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甘草地上部分脂溶性总黄酮抗氧化活性研究
目的：建立甘草地上部分脂溶性成分高效液相指纹图谱,采用DPPH自由基清除能力、还原力、羟基自由基清除能力评价甘草地上部分脂溶性总黄酮抗氧化活性。方法建立甘草地上部分脂溶性黄酮类成分高效液相指纹图谱,色谱条件：岛津WondaSil?-C18分析柱(4.6 mm×250 mm,5μm),乙腈-0.1%磷酸-水溶液梯度洗脱,体积流量1 mL/min,柱温35℃,检测波长190~400 nm。通过体外抗氧化活性法测定甘草地上部分脂溶性总黄酮的清除DPPH自由基能力、还原能力及清除羟基自由基能力。结果甘草地上部分脂溶性黄酮类成分有良好的清除DPPH自由基活性、清除羟基自由基能力及还原能力。结论建立的HPLC-DAD指纹图谱方法能较好的反应甘草地上部分脂溶性黄酮类成分,甘草地上部分脂溶性总黄酮有较强的抗氧化能力。
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西红花常见伪品的HPLC-DAD鉴别和掺伪量测定
目的:建立HPLC-DAD方法,一次性鉴别西红花常见伪品红花、菊花,并测定其掺伪量.方法:采用高效液相色谱法,流动相为乙腈-0.3％磷酸水;波长范围200～410 nm;羟基红花黄色素A检测波长402 nm,绿原酸检测波长327 nm;梯度洗脱.结果:通过HPLC分析,确定羟基红花黄色素A、绿原酸分别为红花、菊花的特征成分,测定样品含量,可鉴别出样品中是否掺入了红花、菊花,并确定伪品掺入量.羟基红花黄色素A 0.005～0.25 mg·mL-1,绿原酸0.001～0.05 mg·mL-1范围内线性关系良好,方法回收率高,重复性好.结论:此方法能一次性鉴别西红花常见伪品红花、菊花,并测定其掺伪量,对其它药材的相关研究也有参考价值.
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中国鼠尾草属酚酸类活性成分的分布规律研究
唇形科鼠尾草属(Salvia)植物,在全球约有1000种,中国约有84种,资源丰富且分布广泛,尤以中国西南地区为多.本属是药用植物的一个重要类群.为了深入探讨本属植物在亲缘学、化学成分及传统疗效方面的联系,我们应用HPLC-DAD法检测了分布于本属的酚酸类成分.研究表明,本属植物所含酚酸类成分相当丰富,尤其是在宽球苏组和丹参组的植物中.这两个类群中的药用植物在传统疗效方面具有活血通经、通络的功效,在民间作为"丹参"使用的植物皆来自这两组.然而我们的实验数据表明,适合作"丹参"入药的植物仅仅限制在丹参组中.同时,鼠尾草亚属的植物在传统疗效方面具有清热、凉血的倾向,这类植物是寻找抗菌、抗病毒、抗癌等药物的重要研究对象.
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降香总黄黄酮体内Ⅱ相代谢反应研究
对灌胃给予大鼠降香总黄酮后,进入体内的化学成分和Ⅱ相代谢产物进行了初步研究.采用酶水解的方法将Ⅱ相代谢产物水解为原型形式,以HPLC-DAD和HPLC-MS技术进行样品分析,采用对照品对照的方法,在水解前、后的生物样品中分别定性分析了18个黄酮类成分.结果表明大鼠灌胃降香总黄酮后,黄酮类成分在体内发生了Ⅱ相代谢反应,药物在体内同时存在原型和Ⅱ相代谢产物两种形式,Ⅱ相代谢产物又以硫酸酯结合物为主.
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气滞胃痛颗粒的高效液相特征图谱研究
目的:建立气滞胃痛颗粒及其制剂中白芍、枳壳、甘草的高效液相特征图谱分析方法.方法:采用HPLC-DAD法,以新橙皮苷为内参照物,采用依利特C18色谱柱(4.6mm×150mm,5μm),以乙腈(A)-水(B)为流动相梯度洗脱(0～45min,10％→28％A；45～50 min,28％→95％A),流速1.0mL·min-1,柱温30℃.结果:气滞胃痛颗粒特征图谱中,共标记出10个与白芍、枳壳、甘草3种药材相对应的共有峰；对16个批次的气滞胃痛颗粒进行分析,相似度＞0.90.结论:该方法简便、快速,可为气滞胃痛颗粒的质量提供更为科学、准确的控制.
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养阴通脑颗粒中主要有效部位在脑缺血大鼠体内的药物代谢动力学研究
目的:建立同时测定大鼠血浆中葛根素、阿魏酸和川芎嗪质量浓度的高效液相色谱-二极管阵列检测器(HPLC-DAD)方法,为养阴通脑颗粒药动学研究提供准确可靠的方法.方法:制备大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,再灌注同时灌胃养阴通脑颗粒4个主要有效部位后眼眶取血,血样预处理后,采用HPLC-DAD检测血样中葛根素、阿魏酸和川芎嗪的含量.结果:葛根素、阿魏酸和川芎嗪的进样质量浓度分别在(0.4000-80.0000) mg/L(R2=0.9998), (1.2000-100.0000)mg/L(R2=0.9999),0.04000-20.0000mg/L(R2=0.9990)范围内呈良好的线性关系,平均回收率均在95％-110％之间,日内、日间RSD均＜10％,稳定性符合体内药物分析要求.药动学结果显示阿魏酸入血多,保留久,T1/2时间短;葛根素表达峰时间快;川芎嗪的体内分布广.结论:一所建立的HPLC-DAD测定方法专属性强,分离度好,分析时长适宜,操作简单快速,可用于MCAO大鼠体内葛根素、阿魏酸、川芎嗪含量的同时测定及其药代动力学研究.
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黄芩中主要黄酮类成分的含量分析
目的:建立黄芩中主要黄酮类成分的高效液相色谱-二极管阵列检测器(HPLC-DAD)含量测定方法,并研究产地、生长年限、采收期、栽培和加工方法等对主要黄酮类成分含量的影响.方法:采用Thermo ODS-2 Hypersil色谱柱(4.6 min×250mm,5μm),以乙腈-0.1%磷酸水一四氢呋喃为流动相进行梯度洗脱,检测波长274 nm,流速1.00 mL·min~(-1),柱温26℃,进样量20μL.结果:6个主要黄酮,黄芩苷(1)、千层纸素A苷(2)、汉黄芩苷(3)、黄芩素(4)、汉黄芩素(5)和千层纸素A(6),分别在选定范围内线性关系良好(R~2≥0.999 3),平均加样回收率介于96.6%～103.0%,RSD均小于5.0%(n=9).结果:不同产区黄芩质量差异很大.传统道地和传统非道地黄芩药材中黄酮含量没有显著性差异,但现在道地与非道地、传统道地与现在道地黄芩药材之间化合物1,2以及6个黄酮含量之和存在较显著差异;生长年限对药材质量影响不是特别显著,但一、二年生药材中的黄酮含量稍高;春季采收比秋季采收的黄芩黄酮含量高;野生与栽培药材中的黄酮含量除化合物3,6外,其他没有显著性差异;与药材比较商品饮片中黄酮苷的含量较低,而黄酮苷元的含量则较高.结论:本法简便、准确、重现性好,可作为黄芩药材质量检测的方法.
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羊耳菊药材的HPLC指纹图谱研究
目的:建立羊耳菊药材的高效液相指纹图谱,并对共有色谱峰进行指认,为其质量控制方法提出科学依据.方法:采用HPLC-DAD检测法,Agilent Eclipse Plus C18柱(2.1 mm×150 mm,1.8 μm);流动相0.1％甲酸水-0.1％甲酸乙腈溶液梯度洗脱;柱温45℃;检测波长325 nm;流速0.3 mL·min-1.结果:对10批羊耳菊药材进行测定,标定了17个共有峰,指认了其中5个共有峰,10批羊耳菊药材的相似度均在0.95以上.结论:该方法可靠、简便,可用于羊耳菊药材的质量评价.
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不同品种枳实HPLC指纹图谱及成分含量差异性研究
采用HPLC-DAD方法建立18个批次酸橙枳实以及10个批次甜橙枳实的指纹图谱,通过对照品对照和紫外图谱指认了17个色谱峰并对其进行含量测定.色谱条件:Agilent Poroshell 120 SB-C18色谱柱(4.6 mm×100 mun,2.7 μmn),以流动相甲醇-0.1％甲酸水溶液梯度洗脱,流速0.6 mL·min-1,检测波长318 nm,柱温为30℃.采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004A)软件进行指纹图谱分析,进一步通过SIMCA-P 13.0软件对17个确认的成分含量进行小二乘法判别分析,确定区分酸橙枳实与甜橙枳实的差异性标记物.该方法具有良好的精密度、稳定性和重复性,为枳实的质量控制和评价提供依据.
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基于HPLC-DAD-Q-TOF-MS/MS的白芍和赤芍主要成分定性定量研究
该研究建立高效液相色谱串联四极杆飞行时间质谱法(HPLC-Q-TOF-MS/MS)以及HPLC-DAD法从定性定量2个方面分别探讨中药白芍饮片与赤芍饮片化学成分以及含量差异,定性采用Q-TOF-MS法,负离子模式扫描,鉴定出白芍38个成分,赤芍30个成分.定量采用HPLC-DAD法,分析14种主要成分(没食子酸、原儿茶酸、芍药苷亚硫酸酯、原儿茶醛、没食子酸甲酯、氧化芍药苷、儿茶素、芍药内酯苷、芍药苷、没食子酸乙酯、苯甲酸、五没食子酰葡萄糖、苯甲酰芍药苷、丹皮酚)的含量,在考察的浓度范围内测定的成分线性关系良好(r ＞0.999 0),回收率(n=6)均在96.0％ ～ 101.2％,RSD均小于2.78％,并且8种成分在白芍和赤芍中分布存有差异.结果表明,通过HPLC-DAD-Q-TOF-MS/MS联用技术,为鉴定白芍与赤芍的成分提供了一种快速、高效的定性、定量分析方法,为综合评价白芍与赤芍的质量提供参考.
关键词： 白芍 赤芍 HPLC-DAD HPLC-Q-TOF-MS/MS 定性定量 -
川贝母新资源太白贝母中水溶性成分的含量测定
目的:建立RP-HPLC-DAD同时测定太白贝母药材中7种核苷类活性成分(胞苷、尿苷、鸟苷、胸苷、腺苷)及碱基(尿嘧啶、腺嘌呤)含量的方法.方法:采用Zorbax SB-AqC18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),流动相为甲醇和水,梯度洗脱,流速1mL·min-1,检测波长260nm,柱温25℃.结果:尿嘧啶、胞苷、尿苷、鸟苷、胸苷、腺苷、腺嘌呤分别在0.312～37.440,1.095～65.700,1.020～61.200,1.075～64.500,0.812～48.720,1.070～64.200,0.432～25.920mg·L-1与峰面积呈良好线性关系.平均回收率为96.96%～103.5%,RSD≤3.8%.结论:太白贝母有紫外吸收的水溶性成分主要是核苷类成分,所建立方法简单、重复性好,准确可靠,可用于贝母药材中核苷类化合物的含量测定,为全面开发利用贝母药材提供进一步依据.
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HPLC-DAD同时测定柘树和构棘根与茎中4种黄酮类成分的含量
目的:分析比较柘树与构棘根及茎中花旗松素、柑桔素、槲皮素、山柰酚的含量,为品种鉴定与质量评价提供科学参考.方法:采用高效液相二极管阵列检测法(HPLC-DAD),色谱柱为Agilent C18(4.6 mm×150 mm,5μm),流动相为甲醇(A)-0.1％磷酸溶液梯度洗脱(0 ～ 15 min,35％ ～50％ A;15 ～30 min,50％ ～65％A),检测波长290 nm(花旗松素、柑桔素)和365 nm(槲皮素、山柰酚),柱温30℃.结果:花旗松素、槲皮素的含量柘树根明显高于构棘根,柘树茎明显高于构棘茎,种间含量差异大；柑桔素、山柰酚的含量构棘根高于柘树根,柘树茎与构棘茎含量相当,种间含量差异小,同种药用部位间含量差异大.结论:4种成分的含量在柘树和构棘及其药用部位根和茎都存在一定的差异,在临床上不可混淆使用.
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LC-MS结合HPLC-DAD对银杏二萜内酯葡胺注射液原料中黄酮类成分的限度检测方法研究
该实验采用LC-MS对银杏二萜内酯葡胺注射液原料中所含黄酮类成分的种类进行筛选,通过紫外-可见分光光度法(UV-Vis)和高效液相色谱法(HPLC-DAD)对银杏二萜内酯葡胺注射液原料中黄酮类成分限量检查灵敏度比较,发现HPLC-DAD的检测限约为UV-Vis的1/100,即HPLC-DAD检测灵敏度更高.基于LC-MS筛选结果选用槲皮素、山柰素和异鼠李素为对照品,采用Agilent Eclipse plus C18色谱柱(4.6 mm×250mm,5μm);0.4％磷酸-甲醇(50:50)为流动相,等度洗脱;流速1.0mL·min-1;检测波长360 nm.结果显示,此法专属性、精密度、重复性良好;槲皮素、山柰素和异鼠李素检测限分别为27.6,22.3,29.5 μg·L-1;平均回收率在88.3％ ～91.7％;基于10批次样品检测结果和仪器灵敏度,终确定银杏二萜内酯葡胺注射液原料中总黄酮醇苷的含量不得过2×10-5.该方法简便、快捷,可操作性好,可用于银杏二萜内酯葡胺注射液原料中黄酮类成分的限度检测.
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麻黄汤中9个有效成分的微透析体外回收率研究
在建立同时定量麻黄汤中9个有效成分(麻黄碱、伪麻黄碱、甲基麻黄碱、苦杏仁苷、甘草苷、桂皮醇、桂皮酸、桂皮醛、甘草酸)方法的基础上,测定相应的微透析探针体外回收率,为体内药代动力学研究提供依据.HPLC-DAD检测透析液中9个有效成分浓度,考察探针回收率的日内稳定性以及流速(增量法、减量法)、媒介浓度对回收率的影响.结果9个有效成分在52 min内可以达到良好的分离,当流速为1.0 μL·min-1时,测得麻黄碱、伪麻黄碱、甲基麻黄碱、苦杏仁苷、甘草苷、桂皮醇、桂皮酸、桂皮醛、甘草酸的回收率分别为(50.95 ±0.82)％,(52.74±1.13)％,(51.29±0.51)％,(32.56 ±0.84)％,(45.36±0.83)％,(70.94 ±0.99)％,(69.98±2.30)％,(71.68±0.63)％,(22.14±0.48)％,且探针能在7h内保持稳定.在相同浓度下,探针回收率随流速的增大呈指数下降,除苦杏仁苷、桂皮醛外,其余7个成分2种方法所得回收率在一定流速下相差不大.在相同流速下,桂皮醇、桂皮酸、桂皮醛回收率随浓度变化较大(9.55％～16.2％),其余6个成分变化较小(3.27％～5.71％).表明微透析法可用于麻黄汤中9个成分体外回收率的测定,当流速为2.0 μL·min-1时反透析法可作为麻黄碱、伪麻黄碱、甲基麻黄碱、甘草苷、桂皮醇、桂皮酸和甘草酸体内探针回收率的校正方法.
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藏药“蒂达”基原植物中主要有效成分的HPLC定量分析及其化学品质综合指数
“蒂达”是藏药中治疗肝胆疾病具有代表性的常用药物之一,比较藏药“蒂达”基原植物中7种有效成分的含量,并进行整合评控,为其资源利用提供了科学依据.该文采用HPLC-DAD扫描3D图谱,直接获得各环烯醚萜类、出酮及齐墩果酸的适宜吸收波长.根据结果开启210,240,265 nm多波长采集数据同时检测7种有效成分.通过分析计算,7种成分在线性范围内线性关系良好,相关系数r均达到0.999 9,平均回收率99％ ～ 101％,RSD均小于3％.对结果进行归一化与三维数据集成化,获得各种植物化学品质综合指数.上述结果表明藏药“蒂达”基原植物中绝大多数含有这7种有效成分,但种间差异较大,通过化学品质综合指数进行整合评控对质量控制有参考价值.
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HPLC-DAD光谱相关法识别利福平有关物质
建立准确识别HPLC色谱图中利福平有关物质峰的DAD光谱相关方法.采用HPLC-DAD建立已知杂质标准色谱光谱数据;将样品的色谱光谱数据与标准色谱光谱数据进行相关计算,构建光谱相关图,对杂质进行识别.用LC-MS对结果进行了验证.DAD光谱相关法在不同色谱条件下能准确识别已知杂质峰,相似系数阈值定为0.99,识别的低检出量为30 ng.结果显示该法可有效地对HPLC分析中的色谱峰进行识别,耐用性好,对峰分离度要求低,多组分同时快速定位.
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桂枝甘草龙骨牡蛎汤HPLC-DAD指纹图谱研究
目的:研究桂枝甘草龙骨牡蛎汤汤剂的HPLC-DAD指纹图谱,建立该方汤剂质量评价方法.方法:采用HPLC-DAD方法,色谱柱为Thermo Fisher Hypersil GOLD C18(250mm×4.6μm,5μm),流动相为乙赌-0.1％磷酸水梯度洗脱,流速为0.8 mL· min-1,检测波长为254 nm,柱温为25℃;以肉桂酸为参照峰,测定10批桂枝甘草龙骨牡蛎汤剂及各缺味药材阴性对照色谱图;采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》2004 A版对10批桂枝甘草龙骨牡蛎汤HPLC指纹图谱进行评价.结果:建立了该方汤剂指纹图谱;确定了9个共有峰,指认其中4个共有峰分别为:甘草苷、肉桂酸、桂皮醛、甘草酸铵;10批桂枝甘草龙骨牡蛎汤HPLC指纹图谱相似度均大于0.95.结论:该方法灵敏度高、稳定性和准确性良好,体现了桂枝甘草龙骨牡蛎汤组分的整体特征,为桂枝甘草龙骨牡蛎汤制剂质量标准的建立提供了可靠的科学依据.
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比阿培南及杂质质控HPLC分析方法的建立
建立了适用于比阿培南及其杂质质量控制的HPLC分析方法.采用Dikma Diamonsil C18(250mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,流动相为乙腈-0.1%三乙胺溶液(1:99,v/v),二极管阵列检测器检测波长为220nm.比阿培南的线性范围为(0.05-10.0)mg/mL(r2=0.999);杂质的低检出限(LOD)和低定量限(LOQ)分别为4.8 ng(S/N=3)和18.5ng(S/N=10);测定比阿培南大杂质和总杂质的日内精密度(RSD)分别为1.84%和3.37%(n=3),日间精密度(RSD)分别为4.84%和7.58%(n=9);供试品溶液在4℃放置6h稳定.利用HPLC-DAD数据,采用二维色谱光谱相关分析技术,在没有杂质对照品的情况下,实现了质控分析HPLC-UV色谱图中的色谱峰与LC-MS色谱图中的色谱峰的相互识别.质控色谱图中相对保留时间为0.528,0.743,1.062和2.817的4个色谱峰结构被确认,分别为比阿培南的水解产物和二聚体.该方法为鉴别常规HPLC-UV色谱图中的色谱峰提供了新思路.
关键词： 比阿培南 HPLC-DAD 二维色谱光谱相关分析 鉴别 杂质 -
高效液相色谱法测定北刘寄奴药材中木犀草素和毛蕊花糖苷的含量
建立了北刘寄奴药材中木犀草素和毛蕊花糖苷的反相高效液相含量测定方法.采用Agilent Zorbax SB-Aq C18column(250mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱;0.05％磷酸(A)和甲醇(B)梯度洗脱；流速1.0 mL/min;检测波长310 nm和350 nm.木犀草素和毛蕊花糖苷分别在0.0341-0.8172 mg/mL (r2=0.9999)和0.0708-2.832 mg/mL (r2=0.9999).范围内与峰面积呈良好的线性关系.平均加样回收率分别为102.7％和98.3％.15批北刘寄奴药材中木犀草素和毛蕊花糖苷的含量差异明显.本文首次报道了北刘寄奴药材中毛蕊花糖苷的含量测定方法.
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在线SPE HPLC-DAD方法测定大鼠血浆环磷酰胺浓度
建立快速简便的在线固相萃取液相(on-line SPE HPLC-DAD)分析方法,测定大鼠血浆中环磷酰胺的浓度.该方法为:将Acclaim(R) Polar Advantage Ⅱ C18保护柱(PA Ⅱ柱,10 mm×4.6 mm,5μm)作为在线SPE柱,去蛋白的血浆样品进样后,100％H2O洗脱1 min;经PA Ⅱ C18柱(150mm×4.6mm,5μm)分析,流动相为乙腈-水(40∶60,v/v),流速为1 mL/min,检测波长为195nm.经过验证发现该方法的选择性好,线性、精密度、准确度和灵敏度高,可用于临床监测环磷酰胺浓度.
