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金银花种质资源遗传多样性的ISSR分析
目的：探讨金银花种质资源的遗传多样性，为其育种提供参考。方法：对采自金银花主产区的18个农家品种及野生忍冬和近缘种灰毡毛忍冬共计36个样品进行 ISSR-PCR 分析，采用NTSYS-pc软件计算金银花不同农家品种及近缘种间的Jaccard遗传相似系数，按非加权配对算术平均法（UPGMA）建立所研究类群的系统聚类图。结果：12条引物共扩增出129个条带，其中多态带为114条，占总扩增条带数的88.37%，金银花种质资源具有较丰富的遗传多样性。从聚类分析图可以看出，金银花不同样本首先聚在一起，表明是一自然类群；野生忍冬与栽培品种具有明显的遗传差异；主产区传统品系毛花系列遗传相对较稳定，而鸡爪花系列品种繁杂，遗传变异大；新品种九丰一号已独立成一稳定品种。结论：ISSR标记可以为金银花的种质资源鉴定、遗传关系分析及栽培育种提供分子生物学依据。
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利用ISSR标记分析鱼腥草种质资源的遗传多样性
利用ISSR标记对70份鱼腥草种质资源遗传多样性进行检测.结果发现,所有引物扩增产物均具多态性,22个ISSR引物共得到352条扩增DNA片段,平均每个引物可获得16条DNA片段.其中,92.3%的片段具多态性.每个多态性引物能扩增出4～58条DNA片段,平均可扩增出14.8条多态性片段,峨眉蕺菜与蕺菜中染色体数目为36的细胞型间相似程度高,其平均遗传相似系数GS值达0.618.蕺菜中,除染色体数目为54的细胞型外,其余细胞型的类间GS值几乎均是与染色体数目为36的细胞型间小.栽培蕺菜类群遗传多样性略高于野生类群.聚类分析表明,利用ISSR技术可将全部供试材料区分开,所有材料共划分为8类.根据ISSR遗传相似系数划分的类群主要同染色体数目有关,也与地理分布有一定关系.据此认为,鱼腥草种质资源在分子水平上确实存在较大遗传差异,ISSR标记可作为构建鱼腥草DNA指纹图谱的有效工具之一.鱼腥草药材道地性与环境因素有关,但更大程度上由其遗传因素所决定.本文中还讨论了蕺菜属植物的起源演化.
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新疆民族药多伞阿魏挥发油成分与遗传多样性相关性研究
目的:通过对多伞阿魏挥发油成分与其遗传多样性相关性研究,为多伞阿魏种质资源与品质评价提供重要科学依据.方法:测定不同产地多伞阿魏挥发油成分含量,采用ISSR分子标记技术和聚类分析对来自省内8个县的176份多伞阿魏样品的遗传多样性进行研究,运用灰色关联法分析多伞阿魏遗传多样性对挥发油成分含量的影响.结果:用所筛选的15条引物对多伞阿魏样品进行ISSR分析,共扩增出126条清晰的条带,其中多态性位点93个.8个居群中遗传多样性水平高的是裕民县[多态性位点百分率(PPB)=29.37％,Nei's多样性指数(H) =0.1104,Shannon's信息指数(I)=0.164 3)],低的是青河县(PPB＝19.05％,H＝0.070 5,I=0.105 4).其中沙湾县与富蕴县的多伞阿魏居群间遗传距离大(0.219 9),两者的遗传一致度低(0.802 6),表明两者之间的亲缘关系远,遗传差异较大.由H,I,PPB计算的多伞阿魏居群间的遗传多样性与人参新萜醇、龙脑、γ-桉叶油醇及挥发油成分总含量关联性较大.结论:多伞阿魏居群间的遗传变异为63.08％,居群内的遗传变异为36.92％,多伞阿魏地理分布与遗传多样性具有显著关系,多伞阿魏3个遗传多样性因子中的Nei's多样性指数对多伞阿魏挥发性成分含量有着较大的影响.
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贵州天麻遗传多态性的ISSR初步分析
目的:构建贵州天麻ISSR指纹图谱,分析彼此间的遗传关系.方法:采用ISSR分子标记技术对贵州省境内的23个野生和栽培天麻居群的样品进行了初步研究,从24个ISSR引物中筛选出4个有效引物,在供试的23个样品中共检测到32个位点,其中29个表现出多态性,占总带数的90.63%,平均每个引物扩增的DNA带数为8条.天麻的多态位点百分率(PPB)在80%和100%之间.用NTSYSpc,ver.2.02软件进行UPGMA聚类分析.结果:23个居群的相似性系数在0.13-1.00之间,同一变型的天麻样品并不严格聚为一类,不同变型天麻样品之间的遗传变异较大.结论:地理分布和生长环境的差异以及人为的选择是导致天麻形成丰富的遗传多态性的一个重要的原因.
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阿魏属4种药用植物总DNA提取方法比较
目的:对阿魏属4种药用植物基因组总DNA提取方法进行比较,建立阿魏属药用植物总DNA的佳提取方法,为下游分子生物学实验提供依据.方法:利用3种不同的DNA提取方法提取阿魏属4种药用植物的总DNA;用核酸蛋白检测仪和琼脂糖凝胶电泳方法检测所得总DNA的浓度和纯度;用ISSR分子标记的方法检测所得总DNA的质量.结果:试剂盒法提取的总DNA纯度高,质量好,能够将所有样品扩增出丰富而清晰的条带.所需时间短,操作简单.改良的CTAB法与SDS法提取的总DNA纯度及质量均次于试剂盒法,所需时间长,操作复杂.结论:试剂盒法为提取阿魏属4种药用植物总DNA的佳方法,能够直接用于下游分子生物学实验.
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道地药材江枳壳品种遗传学关系的ISSR证据
目的:分析来自江西省樟树市昌傅镇和黄岗镇的江枳壳品种臭橙、柚子橙、鸡子橙、勒橙和香橙共27个样品,研究品种间的遗传关系,探讨品种鉴别中的问题和解决途径.方法:采用ISSR分子标记技术结合实地形态观察.结果:从40个引物中筛选出20个引物,对27个样品进行扩增,共得到392个位点,其中信息位点315个.根据信息位点进行UPGMA聚类分析,构建样品遗传关系树系图.结果表明,昌傅镇的臭橙和香橙品种内样品间的遗传关系近,而不同产地的臭橙与香橙和黄岗镇的品种样品间遗传相似性低.结论:不同产地的同一枳壳品种,甚至同一产地同一品种的不同样品,虽然形态特征相似,但来源不同,存在同名异物和同物异名现象.解决品种名称混乱问题必须发挥分子标记的作用,从品种的遗传组成入手,揭示品种内和品种间的遗传变异.在众多的分子标记中,ISSR可作为有效标记之一.
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药用植物白术栽培群体的遗传多样性研究
目的:研究药材白术Atractylodes macrocephala 国内主要种质资源的遗传多样性,对白术种质遗传分化进行分析,为白术品种选育提供建议.方法:应用ISSR分子标记技术对来自浙江磐安3个和浙江、贵州、福建、湖北的4个白术栽培群体以及来自安徽的1个苍术栽培群体进行遗传多样性分析.结果:用12个ISSR引物对白术86个个体和5个苍术个体的DNA进行PCR扩增,共得到63条清晰的条带,其中55条为多态性条带,总多态性位点(PPL)为87.30%.7个白术栽培群体的多态位点(PPL)在58.73%～71.43%,平均为64.85%.其中,磐安县栽培群体光明表现出高的遗传变异(PPL=71.43%;HE=0.283 5,H0=0.426 7).根据POPGEN软件计算得到的群体之间的遗传距离进行聚类分析,结果显示浙江的各栽培群体有较近的遗传关系,与其他群体已存在遗传分化.AMOVA分析表明,自术种质遗传分化主要存在于栽培群体内个体间(90.52%).结论:我国栽培白术的种质遗传多样性较高,有利于培育高品质的药材.
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野生地黄种内遗传多样性的RAPD,ISSR分析
目的:分析野生地黄群落之间的遗传差异类型,比较RAPD和ISSR分子标记在分析地黄野生种质遗传多样性中的应用.方法:应用RAPD和ISSR分子标记技术,对55份地黄材料进行了遗传差异分析.结果:平均每条RAPD引物扩增出16.00条带,平均每条ISSR引物扩增出19.08条带,多态性位点百分率分别为89.58%和94.32%;聚类分析表明,55份地黄分成7大类群.结论:野生地黄具有丰富的遗传多样性;不同地理居群的相似性为0.63～0.98;ISSR标记比RAPD标记能检测到地黄种内更高的遗传差异性.
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参薯种质遗传多样性的ISSR分析
目的:研究参薯亲缘关系和遗传多样性.方法:收集20个样品并对其原植物进行鉴定,样品进行ISSR分析,NTSYS-pc计算遗传相似系数,UPGMA方法聚类.结果:20个样品被鉴定为参薯、褐苞薯蓣、山薯.参薯与褐苞薯蓣、山薯存在明细的遗传差异,且其种内差异十分显著,遗传相似性系数为0.672 9～0.990 7.UPGMA聚类显示参薯种内16个样品可划分为4组,对照样品原植物表型特征,可见断面颜色及块茎支根数是评价参薯种质亲缘关系的重要依据.结论:参薯种内遗传多样性水平高,研究为山药区分提供了分子生物学依据,也为参薯新品种选育奠定了基础.
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黄连种质资源遗传多样性的ISSR研究
目的:进行黄连Coptis chinensis种质资源的遗传多样性研究.方法:对32份黄连种质进行ISSR分析.利用TREEC0NW软件分析遗传相似系数,UPGMA方法聚类,构建亲缘关系系统图.结果:16条引物共得到106条扩增条带,其中有51条呈现多态性,占48.1%.遗传相似系数变化范围0.825 8～0.935 1.聚类结果显示黄连种质亲缘关系与地理分布无明显相关性,但可以看出来源于同一地区的部分黄连种质聚在一起,呈现出一定的地域性分布规律.结论:栽培黄连的遗传多样性水平较低,种质间的亲缘关系较近.
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不同种源益母草遗传关系的ISSR分析
目的:阐明不同种源益母草的遗传关系.方法:用ISSR分子标记研究来自益母草主要分布区19个种源样本.结果:从100个ISSR引物中筛选出20个条带清晰、多态性高的引物,共扩增出164条带,其中117条带为多态性位点,多态性条带比率(PP8)为71.34%,通过聚类分析,可将19个益母草种源聚为3类.结论:分子标记研究结果与益母草的地理位置、形态性状存在显著的相关性,较好地揭示了益母草种源间的遗传关系,可为益母草资源划分和良种选育提供科学依据.
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药用三角叶黄连遗传多样性的ISSR分析
目的:对野生三角叶黄连进行遗传多样性研究.方法:通过ISSR技术对8个野生三角叶黄连居群共90个个体进行遗传多样性分析.结果:用12个随机引物共扩增出128条清晰条带,其中94条具多态性,平均多态性位点比率为73.44%,Nei's基因多样性指数H=0.192 5,Shannon's多样性指数I=0.302 8,遗传分化指数G_(st)=0.7212,遗传距离和遗传一致度分别为0.085 8～0.231 4,0.804 6～0.942 5.结论:三角叶黄连种水平上具有较高的遗传多样性,遗传变异主要存在于居群问,遗传多样性与地理关系表现出明显的相关性,ISSR可以作为研究遗传多样性及遗传分化的有效标记.
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利用SRAP和ISSR标记分析川党参的遗传多样性
目的:川党参Codonopsis tangshen的遗传多样性研究.方法:对18个不同来源地的川党参种质进行SRAP(sequence-related amplified polymorphism),ISSR (inter simple sequence repeat)分析.利用TREECONW软件分析遗传相似系数,UPGMA方法构建亲缘关系系统图.结果:29条SRAP引物组合共得到329条扩增条带,其中有266条呈现多态性,占80.85%,平均遗传相似系数为0.712 1.21条ISSR引物共得到223条扩增条带,其中有166条呈现多态性,占74.44%,平均遗传相似系数为0.778 1.2种标记均表明川党参具有较高的遗传多样性.聚类结果显示川党参种质亲缘关系与地理分布相关性不显著.2种标记系统得到了相似但并不完全相同的聚类图,2种标记方法间存在显著相关性(r=0.802,P＜0.01).结论:川党参种质的遗传多样性水平较高.SRAP与ISSR标记均适用于川党参种质的遗传多样性分析.
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川产贝母种质资源遗传多样性的ISSR分析
目的:为阐明川产贝母资源间亲缘关系提供更多证据.方法:利用ISSR分子标记技术对川产10个种1变种共19份材料进行分析,采用NTSYS软件计算材料间相似系数,并用UPGMA法构建了系统树.结果:从35个ISSR引物中共筛选出11个多态性明显、反应稳定的引物,在19份供试材料DNA中共扩增出179条谱带,其中多态性条带163条,占86.8%.材料间ISSR标记遗传相似性系数(GS)在0.569～0.855.聚类分析结果显示,所有供试材料均可区分开,并聚为4组.第1组包括川贝母、甘肃贝母、长腺贝母和短丝贝母,第Ⅱ组由暗紫贝母和浓蜜贝母组成,槽鳞贝母、浙贝母、瓦布贝母和梭砂贝母聚为第Ⅲ组,湖北贝母单独为第Ⅳ组.试验结果还表明,来源于同一地区的多数川产贝母材料可分别聚在一起.结论:ISSR标记适用于川产贝母资源的遗传多样性研究,但药典收载的川贝母药材的4种基原植物种间及其与其他川产贝母属各物种间尚不能仅通过采用ISSR标记技术进行分子鉴定.此外,ISSR聚类结果同川产贝母资源的地理分布有一定关系.
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莪术不同种和居群的ISSR-PCR分析
目的:应用ISSR-PCR标记技术研究不同种及居群莪术的亲缘关系和遗传多样性.方法:对蓬莪术、广西莪术和温郁金共8个居群的37个样本进行1SSR.PCR分析,用POPGEN32软件分析其遗传相似系数及遗传距离,UPGMA方法聚类,构建亲缘关系系统图.结果:5条引物共扩增出65个位点,其中34个位点是多态性位点,多态位点百分率为52.3%.遗传相似系数变化范围0.6864～0.9997.Nei's基因多样性(H)指数为0.152 1,Shannon信息指数(I)为0.233 8,莪术种内的遗传多样性低于种间.结论:莪术居群间的遗传变异较大,而居群内部的分化程度很低.不同居群的莪术与种的特性和地理分布有一定相关性,为莪术的品种鉴定及栽培育种提供了分子生物学依据.
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灰毡毛忍冬主栽品种的遗传多样性及其亲缘关系分析
目的:研究灰毡毛忍冬主栽品种的遗传多样性及其亲缘关系.方法:以灰毡毛忍冬的5个主栽品种为试材,采用ISSR和SRAP分子标记技术,利用Treeconw软件分析处理数据,UPGMA法聚类,构建亲缘关系系统图.结果:20条ISSR引物共得到186条扩增条带,其中有103条呈现多态性,占54.63％,遗传距离0.058 4～0.230 8,平均值为0.1902.58个SRAP引物组合共得到591条扩增条带,其中有347条呈现多态性,占55.46％,遗传距离在0.1071～0.261 1,平均值为0.212 2.2种标记均表明灰毡毛忍冬主栽品种的遗传多样性仅居中等水平.2种标记系统得到了相似但并不完全相同的聚类图.结论:灰毡毛忍冬主栽品种有中等水平的遗传多样性,ISSR与SRAP标记均适用于其遗传多样性的分析.
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基于鱼腥草ISSR扩增条带信息熵的一次投料量研究
目的:从中药多态性表达的另一种形式——中药基因多态性出发,应用DNA扩增的多态性条带所携带的信息熵探讨鱼腥草一次小投料量.方法:采用ISSR分子标记对同一GAP产地鱼腥草进行多态性分析,将扩增的条带信息转化成信息熵,运用数学模型测算鱼腥草的小一次投料量.结果:将筛选出的9条ISSR引物对同一GAP产地46株鱼腥草的DNA样品进行扩增,得到134条总条带,其信息熵H=0.365 6 ～0.978 6,RSD 14.75％,一次投料量W=11.22 kg(863株).结论:从基因多态性角度测算出了鱼腥草的另一个“小投料量”,这个量与从指纹图谱角度得到的量存在较大差别,这为探索适宜临床疗效的、能真正指导临床合理用药的“一次投料量”奠定基础,终实现单味中药剂型改革.
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ISSR标记研究云南产牛奶菜属几种药用植物的亲缘关系
目的:分析常用傣药“傣百解”原植物等9种云南产牛奶菜属植物种间亲缘关系.方法:应用ISSR分子标记技术.结果:从60个ISSR引物中筛选出25个引物用于试验,共扩增出391个条带,每个引物检测到的位点为8～21,平均每个引物扩增出15.6个位点；种间遗传相似系数(CS)在0.667 5 ～0.821 0；9种牛奶菜属植物间,傣百解Marsdenia auricularis sp.nov.ined.为通光散M.tenacissima的近缘种,云南牛奶菜M.balansae与海枫屯M.officinalis间的亲缘关系近.结论:ISSR结果支持傣百解为牛奶菜属植物,且与通光散近缘,牛奶菜属多种民族药和民间药值得深入研究.
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白木香的遗传差异及ISSR分子鉴定
目的采用简单重复序列区间(ISSR)扩增技术,对不同地区白木香的遗传变异、亲缘关系及分子鉴定进行研究.方法 筛选随机引物进行ISSR扩增,通过UPGMA聚类,研究白木香各居群间的遗传关系,构建居群亲缘关系的分子系统树;利用特异性条带对白木香进行指纹分析鉴别.结果 共筛选出7条有效引物,经ISSR扩增得到80条带,平均每条引物扩增出11.4条带,其中多态性条带47条,多态性程度达58.8%,居群间遗传距离为0.073 3～0.421 3.结论 ISSR分子标记可作为白木香居群遗传多态性、居群亲缘关系和分子鉴别的有效手段;引物IS-8可以进行白木香种内和种间的鉴别.
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利用SSR、SRAP和ISSR分子标记构建首张丹参遗传连锁图谱
以2个丹参(Salvia miltiorrhiza Bge.)品系杂交得到的94株F1代植株为作图群体,利用SSR (simple sequence repeat,简单重复序列)、SRAP (sequence-related amplified polymorphism,相关序列扩增多态性标记)和ISSR (inter-simple sequence repeat,内部简单重复序列)标记进行了首张丹参遗传连锁图谱的构建.该图谱包含8个连锁群,93个标记位点,覆盖长度400.1 cm,平均图距4.3 cm;各连锁群包括2～23个标记,遗传距离3.3～132cm.该图谱为丹参相关数量性状的基因定位、分离以及克隆奠定了重要基础.
