性关系良好,r均大于0.9990.平均加样回收率分别为100.19％、100.24％、99.87％、100.92％、99.36％、100.03％,RSD值分别为2.03％、2.51％、2.33％、3.07％、2.77％、3.41％.不同产地的穿山龙药材中原薯蓣皂苷、原纤细薯蓣皂苷、甲基原薯蓣皂苷、伪原薯蓣皂苷、薯蓣皂苷和纤细薯蓣皂苷的质量分数分别为1.587～4.837％、0.260～1.950％、0.477～1.317％、0.037～0.187％、0.801～3.813％、0.088～0.524％.结论 该方法快速、简便、准确,可用于穿山龙药材的质量控制.

313 原薯蓣皂苷对60种人癌细胞株的细胞毒谱

薯蓣皂苷对大鼠缺血再灌注心肌能量代谢的影响

目的:建立测定心肌组织样品中腺苷酸含量的RP-HPLC法,并观察薯蓣皂苷(D)对缺血再灌注大鼠心肌能量代谢的改善作用.方法:建立大鼠心肌缺血再灌注模型,以薯蓣皂苷进行干预,大鼠随机分为4组:空白对照组(C组),心肌缺血再灌组(IR组),薯蓣皂苷高剂量组(DH组),薯蓣皂苷低剂量组(DL组).采用反相高效液相色谱法,C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为100 mmol·L-1磷酸二氢钾-磷酸氢二钾(10:1)缓冲液(pH=6.0),流速为1.0 ml·min-1,柱温为35℃,检测波长254 nm,测定心肌组织ATP、ADP、AMP含量、腺苷酸池(TAN)水平.结果:ATP、ADP、AMP在浓度2.5～320 μg·ml-1(r=0.9999)范围内线性关系良好,平均回收率(n=6)分别为ATP 97.5%、ADP 105%、AMP 99.5%;批内RSD分别为0.9%、1.0%、0.8%,批间RSD分别为3.1%、3.3%、3.2%.结论:该方法可简便、快速、准确地测定大鼠心肌腺苷酸含量;薯蓣皂苷对大鼠缺血再灌注心肌能量代谢有明显改善作用.

薯蓣皂苷对氧化低密度脂蛋白诱导血管内皮细胞凋亡的保护作用

目的:研究薯蓣皂苷对氧化低密度脂蛋白(Ox-LDL)诱导血管内皮细胞(EC)凋亡的保护作用,并探讨其作用机制.方法:实验分5组,对照组、模型组(150μg/mL的Ox-LDL)、薯蓣皂苷低中高剂量组(4.8、12、30μg/mL),用MTT法检测EC存活率；流式细胞术分析测定细胞凋亡率；硝酸还原酶法测定EC的NO浓度；双抗体夹心法检测内皮素(ET)浓度；Western Blot测定内皮细胞eNOS的蛋白表达.结果:与对照组相比,Ox-LDL使EC的凋亡率、ET的浓度显著升高(49.6±10.44vs 30.0±3.27,P＜0.01;25.89±2.07vs16.93±1.64,P＜0.05)；使EC的存活率、NO的浓度、eNOS蛋白表达显著降低(64.89±1.02vs 100±0,P＜0.01;27.03±3.12vs59.46±16.19,P＜0.01；P＜0.01).薯蓣皂苷低中高剂量组能明显抑制EC的凋亡率,降低ET的浓度；提高EC的存活率、NO的浓度以及eNOS蛋白表达水平,且在此药物浓度范围内成浓度依赖性.结论:著蓣皂苷可能通过减少ET的合成与分泌,提高eNOS的表达,使NO的合成与释放增加,从而对Ox-LDL诱导血管内皮细胞凋亡起到保护作用.