首页 > 文献资料
-
青风藤提取物对胶原诱导性关节炎模型大鼠TNF-α、组织蛋白酶G及组织蛋白酶S表达的影响
目的 探讨青藤碱对胶原诱导性关节炎(collagen induced arthritis,CIA)模型大鼠TNF-α、组织蛋白酶G (cathepsin G,Cat-G)及组织蛋白酶S(cathepsin S,Cat-S)表达的影响.方法 选用SPF级雄性Wistar大鼠60只,按随机数字表法分为正常组,模型组,青藤碱高、中、低剂量组,醋酸地塞米松组,每组10只.除正常组外,其余各组大鼠建立CIA模型.造模后20 d,青藤碱高、中、低剂量组分别灌胃青藤碱120、90、60 mg/kg;醋酸地塞米松组灌胃地塞米松7.5 mg/kg;正常组与模型组灌胃等体积生理盐水.1次/d,连续干预20 d.拍摄各组大鼠足爪X-ray与足爪图片;检测血清中TNF-o、Cat-G及Cat-S含量;采用HE染色观察各组大鼠关节炎滑膜组织病理性改变;采用免疫组化染色法观察大鼠脾脏TNF-α、Cat-G及Cat-S表达情况.结果 X-ray结果显示,模型组大鼠足爪部出现明显软组织肿胀、关节畸形及溶骨现象,各给药组上述症状较模型组均有不同程度减轻.与模型组比较,青藤碱高、中、低剂量组血清TNF-α[(376.48±22.21) pg/ml、(369.45±82.68) pg/ml、(425.17±153.51) pg/ml比(457.63±152.67) pg/ml]、Cat-G[(1 398.05±167.32) pg/ml、(1 337.65±209.34) pg/ml、(1 412.78±67.65) pg/ml比(2 283.03±185.21) pg/ml]及Cat-S[(662.18±169.66) pg/ml、(406.80±41.93) pg/ml、(452.76±50.49) pg/ml比(838.11±141.86) pg/ml]表达降低(P＜0.05),脾脏组织中TNF-α[(0.28±0.05)、(0.21±0.03)、(0.34±0.04)比(0.50±0.04)]、Cat-G[(0.28±0.02)、(0.18±0.06)、(0.27±0.02)比(0.37±0.03)]及Cat-S[(0.22±0.02)、(0.18±0.03)、(0.27±0.02)比(0.35±0.03)]阳性表达降低(P＜0.05);HE染色结果显示,正常组大鼠滑膜组织形态正常,模型组大鼠滑膜组织细胞受损,炎性细胞表达显著增多,血管翳增生,给药后各组炎性细胞浸润和血管翳增生均有减少.结论 青藤碱对CIA模型大鼠类风湿关节炎有防治作用,其机制与抑制大鼠TNF-α、Cat-G及Cat-S表达有关.
-
组织蛋白酶G在1型糖尿病小鼠CD+4T淋巴细胞活化过程中的作用
目的 验证调节组织蛋白酶G(CatG)对1型糖尿病(T1DM)NOD小鼠CD4+T细胞活化水平的影响,并探讨特异性阻断CatG对T1DM的防治作用.方法 选取6周龄雌性NOD小鼠84只,体重16~18 g,采用随机数字表法将其中36只分为3组:血糖正常组(正常组)、糖尿病前期组和糖尿病组(每组12只),检测各组CatG的基因表达与CD4+T细胞活化状态.另外48只小鼠进行T1DM造模,糖尿病前期组给予CatG小干扰RNA(CatG siRNA)干预(n=12),糖尿病组给予CatG抑制剂(0.1 mg腹腔注射,隔日1次,n=12).设立相应模型对照组(各12只),干预8周后处死取材.观察CatG抑制剂治疗糖尿病小鼠对CD4+T细胞活化、胰岛功能、胰岛炎症的影响;观察早期应用CatG siRNA对NOD小鼠CD4+T细胞活化状态及糖尿病进程的影响.3组资料比较采用单因素方差分析,2组资料比较采用独立样本t检验.结果 (1)血糖正常组、糖尿病前期组和糖尿病组小鼠CatG基因表达量分别为0.42± 0.21、0.60±0.33、0.94±0.45,差异有统计学意义(F=12.89,P<0.05),正常组明显低于其他2组;与正常组相比,糖尿病前期组和糖尿病组小鼠脾脏和外周血CD4+T细胞逐渐活化,表现为辅助性T细胞(Th)1比例明显升高,而Th2细胞和调节性T(Treg)细胞显著下降(F=11.85~21.36,均P<0.01).(2)与对照组相比,特异性CatG抑制剂组NOD小鼠血糖水平明显降低(t=11.26~12.45,均P<0.01);胰岛素分泌水平升高(t=11.89~13.78,均P<0.01);外周血和脾脏CD4+T细胞的活化水平减轻,差异具有统计学意义(均P<0.05).(3)与对照组相比,早期应用CatG siRNA后Th1细胞比例下降[外周血:(5.1±1.4)%比(2.4± 0.3)%,脾脏:(10.6±2.0)%比(6.3±1.5)%,t=20.78、27.96,均P<0.05],Th2和Treg细胞比例明显升高(t=20.59~30.25,均P<0.05),小鼠血糖降至正常或处于糖尿病前期水平,胰岛素水平显著升高(t=31.69~33.98,均P<0.01).结论 CatG是T1DM发病中CD4+T细胞活化过程中的主要效应蛋白酶.特异性阻断CatG可能通过抑制CD4+T细胞的活化来保护胰岛β细胞功能,从而延缓或阻断T1DM的发生发展.
-
组织蛋白酶G在光老化皮肤成纤维细胞中的表达及意义
目的 探讨组织蛋白酶G(cathepsin G)在光老化皮肤中的表达变化及意义.方法 培养原代人皮肤成纤维细胞,8-甲氧补骨脂素+长波紫外线(8-MOP+UVA)法体外诱导培养细胞光老化.衰老相关-β半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色证明老化诱导成功.蛋白印迹技术及反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)对比检测光老化成纤维细胞及正常成纤维细胞组织蛋白酶G蛋白及基因表达.结果 Western印迹法结果 示光老化诱导组组织蛋白酶G表达上调为单UVA诱导组、单8-MOP孵育组及空白组的(1.70±0.028)倍.实时RT-PCR结果 示光老化细胞组织蛋白酶G mRNA表达上调为空白组的(1.42±0.09)倍(P<0.01).结论 组织蛋白酶G在光老化成纤维细胞中高表达,可能通过改变细胞外基质成分和激活基质金属蛋白酶参与皮肤光老化所致.
-
硅沉着病患者载脂蛋白A、基质金属酶-9、组织蛋白酶G的表达及临床意义
目的 探讨硅沉着病患者血清及肺组织中载脂蛋白A、基质金属酶-9、组织蛋白酶G的表达情况.方法 选择2010年2月-2016年1月广元市第一人民医院收治的80例硅沉着病患者为硅沉着病组,因胸部外伤行肺部手术治疗的39例为对照组,采用酶联免疫吸附法检测血清中载脂蛋白A(Apo)、基质金属酶-9(MMP-9)、组织蛋白酶G水平,用组织化学免疫检测肺组织中载脂蛋白A、基质金属酶-9、组织蛋白酶G表达,logistic回归性分析三者与硅沉着病的相关性.结果 硅沉着病组血清中的基质金属酶-9和组织蛋白酶G水平明显高于对照组[(140.56±20.17) vs (228.33±35.09) μg/L;(3.18±0.53) vs (7.92± 1.31) ng/ml],载脂蛋白A水平低于对照组[(203.31±29.86) vs(44.36±8.01) μg/ml],差异有统计学意义(t=21.37,11.75,9.83,P＜0.05);硅沉着病患者肺组织中基质金属酶-9和组织蛋白酶G表达呈强阳性,载脂蛋白A在正常肺组织中高表达,在硅沉着病患者中低表达,而正常肺组织中两者几乎不表达.Logistic回归性分析提示,载脂蛋白A、基质金属酶-9和组织蛋白酶G升高均是硅沉着病的危险因素(P＜0.05).结论 载脂蛋白A、基质金属酶-9、组织蛋白酶G在硅沉着病患者肺组织中高表达,可能是硅沉着病潜在的生物学标志物.
-
组织蛋白酶L/G 对创伤性深静脉血栓模型大鼠静脉壁的影响
背景:目前,深静脉血栓的分子病因学机制及其形成的核心调控网络仍未完全阐明,对于深静脉血栓的早期诊断预测也无理想的方法.目的:研究组织蛋白酶L/G 与创伤性深静脉血栓的预测.方法:采用蚊式钳夹闭50 只SD 大鼠双侧股静脉的3 个不同部位3 s 随后予以模具制动制备大鼠创伤性深静脉血栓模型,根据股静脉血栓形成的不同阶段和生物学特征,将模型大鼠分为血栓形成前组、血栓形成组和无血栓形成组,另取10 只正常大鼠作为对照组.在相应时间点取大鼠创伤静脉,提取总RNA,经过基因芯片技术筛选差异表达基因,并进一步应用real-time PCR 进行验证.结果与结论:基因芯片杂交结果发现组织蛋白酶L/G 基因在各组间差异表达明显,其中血栓形成组高,无血栓形成组和血栓形成前组次之,均明显高于对照组(P < 0.05);real-time PCR 分析结果与基因芯片杂交分析结果相一致.说明局部静脉血管壁中组织蛋白酶L/G 表达水平升高与创伤性深静脉血栓形成有关,可作为深静脉血栓形成早期诊断、预测的候选分子标志.
-
毛首鞭形线虫丝氨酸蛋白酶抑制剂TtSerpin1对蛋白酶的抑制作用
目的 原核表达、分离纯化毛首鞭形线虫(Trichuris trichiura)丝氨酸蛋白酶抑制剂1(TtSerpin1),并观察其对蛋白酶的抑制作用. 方法 从毛首鞭形线虫成虫cDNA中扩增TtSerpin1编码序列(GenBank 登录号为MF401634),将其连接入原核表达载体,构建重组质粒pET3 2a-sumo/ TtSerpin1.将重组质粒转化入大肠埃希菌(Escherichia coli)BL21 (DE3)中,用异丙基-3-D-硫代半乳糖苷诱导TtSerpin1融合蛋白表达.表达的包涵体蛋白经变性、复性、镍亲和层析纯化、SUMO蛋白酶酶切融合标签后获得rTtSerpin1.用发色底物法检测其对人组织蛋白酶G、中性粒细胞弹性蛋白酶、蛋白酶3、纤溶酶和胰蛋白酶,猪胰蛋白酶、胰弹性蛋白酶及牛α-胰糜蛋白酶的抑制作用. 结果 成功构建了重组质粒p ET3 2a-sumo/ TtSerpin1,并在E.coli中成功表达.表达产物主要为包涵体,复性、纯化后的rTtSerpin1具有较好的蛋白酶抑制活性.1 000 nmol/L的rTtSerpin1对人组织蛋白酶G (100 nmol/L)、中性粒细胞弹性蛋白酶(10 nmol/L)、蛋白酶3(200 nmol/L),猪胰弹性蛋白酶(10 nmol/L),牛α-胰糜蛋白酶(1 nmol/L)的蛋白酶活性抑制率分别为60.89％、82.84％、21.21％、58.32％、96.98％,但对人纤溶酶、胰蛋白酶及猪胰蛋白酶抑制活性较弱.rTtSerpin1对人组织蛋白酶G及中性粒细胞弹性蛋白酶的抑制常数(Ki)分别为(949.80±91.51)、(242.70±53.41) nmol/L. 结论 rTtSerpin1对多种丝氨酸蛋白酶具有较强抑制作用.
-
中性粒细胞丝氨酸蛋白酶及其抑制剂与炎症
中性粒细胞是首先摹集到炎症部位的细胞,中性粒细胞在炎症部位释放的丝氨酸蛋白酶能参与调节炎症反应,与多种疾病的发生发展密切相关,可能成为有效的药物防治靶点.该文综述了中性粒细胞丝氨酸蛋白酶及其抑制剂对炎症的调控作用,以期为炎症性疾病的防治提供新的思路.
-
组织蛋白酶G在炎症性疾病发生发展中作用的研究进展
组织蛋白酶G(CG)是组织蛋白酶家族中的丝氨酸亚型,参与调控炎症反应.CG可通过水解活化细胞因子、加工蛋白酶激活受体的N末端细胞外结构城、切割白细胞介素6受体及补体C5a受体、加工尿激酶受体等参与慢性阻塞性肺疾病、囊肿性纤维化、急性肺损伤、急性呼吸窘迫综合征及血管性炎症等疾病的发生发展,有可能成为以上疾病的防治新靶点.
-
Cathepsin G在慢性自发性荨麻疹患者血清中的表达
目的:研究组织蛋白酶G(cathepsin G)在慢性自发性荨麻疹患者血清中的表达变化,并初步探讨其作用.方法:纳入30例就诊前未经治疗的慢性自发性荨麻疹患者,设为观察组;另纳入30 例健康体检者作为对照组.ELISA法检测两组血清中cathepsin G表达水平并进行比较.结果:对照组血清中cathepsin G浓度为(32.2±12.3) ng/mL,慢性自发性荨麻疹患者血清中cathepsin G浓度上调为(260.4±26.9) ng/mL,差异有统计学意义(t=42.26, P<0.01).结论:慢性自发性荨麻疹患者血清cathepsin G表达明显上调,其可能通过与多种细胞因子及炎症介质相互作用,参与慢性自发性荨麻疹的发病机制.
-
组织蛋白酶G在急性髓系白血病诊断及免疫治疗中的作用
组织蛋白酶G (CG)在中性粒细胞早幼粒阶段特异性升高,在多种急性髓系白血病(AML)中表达异常,是极具免疫活性的白血病相关抗原之一,为AML免疫治疗提供重要靶点,文章就CG在AML诊断及免疫治疗中的作用进行综述.
