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益肾解毒方对肺腺癌骨转移裸鼠JNK/Bcl-2信号传导通路的影响
目的 探讨益肾解毒方对肺腺癌骨转移裸鼠JNK/Bcl-2信号传导通路的影响.方法 本研究在前期成功建立的裸鼠肺腺癌转移模型的基础上,运用免疫组织化学染色法检测各组JNK、Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白的表达,图像分析使用MIA 4.0图像分析软件,观察和测量显微镜400倍视野下表达的阳性物质的光密度值.结果 模型组与益肾解毒方高剂量组JNK蛋白的表达低,两者无统计学差异(P＞0.05);帕米磷酸二钠组JNK蛋白的表达高,低剂量组、中剂量组及中+西药组次之,与模型组和高剂量组相比都有统计学差异(P＜0.05);模型组Bcl-2蛋白的表达高,其次是益肾解毒方高剂量组、中剂量组、帕米磷酸二钠组,Bcl-2蛋白表达低的是低剂量组与中+西药组,与模型组比较得出,各实验组Bcl-2蛋白表达显著降低,差异有统计学意义(P＜0.05);模型组Bax蛋白表达低,与其他实验组比较,差异有统计学意义(P＜0.05),中+西药组Bax蛋白表达高,其次是帕米磷酸二钠组、低剂量组、高剂量组、中剂量组;益肾解毒方高剂量组与中剂量组比较,差异无统计学意义(P＞0.05);益肾解毒方低剂量组Caspase-3蛋白表达高,其次是中剂量组、中+西药组、帕米磷酸二钠组,益肾解毒方高剂量组和模型组Caspase-3蛋白表达低;与模型组相比,除高剂量组外其余各实验组均有统计学差异(P＜0.05).结论 肺腺癌骨转移与JNK/Bcl-2信号传导通路密切相关.本实验结果表明益肾解毒方对该信号通路上的关键分子JNK、Bcl-2、Bax及Caspase-3蛋白有明显的调控作用,证实了这可能是其促进肿瘤细胞凋亡的关键环节,为中医药临床有效防治恶性肿瘤提供了一定的理论依据.
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大豆异黄酮对阿尔茨海默病大鼠海马RAGE介导的信号转导通路的影响
目的 观察大豆异黄酮( soybean isoflavones)对阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease,AD)大鼠高级糖化终产物受体(receptor for advanced glycation end products,RAGE)介导的信号转导系统的影响.方法 采用β淀粉样蛋白25 - 35片段(amyloid β25-35,Aβ25 -35)双侧海马注射建立AD大鼠模型,60只大鼠随机分为模型组、大豆异黄酮高剂量组[30 mg/( kg·d)]、大豆异黄酮低剂量组[10 mg/(kg·d)]、雌激素组[0.4 mg/(kg·d)]及假手术组,每组12只.大豆异黄酮高、低剂量组和雌激素组造模后3天灌胃给药(2 mL/只),模型组与假手术组给予等体积的0.5％羧甲基纤维素钠(CMC-Na)灌胃,连续21天.酶联免疫吸附法观察各组大鼠海马组织RAGE、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)的含量.分光光度法检测大鼠海马组织天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(cysteine-containing aspartate-specific protease-3,Caspase-3)活性.免疫组织化学法观察大鼠海马组织磷酸化细胞外信号调节激酶1/2( phosphorylation extracellular signal-regulated kinase1/2,P-ERK1/2)的表达.结果 与模型组比较,大豆异黄酮可显著降低AD大鼠海马RAGE蛋白、IL-6含量、Caspase-3活性及ERK1/2蛋白磷酸化水平(P＜0.01).结论 大豆异黄酮对AD大鼠海马组织RAGE介导的炎症信号通路具有下调作用,减弱炎症反应,降低Aβ的神经毒性,抵抗海马神经元凋亡.
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微囊藻毒素-LR对中国仓鼠卵巢细胞凋亡的影响
目的 研究微囊藻毒素-LR(MC-LR)致中国仓鼠卵巢(CHO)细胞的凋亡作用.方法 调整CHO细胞密度约为1×105/ml,分别用终浓度为0(对照)、1、5、10、15 μg/ml的MC-LR染毒24 h后,采用噻唑兰(MTT),法测细胞活性,计算半致死效应浓度(EC50).分别用终浓度为0(对照)、2.5 μg/ml(1/4 EC50)、5μg/ml(1/2 EC50)、10 μg/ml(EC50)的MC-LR染毒24 h后,测定活性氧(ROS)含量、线粒体膜电位、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)的活力和细胞凋亡率.结果 与对照组相比,各浓度MC-LR染毒组CHO细胞内ROS含量、caspase-3活力和细胞凋亡率均较高,线粒体膜电位降低,差异均有统计学意义(P＜0.05)；且随着MC-LR染毒浓度的升高,CHO细胞内ROS含量、caspase-3活力和细胞凋亡率均呈上升趋势,线粒体膜电位呈下降趋势.结论 MC-LR暴露可诱导体外培养的CHO细胞发生凋亡.
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甲泼尼龙和纳洛酮对大鼠肺缺血/再灌注损伤的保护作用研究
目的 研究甲泼尼龙、纳洛酮在大鼠肺缺血/再灌注(I/R)损伤中的作用,并探讨其可能机制.方法 雄性SD大鼠70只,随机均分为假手术组(sham组)、I/R组、甲泼尼龙组(MP组)、纳洛酮组(Na组)、甲泼尼龙联合纳洛酮组(MP+Na组).术后3 h和6 h取标本,用钙结合蛋白Ⅴ-碘化丙啶(AnnexinⅤ-PI)双染法、流式细胞仪检测肺组织凋亡细胞并计算凋亡率;用免疫组化及图像分析法观察肺脏核转录因子-κB抑制因子-α(IκB-α)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)的表达;计算肺湿/干重(W/D)比值;苏木素-伊红(HE)染色,光镜下观察肺组织病理学变化,电镜下观察肺脏超微结构的改变.结果 ①6 h MP组较I/R组肺脏IκB-α的表达有所增加,差异有统计学意义(P＜0.01);3 h和6 h Na组较I/R组肺组织caspase-3表达明显减少,差异有统计学意义(P均＜0.05);MP组和Na组3 h和6 h的细胞凋亡率较I/R组均有所减少(P均＜0.01),肺组织的病理形态及超微结构损害均有所减轻.②MP+Na组较MP组、Na组、I/R组肺组织凋亡率、caspase-3表达均有不同程度的减少(P＜0.05或P＜0.01),肺脏IκB-α的表达较6 h Na组显著增多(P＜0.05),肺组织的病理形态及超微结构损害明显减轻,6 h较3 h减轻更明显.结论 甲泼尼龙、纳洛酮分别通过抗炎、减少caspase-3的激活两个不同途径抑制凋亡的发生,早期联合应用有协同效应,更能有效抑制肺组织I/R损伤凋亡的发生,对肺组织有明显的保护作用.
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高频振荡通气联合肺表面活性物质对吸入性损伤肺组织天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3和p73的影响
目的 探讨高频振荡通气(HFOV)联合肺表面活性物质(PS)对吸人性损伤兔肺组织细胞凋亡的影响.方法 采用兔蒸汽吸人性损伤模型,将32只兔按不同通气治疗方式分为常规控制机械通气(CMV)组、HFOV组、CMV+PS组及HFOV+PS组4组,每组8只.治疗4 h后处死动物,取右肺中叶组织,分别检测天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)、p73的含量及其mRNA表达水平.结果 ①HFOV组和HFOV+PS组肺组织caspase-3和p73的含量分别较CMV组和CMV+PS组明显减少,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);加入外源性PS后,CMV+PS组和HFOV+PS组的caspase-3和p73含量也较相应未加入组明显减少,差异也有统计学意义(P均<0.05).②HFOV组和HFOV+PS组caspase-3 mRNA和p73 mRNA表达分别较CMV组和CMV+PS组明显减少,差异有统计学意义(P均<0.01);加入外源性PS后,CMV+PS组和HFOV+PS组肺组织caspase-3 mRNA和p73 mRNA的表达也明显低于相应未加入组,差异也有统计学意义(P均<0.05).结论 与CMV或CMV+PS比较,HFOV或HFOV+PS能减少吸入性损伤肺组织细胞中caspase-3、p73的含量及其mRNA表达,从而可能减少通气肺的肺细胞凋亡.
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银杏叶提取物对惊厥性脑损伤大鼠天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3表达的影响及意义
目的 探讨天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)在惊厥性脑损伤发病机制中的作用及银杏叶提取物对脑损伤的可能保护机制.方法 将20日龄健康SD大鼠108只随机分为3组:对照组、惊厥组及银杏叶提取物干预组.通过三氟乙醚反复吸入制备大鼠惊厥模型.干预组在每次惊厥后立即腹腔注射银杏叶提取物50 mg/kg,12 h后再重复注射1次,其他两组注射等量生理盐水.各组动物于末次惊厥后1、3和7 d采用免疫组化法检测海马组织中caspase-3蛋白表达,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测海马组织中caspase-3 mRNA表达.结果 末次惊厥后1、3和7 d海马caspase-3的蛋白及mRNA表达均较对照组显著升高,3 d时达峰值(P均＜0.01).银杏叶提取物干预组各时间点海马caspase-3的蛋白及mRNA表达均较惊厥组显著下调(P＜0.05或P＜0.01).结论 大鼠反复惊厥后海马caspase-3表达显著增高,提示caspase-3参与了惊厥性脑损伤的病理过程.银杏叶提取物能下调惊厥后海马caspase-3的异常表达,提示其对惊厥性脑损伤的保护机制可能与抑制海马caspase-3异常表达有关.
关键词： 天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3 银杏叶提取物 脑损伤 惊厥 大鼠 -
金纳多注射液对脑缺血/再灌注后caspase-3和caspase-9表达的影响
目的:观察金纳多注射液对大鼠局灶性脑缺血/再灌注后天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)和caspase-9蛋白及mRNA表达的影响.方法:40只Wistar雄性大鼠被随机分为假手术组、缺血组、金纳多小剂量治疗组及金纳多大剂量治疗组,每组10只.采用线栓法制备大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)模型.应用原位末端缺刻标记法(TUNEL)检测神经元凋亡;应用免疫组化检测caspase-3和caspase-9的蛋白表达;应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测caspase-3和caspase-9的mRNA表达.结果:与假手术组比较,缺血组、金纳多小剂量治疗组和大剂量治疗组凋亡细胞数以及caspase-3和caspase-9的蛋白及mRNA表达均显著增高(P均＜0.01);与缺血组比较,金纳多小剂量治疗组和大剂量治疗组凋亡细胞数、caspase-3和caspase-9的蛋白及mRNA表达均显著减少(P均＜0.01);与金纳多小剂量治疗组比较,金纳多大剂量治疗组凋亡细胞数、caspase-3和caspase-9的蛋白及mRNA表达均明显减少(P均＜0.05).结论:金纳多注射液能显著减少脑缺血/再灌注后神经元凋亡以及caspase-3、caspase-9的mRNA和蛋白表达,疗效表现为剂量依赖性.
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葛根素对缺血/再灌注损伤兔肺组织天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3变化的影响
目的 探讨天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)在兔肺缺血/再灌注损伤(LIRI)中的变化及葛根素的保护作用机制.方法 健康日本大耳白兔30只,随机分为对照组、缺血/再灌注(I/R)组及葛根素组,每组10只.复制单侧LIRI模型.对比观察各组血清超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量、一氧化氮(NO)含量、肺湿/干重(W/D)比值及肺泡损伤指数(IQA);用原位末端缺刻标记法(TUNEL)测定肺组织细胞凋亡指数(AI);用免疫组化及原位杂交技术分别检测肺组织caspase-3蛋白和mRNA表达.结果 与对照组比较,I/R组血清SOD活性和NO含量降低,MDA含量、W/D比值、IQA、AI值及caspase-3表达均上调(P均＜0.01).与I/R组比较,葛根素组SOD、NO显著升高,MDA、W/D比值、IQA、AI值及caspase-3表达明显下降(P均＜0.01).相关分析显示:AI值与SOD、NO呈明显负相关,与MDA、caspase-3 mRNA及caspase-3蛋白呈明显正相关(P均＜0.01);caspase-3 mRNA与SOD、NO呈明显负相关,与MDA含量呈明显正相关(P均＜0.01).结论 葛根素可通过提高体内NO水平、降低氧自由基水平、减轻脂质过氧化反应,下调caspase-3的mRNA和蛋白表达,从而抑制肺再灌注后肺组织细胞的异常凋亡,减轻LIRI.
关键词： 缺血/再灌注损伤 肺 凋亡 天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3 葛根素 -
乳腺浸润性导管癌中Paxillin和Caspase-3蛋白的表达及临床意义
目的:探讨桩蛋白(Paxillin)和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)在乳腺浸润性导管癌(IDC)中的表达及其与乳腺浸润性导管癌(IDC)患者临床病理因素的关系.方法:采用免疫组化检测术中切除的原发性乳腺浸润性导管癌(IDC)和距癌灶约5 cm处正常乳腺组织中Paxillin和Caspase-3的表达,统计学分析两者间及其与乳腺浸润性导管癌(IDC)病理特征的关系.结果:Paxillin在IDC组的表达高于正常乳腺组织组,差异具有统计学意义(P<0.05);Caspase-3在IDC组的表达低于正常乳腺组织组,差异具有统计学意义(P<0.05).在IDC组中,Paxillin的表达与Her-2状态相关,2种蛋白的表达与乳腺IDC的淋巴结转移及组织学分级相关,2种蛋白在IDC中的表达呈负相关(r=-0.32,P=0.013).结论:Paxillin和Caspase-3的的异常表达在乳腺浸润性导管癌(IDC)的发生、发展中可能起着重要的作用,且与乳腺浸润性导管癌(IDC)的浸润转移密切相关.
关键词： 乳腺肿 瘤桩蛋白 天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3 -
丹参7种水溶性有效成分配伍对脑缺血再灌注所致记忆损伤模型小鼠的影响
目的:探讨前期研究筛选出的丹参七种水溶性有效成分优配伍组合样品A2、B4、Cll对脑缺血再灌注(ischemia reperfusion)小鼠学习记忆的保护作用.方法:采用改进的Himori法暂时性阻断两侧颈总动脉制备小鼠脑缺血再灌注损伤模型,应用水迷宫实验,观察配伍组合样品对脑缺血再灌注小鼠记忆功能的保护作用,检测小鼠断头耐缺氧存活时间,脑组织中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)、乙酰胆碱酯酶(acetylcholine esterase,AChE)活力及丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量.免疫组织化学方法检测小鼠海马神经元凋亡相关天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(cysteine-asparate protease-3,caspase-3)和神经生长因子(nerve growth factor,NGF)的表达.结果:丹参7种水溶性有效成分配伍组合样品B4、C11可明显改善小鼠脑缺血再灌注所致的记忆障碍,增强耐缺氧能力,提高脑内SOD,CAT活性,降低AChE活性和MDA含量;抑制凋亡蛋白caspase-3表达,上调NGF表达.其中以B4 (2.8 μmol·L-1)、C11(30.0 μmol·L-1)组作用为明显(P＜0.01),A2各个剂量组效果不显著(P＞0.05).结论:丹参7种水溶性有效成分配伍组合样品B4、C11对脑缺血再灌注损伤小鼠记忆功能有保护作用,其机制可能通过提高清除脑内自由基能力,抑制小鼠神经细胞凋亡,促进神经再生,来减轻脑缺血再灌注引起的脑组织损伤.
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VEGF及Caspase-3在早产儿脑室周围-脑室内出血后继发脑损伤中的作用
目的：探讨血管内皮生长因子(VEGF)和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)是否参与早产儿脑室周围-脑室内出血(PV-IVH)后的继发性脑损伤。方法采用丙三醇腹腔注射法(Georgiadis P)制作早产兔PV-IVH模型,分为PV-IVH模型组(18只)及对照组(18只)。两组于处理后24、48、72 h 3个时间段分别检测VEGF、Caspase-3阳性细胞、凋亡细胞表达。结果 PV-IVH模型组VEGF阳性细胞数在不同时相均明显多于对照组,PV-IVH模型组VEGF平均阳性细胞表达率在处理后24、48、72 h均高于对照组(P<0．05,P<0．01),组内48、72 h均低于24 h (P<0．01)、72 h低于48 h(P<0．05),对照组VEGF平均阳性细胞表达率在处理后24、48、72 h两两比较,差异无统计学意义(P>0．05)；PV-IVH模型组Caspase-3阳性细胞数在不同时相均明显多于对照组,PV-IVH模型组Caspase-3平均阳性细胞表达率在处理后24、48、72 h均高于对照组(P<0．01),组内48 h高于24 h(P<0．01)、72 h低于24、48 h (P<0．01),对照组Caspase-3阳性细胞的表达率在处理后24、48、72 h两两比较,差异无统计学意义(P >0．05)；PV-IVH模型组凋亡细胞数在处理后24、48 h明显多于对照组,处理后72 h凋亡细胞数与对照组比较无明显变化, PV-IVH模型组凋亡细胞平均表达率在处理后24、48 h均较高于对照组(P<0．01),处理后72 h与对照组相比,差异无统计学意义(P>0．05),组内48 h高于24、72 h(P<0．01)、72 h低于24 h(P<0．01),对照组脑组织凋亡细胞的平均表达率在处理后24、48、72 h两两比较,差异无统计学意义(P>0．05)。结论 PV-IVH后,VEGF阳性细胞数目显著增加,提示VEGF参与了PV-IVH后继发性脑损伤,可能发挥了脑保护作用；Caspase-3阳性细胞、凋亡细胞数目明显增多,且Caspase-3阳性细胞与凋亡细胞表达趋势一致,提示Caspase-3参与PV-IVH后继发性脑损伤。
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Survivin、caspase-3及PCNA在卵巢上皮性肿瘤中表达的临床意义
目的 探讨凋亡调控因子Survivin、半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)及细胞增殖标记指数(PCNA)在卵巢上皮性肿瘤中表达的临床意义.方法 采用免疫组织化学技术,检测2006年1月至2006年12月哈尔滨医科大学第一临床医学院收治的40例卵巢上皮性癌、10例交界性卵巢上皮性肿瘤组织及10例卵巢良性上皮性肿瘤中Survivin、caspase-3和PCNA的蛋白表达,并结合临床病理特征进行分析.结果 Survivin、caspase-3在卵巢上皮性肿瘤中表达呈负相关;Survivin和PCNA的蛋白表达呈正相关;Survivin在卵巢上皮性癌中表达率72.5%(29/40),且表达水平高于卵巢良性上皮性肿瘤(0)和交界性卵巢上皮性肿瘤(40%)(P＜0.05).caspase-3在卵巢上皮性癌中表达率0.5%(2/40),且表达水平远远低于卵巢良性上皮性肿瘤和交界性卵巢上皮性肿瘤(P＜0.01).结论 Survivin可能抑制caspase-3在卵巢癌中表达,导致卵巢癌细胞增殖,凋亡受阻,肿瘤形成;Survivin基因的表达可能发生在卵巢癌恶性转化的早期;Survivin的表达与瘤细胞分化、增殖密切相关,并且其高表达可能会作为预后不良的标志;caspase-3在卵巢癌中极低表达,有望成为卵巢癌良恶鉴别新的指标.
关键词： 生存素 天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3 细胞增殖标记指数 卵巢癌 -
TNF-α、Caspase-3在大鼠脊髓损伤后神经细胞凋亡中相关性研究
目的 探讨大鼠脊髓损伤后肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)在神经细胞凋亡中的动态表达,验证TNF-α和Caspase-3之间的相关性.方法 将70只成年健康SD大鼠按Nystrom法建立大鼠脊髓(T8、T9)急性压迫损伤模型,HE染色观察脊髓组织病理学变化;免疫组化染色测定各时间点TNF-α、Caspase-3的表达变化;原位末端脱氧核糖核酸转移酶介导的脱氧尿苷三磷酸(dUTP)标记法(TUNEL法)检测神经细胞的凋亡水平;通过Western blot法检测大鼠脊髓中TNF-α、Caspase-3蛋白的表达水平.结果 正常大鼠脊髓神经细胞TNF-α、Caspase-3的阳性细胞表达率较少;脊髓损伤后8h,脊髓神经细胞中TNF-α、Caspase-3的阳性表达率明显增多,分别为(24.13％±3.02％)及(40.79％±3.43％),1d达高峰,分别为(51.36％±4.26％)及(70.78％±5.97％),3d表达减弱,分别为(20.24％±2.93％)及(37.71％±2.88％),与正常大鼠比较,差异有统计学意义(P＜0.01).TUNEL阳性细胞率在大鼠脊髓损伤后8h明显增多(39.81％±2.27％),1d达高峰(71.58％±3.87％),3d表达减弱(40.55％±2.36％),与正常大鼠比较,差异均有统计学意义(P＜0.01).大鼠脊髓损伤后1d,与损伤组比较,抑制剂组TNF-α、Caspase-3、TUNEL阳性细胞率明显减少,差异有统计学意义(P＜0.01).造模后7d,与空白对照组比较,损伤组TNF-α、Caspase-3蛋白的表达上升;与损伤组比较,抑制剂组TNF-α、Caspase-3蛋白的表达下降,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 脊髓损伤后TNF-α、Caspase-3的表达增强,TNF-α抑制剂使Caspase-3表达减弱,且其参与了脊髓损伤细胞凋亡的调节.
关键词： 脊髓损伤 细胞凋亡 肿瘤坏死因子-α 天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3 -
PPAR-γ受体激活对百草枯中毒致大鼠急性肺损伤的保护作用
目的 研究PPAR-γ受体激活对百草枯中毒致大鼠急性肺损伤的保护作用.方法 48只SD雄性大鼠随机平均分成3组,A组(百草枯中毒组):按照20 mg/kg剂量腹腔注射;B组(低剂量PPAR-γ受体激动剂罗格列酮预处理组):在给予百草枯腹腔注射前1h腹腔注射3 mg/kg罗格列酮;C组(高剂量PPAR-γ受体激动剂罗格列酮预处理组):在给予百草枯腹腔注射前1h腹腔注射10 mg/kg罗格列酮;D组(对照组):1 mL生理盐水腹腔注射.在注射百草枯后24 h和72 h时,每组取出6只,收集血清和肺组织标本.采用Elisa方法检测血清中IL-1β和TNF-α含量测定,行组织切片HE染色进行肺损伤评分,利用Westem blot方法检测肺组织中caspase-3和AP-1蛋白表达水平,采用免疫组化方法检测caspase-3蛋白在肺组织中的表达.结果 大鼠百草枯中毒后血清炎性细胞因子IL-1β和TNF-α含量明显增加.肺湿重/干重比以及肺损伤评分明显增加.罗格列酮预处理组可以减轻肺组织损伤程度,降低血清中IL-1β和TNF-α含量,减少肺组织中caspase-3和AP-1蛋白的表达.结论 应用PPAR-γ激动剂罗格列酮可以抑制百草枯中毒大鼠肺组织中caspase-3和AP-1蛋白表达,抑制炎症反应和凋亡,对百草枯中毒导致急性肺损伤产生保护作用.
关键词： 百草枯 急性肺损伤 天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3 激活蛋白-1 -
不同艾灸预处理时间对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌细胞中HIF-1α、Bcl-2及Caspase-3表达的影响
目的:通过观察不同艾灸预处理时间对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌细胞中低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3) 蛋白和基因表达的变化,探讨艾灸预处理对MIRI预防保护机制.方法:将40只大鼠分为正常组、模型组、艾灸预处理5天组、艾灸预处理10天组.取"内关"穴行艾灸预处理5 d和10 d后,采用冠脉结扎法建立MIRI模型.运用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)技术以及Western blot方法检测大鼠心肌细胞中Bcl-2、HIF-1α及Caspase-3蛋白及基因表达.结果:与正常组比较,模型组HIF-1α和Caspase-3蛋白及mRNA表达均高于正常水平(P<0.01),Bcl-2蛋白及mRNA表达低于正常水平(P<0.01).与模型组比较,艾灸预处理组HIF-1α蛋白及mRNA表达降低(P<0.01),Bcl-2蛋白及mRNA表达增高(P<0.01),Caspase-3蛋白及mRNA表达下降(P<0.01 or P<0.05).与5天组比较,艾灸预处理10天组HIF-1α mRNA表达明显降低(P<0.05),Bcl-2蛋白显著增高(P<0.05),Caspase-3蛋白及mRNA表达显著下降(P<0.01).结论:艾灸预处理可通过降低MIRI大鼠心肌细胞中HIF-1α、Caspase-3的含量,增加心肌细胞中Bcl-2的含量,改善心肌缺血缺氧状态以及抑制心肌细胞凋亡,对损伤心肌细胞起到预防保护作用.其中艾灸预处理10天对心肌细胞保护作用优于5天.
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糖尿病大鼠血蛋白激酶C和骨骼肌Bax/B细胞淋巴瘤-2、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3变化及其意义
目的:探讨糖尿病大鼠血蛋白激酶C(PKC)和骨骼肌Bax/Bcl-2、Caspase3变化及意义.方法:建立糖尿病大鼠模型,16只SD大鼠随机分成正常对照组和糖尿病组,采用ELISA法测定血PKC值,取后肢腓肠肌HE染色后行组织学观察,并用免疫组化方法测定Bax、Bcl2和Caspase3值.结果:糖尿病组大鼠骨骼肌普遍萎缩,肌纤维萎缩变细,纤维变性、水肿,部分区域坏死,纤维断裂,肌丝走行紊乱,核固缩,横纹模糊消失,间质脂肪组织略增生.糖尿病组和正常对照组大鼠的血PKC值分别为110.60±5.94 ng·mL1和74.72±7.19 ng·mL-1,骨骼肌Bax值分别为26 311±3 698.30μm2和16 764±6 116.10 μm2,Bcl2值分别为18 573±8 529.90μm2和35 533±485.52μm2,Caspase3值为32 419±3 201.50 μm2和12 123±1 919.60 μm2.糖尿病大鼠血中PKC值较正常对照组显著升高,糖尿病组肌肉中Caspase3及Bax值显著升高,而Bcl2值明显下降,Bax/Bcl2值升高,两组间比较均有显著差异.结论:氧化应激中的PKC途径及细胞凋亡通路共同参与了糖尿病骨骼肌病变的发生,可能是糖尿病骨骼肌病变的重要发病机制之一.
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组织蛋白酶B抑制剂对小鼠急性肝功能衰竭的保护作用及机制
目的 探讨组织蛋白酶B抑制剂对小鼠急性肝功能衰竭的保护作用及机制.方法 将雄性昆明种小鼠45只分为对照组、模型组和保护组,每组各15只.模型组和保护组一次性腹腔注射脂多糖/D-氨基半乳糖(LPS/D-GalN),保护组于造模前30 min予组织蛋白酶B抑制剂(CA-074me)腹腔注射,而模型组、对照组分别注射同等体积的0.5％氯化钠溶液作为对照,给药后6h分别取血清、肝组织标本.检测肝功能变化及凝血酶原时间(PT),观察肝脏病理改变,末端转移酶标记技术(TUNEL)检测肝细胞凋亡,免疫组织化学分析细胞色素c表达,RT-PCR检测肝组织中天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)的表达.另取75只小鼠按上述方法分组处理,每组25只,比较各组小鼠24 h存活率.统计学处理采用f检验和x2检验.结果 保护组小鼠24 h存活率明显高于模型组分别为76％(19/25)和36％ (9/25)(x2=8.12,P＜0.05)；保护组小鼠血清ALT[(568.50±45.68)U/L比(1394.55±78.58) U/L]、AST[(755.16±51.14) U/L比(1 488.72±64.62) U/L]、TBil[ (22.82±2.04)μmol/L比(52.08±4.10) μmol/L]和PT[(14.26±0.32)s比(17.40±0.30)s]水平均明显低于模型组(均P＜0.05)；与模型组比较,保护组小鼠肝组织炎性细胞浸润明显减少,肝细胞坏死程度明显减轻,凋亡指数明显下降[(18.4±2.6)％比(30.4±2.8)％,P＜0.05]；保护组小鼠肝组织中细胞色素c[(0.19±0.02)比(0.33±0.05)]和Caspase-3 [(0.18±0.03)比(0.34±0.05)]表达水平明显低于模型组(均P＜0.05).结论 CA-074me对小鼠急性肝功能衰竭具有保护作用,可减轻肝细胞炎性反应、坏死和凋亡,降低急性肝功能衰竭的病死率,其机制可能与CA-074me下调细胞色素c和Caspase-3的表达有关.
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慢性高原病患者骨髓有核红细胞凋亡及Caspase-3的表达
目的 探讨慢性高原病患者骨髓有核红细胞凋亡情况和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)的表达水平.方法 选择2016年1月至2018年3月在青海省人民医院治疗的慢性高原病20例男性患者作为观察组,选择同期同海拔地区的20例健康男性作为对照组.分离并培养骨髓单个核细胞并培养3d,采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记测定(TUNEL)法检测有核红细胞的凋亡指数,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测Caspase-3 mRNA的相对表达量.结果 培养基内细胞生长良好,圆形透亮.瑞士染色后光镜下进行观察,有核红细胞占(90.1±4.0)％.观察组凋亡指数为(7.4±2.4)％,低于对照组的(17.5±5.7)％,差异有统计学意义(P＜0.05).观察组Caspase-3 mRNA的相对表达量为(0.7±0.3),高于对照组的(0.5±0.2),差异有统计学意义(P＜0.05).观察组Caspase-3 mRNA的相对表达量与凋亡指数呈负相关(r=-0.684,P＜0.05),凋亡指数与血红蛋白浓度呈负相关(r=-0.534,P＜0.05),而Caspase-3 mRNA的相对表达量与血红蛋白浓度未见明显相关性(P＞0.05).结论 慢性高原病患者骨髓有核红细胞凋亡指数降低,Caspase-3 mRNA表达水平增高,提示Caspase-3可能参与了慢性高原病骨髓造血细胞凋亡的异常机制.
关键词： 慢性高原病 有核红细胞 骨髓 凋亡 天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3 -
血清IL-18、Caspase-3水平与新生儿缺氧缺血性脑病的相关性
目的 探讨血清白介素-18(IL-8)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)与新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)的相关性.方法 HIE患儿50例为HIE组,正常足月新生儿30例为对照组.2组新生儿均在出生后1d、3d、7d采集外周静脉血,分离血清ELISA法检测血清中IL-8、Caspase-3水平.结果 HIE组轻度患儿血清IL-18、Caspase-3水平与对照组无显著差异(P＞0.05).出生1d、3d、7d后,HIE组中度、重度患儿血清IL-18、Caspase-3水平显著高于轻度(P＜0.05),重度患儿血清IL-18、C∞pase-3水平显著高于中度(P＜0.05).出生3d时,HIE组中度、重度患儿血清IL-18、Caspase-3水平显著高于出生1d、7d(P＜0.05).HIE患者的IL-8和Caspase-3水平无相关性.结论 IL-8、Caspase-3均参与了新生儿HIE的病理生理过程,血清IL-8、Caspase-3水平与HIE病情轻重与病程变化密切相关.
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Caspase-3 mRNA在原发性肝癌中的表达及其临床意义
目的 探讨原发性肝细胞癌(HCC)中Caspase-3的表达水平及其与临床病理学特征之间的关系.方法 采用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测手术切除的肝细胞癌患者的肝癌组织标本及癌旁肝组织标本中Caspase-3 mRNA的表达.结果 肝癌组织中Caspase-3 mRNA值为(0.028±0.018),癌旁组织中的Caspase-3 mRNA值为(0.049±0.026),肝癌组织中Caspase-3 mRNA明显低于相应的癌旁肝组织中的表达(P＜0.01).结论 Caspase-3 mRNA可能成为判断肝癌预后或复发转移的指标之一.
关键词： 癌 肝细胞 天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3 实时荧光定量PCR
