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HPLC法测定灰毡毛忍冬炮制品中绿原酸的含量
目的 比较不同的炮制方法对灰毡毛忍冬中有效成分绿原酸含量的影响,为灰毡毛忍冬的炮制方法提供理论依据.方法 采用十八烷基键合硅胶拄,流动相为乙腈:0.5％磷酸溶液,检测波长325nm.结果 不同的炮制方法对灰毡毛忍冬中绿原酸的含量影响差异较大.结论 该方法准确、稳定、可靠,可为灰毡毛忍冬炮制提供实验依据.
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灰毡毛忍冬花蕾中绿原酸和咖啡酸的含量测定
目的:从绿原酸和咖啡酸的含量方面科学评价灰毡毛忍冬的药用价值.方法:采用高效液相色谱法比较湖南产的灰毡毛忍冬与山东省和河南省产的正品金银花的绿原酸和咖啡酸的含量.结果:湖南隆回县、溆浦县、新宁县种植的灰毡毛忍冬,河南产的密银花、山东产的济银花中绿原酸百分含量分别为3.967±0.2724、2.674±0.1408、4.514士0.0182、2.415±0.1913、2.104±0.1684;咖啡酸的百分含量分别为0.0536±0.0063、0.0424±0.0086、0.0477±0.0033、0.0447±0.0023、0.0647±0.0065.结论:毡毛忍冬花蕾中的绿原酸的含量远高于或略高于正品金银花;咖啡酸的含量接近或略高于正品金银花.
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忍冬组织培养体系的建立和优化
金银花是我国常用中药材,具清热、解毒、抗菌等功效[1].忍冬科植物忍冬Lonicera japonicaThunb.是中药材金银花的基原植物,以干燥花蕾入药.忍冬属药用植物种类很多[2],已有关于北京忍冬[3]、灰毡毛忍冬[4.5]、金花忍冬[6]组织培养方面的报道.
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灰毡毛忍冬扦插生根的解剖学特征研究
目的:研究灰毡毛忍冬枝条扦插繁殖中不定根的发育过程,从解剖学角度探明灰毡毛忍冬枝条生根部位以及愈伤组织与发根的关系.方法:采用石蜡切片法,定期取样研究灰毡毛忍冬插条扦插前和扦插后解剖结构变化过程.结果:灰毡毛忍冬插条内无潜伏根原基,不定根原基是由维管束的边缘柬中形成层和髓射线接触部位的薄壁细胞分裂分化形成,不定根属于诱导根原始体型、混合生根型.愈伤组织与不定根的产生有一定的关系.结论:灰毡毛忍冬插条不定根由诱生根原基发育形成,不定根的发生与愈伤组织没有直接关系.
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灰毡毛忍冬褐斑病发生规律与防治方法研究
目的:通过对灰毡毛忍冬褐斑病的发生规律和药剂防治研究,为综合防治提供依据.方法:田间调查和药剂防治试验.结果:褐斑病由Cercospora sp.引起,4月上中旬开始发病、7-8月为发病盛期；发病情况与海拔、土壤有机质含量、土壤速效磷含量、土壤速效钾含量和栽培品种相关；10％苯醚甲环唑水分散粒剂1 500倍液防治效果好,50％福美双可湿性粉剂800倍液、70％代森锰锌可湿性粉剂800倍液也具有较好防治效果.结论:适当的农业防治和化学防治方法能有效防治灰毡毛忍冬褐斑病.
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灰毡毛忍冬主栽品种的遗传多样性及其亲缘关系分析
目的:研究灰毡毛忍冬主栽品种的遗传多样性及其亲缘关系.方法:以灰毡毛忍冬的5个主栽品种为试材,采用ISSR和SRAP分子标记技术,利用Treeconw软件分析处理数据,UPGMA法聚类,构建亲缘关系系统图.结果:20条ISSR引物共得到186条扩增条带,其中有103条呈现多态性,占54.63％,遗传距离0.058 4～0.230 8,平均值为0.1902.58个SRAP引物组合共得到591条扩增条带,其中有347条呈现多态性,占55.46％,遗传距离在0.1071～0.261 1,平均值为0.212 2.2种标记均表明灰毡毛忍冬主栽品种的遗传多样性仅居中等水平.2种标记系统得到了相似但并不完全相同的聚类图.结论:灰毡毛忍冬主栽品种有中等水平的遗传多样性,ISSR与SRAP标记均适用于其遗传多样性的分析.
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秀山县灰毡毛忍冬蚜虫及主要天敌消长规律与药剂筛选研究
目的:通过对秀山县灰毡毛忍冬蚜虫及主要天敌消长规律调查及药剂防治研究,为综合防治提供依据.方法:田间调查和药剂防治试验.结果:秀山县灰毡毛忍冬蚜虫的优势种群为胡萝卜微管蚜；无翅蚜田间消长大致分为始见期、波动期、上升期、盛期和衰退期共5个阶段；有翅蚜发生盛期滞后于无翅蚜4～7d；蜘蛛类、瓢虫类天敌对胡萝卜微管蚜种群追随显著,呈极显著相关；25％噻虫嗪水分散粒剂、70％吡虫啉水分散粒剂和20％啶虫脒可湿性粉剂对灰毡毛忍冬蚜虫防治效果较好.结论:建议秀山灰毡毛忍冬蚜虫防治时期为4月下旬—5月中旬种群上升期,可交替使用25％噻虫嗪水分散粒剂、70％吡虫啉水分散粒剂和20％啶虫脒可湿性粉剂作为防治药剂.
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灰毡毛忍冬种子萌发与幼苗生长影响因子研究
通过研究灰毡毛忍冬种子萌发与幼苗生长影响因子,旨在提高其种子繁殖效率,并为制定种子质量检验方法提供依据.观察灰毡毛忍冬果实和种子形态特征,测定种子吸水量,同时设不同湿沙层积时间、温度和发芽床处理,测定其发芽势、发芽率、发芽指数对种子萌发和幼苗生长的影响.结果表明灰毡毛忍冬种子吸水通透性无障碍,22 h后吸水量接近饱和;4℃湿沙层积处理80 d前,随着层积时间增加种子初始发芽时间缩短,发芽率和发芽势提高,层积100 d,发芽率降低;15℃下,种子发芽和幼苗生长各项指标佳,其中光照条件下的幼苗子叶宽度显著大于黑暗条件下;种子在纸上、砂上的发芽势、发芽率和发芽指数显著高于其他发芽床,且霉变率低.灰毡毛忍冬的标准发芽试验规程为:种子于4℃湿沙层积80 d,纸上或砂上发芽床,15℃恒温光照培养,首次计数为置床后第4天,末次计数为第23天,统计发芽势的时问为置床后第13天.
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灰毡毛忍冬种子质量检验方法与分级标准研究
参照《中国农作物种子检验规程》,研究扦样、净度、千粒重、真实性、水分、生活力、相对电导率、发芽等灰毡毛忍冬种子质量检验方法;对38份不同来源的种子做质量检验,采用K-均值聚类制定质量分级标准.结果表明:灰毡毛忍冬种子少试验量为7.5g,过20目筛进行净度分析,五百粒法测定千粒重,种子粉碎高恒温(130 ±2)℃烘干3h测定水分含量,0.1％TTC溶液25℃避光染色5h测定生活力,1.0g种子在25℃超纯水中浸泡12h测定相对电导率,4℃下沙藏层积80 d后置于15℃光照纸床进行发芽试验;不同来源种子按质量分为3个等级,初步制定了种子质量分级标准.生产上建议使用Ⅰ级和Ⅱ级种子.
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山银花(灰毡毛忍冬)适宜采收期研究
为了确定山银花(灰毡毛忍冬)的适宜采收期,测定不同发育时期的花蕾外观形态、产量和质量,比较一日内不同时段采摘花蕾的质量.结果表明,开花型和花蕾型灰毡毛忍冬不同发育阶段的花蕾外观形态具有较大的差异;随着花蕾发育,产量逐渐增加;开花型灰毡毛忍冬花蕾开放后(银花期、金花期)绿原酸含量极显著降低,开花前(幼蕾期、青色期、大白期)质量无显著差异;花蕾型灰毡毛忍冬黄白期灰毡毛忍冬皂苷乙显著降低,幼蕾期和青白期质量无显著差异.一日内不同时段采摘的灰毡毛忍冬绿原酸和3,5一二咖啡酰奎宁酸含量有显著差异.开花型灰毡毛忍冬的适宜采收期为大白期,采摘时段为10:00以前和18:00以后,花蕾型灰毡毛忍冬的适宜采收期为青白期,采摘时段为8:00以前和18:00以后.
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贮藏条件和时间对灰毡毛忍冬药材质量的影响
研究不同贮藏条件和时间对灰毡毛忍冬质量的影响.采用不同贮藏包装:塑料袋抽真空包装、塑料包装、编织袋包装、编织袋具内膜密封包装、纸袋包装、麻袋包装;不同贮藏方法:常温、5℃冰箱、低温-20℃冰箱、常温干燥器等进行组合共24批样品.于不同时间测定其中有效成分的变化.实验结果表明各贮藏组药材中成分含量变化与贮藏时间、贮藏条件(贮藏环境、包装方式)有关.在相同的贮藏时间下,贮藏环境(温度、湿度)对药材质量稳定性影响其关系依次为:低温-20℃左右冰箱＞5℃左右冰箱＞常温干燥器组＞常温组;包装方式对药材质量稳定性影响其关系依次为:塑料袋抽真空包装＞编织袋具内膜密封包装＞塑料袋包装＞编织袋包装＞麻袋包装＞纸袋包装.在相同的贮藏条件下,随着贮藏时间的延长,各贮藏条件组药材的成分除咖啡酸含量会逐渐增高外,其余5个有效成分的含量逐渐减少.贮藏时间对山银花的内在质量(化学成分含量)和外观色泽(生霉、生虫、变黄、变黑等)均有显著影响.从药材有效成分稳定性、药材外观色泽变化、节约贮藏成本及提高药材等级和售价等方面综合考虑,灰毡毛忍冬药材以低温(5℃)、避光(具黑色内膜)、密封贮藏不超过24个月为宜.
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灰毡毛忍冬应作为正品金银花的植物来源
金银花是一种常用中药,为忍冬科植物忍冬 Lonicera japonica Thunb.的干燥花蕾或带初开的花,能清热解毒、凉散风热.用于痈肿疔疮、喉痹、丹毒、热毒血痢、风热感冒、温病发热[1,2].忍冬科忍冬属植物全世界有200多种,我国有98种.据调查,在我国民间称"金银花"的植物有17种,均来源于忍冬科忍冬属不同种的植物[3].
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灰毡毛忍冬对小鼠免疫调节及肝损伤保护作用研究
目的 研究灰毡毛忍冬花蕾对小鼠免疫调节和肝损伤保护作用.方法 采用环磷酰胺致小鼠免疫功能低下模型结合腹腔巨噬细胞和脾淋巴细胞体外增殖实验,评价其免疫调节作用；分别用四氯化碳和酒精诱导小鼠肝损伤模型,评价其对肝损伤的保护作用.结果 灰毡毛忍冬1.6、3.2和6.4 g· kg-1均能显著提高免疫低下小鼠胸腺指数、脾指数、巨噬细胞碳廓清与吞噬指数以及腹腔巨噬细胞和脾淋巴细胞增殖能力(P＜0.01),3.2和6.4g· kg-1均能显著降低四氯化碳和酒精诱导肝损伤小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶水平和肝组织中丙二醛水平(P＜0.01),显著升高肝组织中超氧化物歧化酶水平(P＜0.01),明显减轻肝组织的病理学损害.结论 灰毡毛忍冬能显著提高环磷酰胺诱导的免疫低下小鼠免疫功能,对四氯化碳和酒精导致的小鼠肝损伤有较好的保护作用.
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金银花与山银花之鉴别
金银花为忍冬科植物忍冬(Lonicera japonica Thunb.)、红腺忍冬(L.hypoglarluca Miq.)、山银花(L.confusa Dc.)、毛花柱忍冬(L.dasystyla Rehd.)或灰毡毛忍冬(L.macranthoides hand)干燥花蕾或带初开的花,为常用中药,具有清热解毒、消痈散结、凉血止痢的功能,主治痈肿、喉痹、丹毒、热毒血痢、风热感冒、温病发热等症,应用历史悠久.
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灰毡毛忍冬的化学成分研究
灰毡毛忍冬Lonicera macranthoides Hand.-Mazz.为忍冬科忍冬属植物,具有清热解毒、抗菌消炎的功效,在中医临床及民间广泛应用于痈肿疔疮,喉痹,丹毒,热毒血痢,风热感冒,温热发病等疾病的治疗.<中国药典>2005年版一部将其作为新收载品种,与红腺忍冬、华南忍冬一同列入新增的山银花项下.国内外对其化学成分的研究相对较少.
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金银花与山银花挥发性成分GC-MS的研究
金银花和山银花均属忍冬科植物,分别收载于<中国药典>2005年一部.金银花为忍冬科植物忍冬Lonicera japonica Thunb.的干燥花蕾或初开的花,山银花为忍冬科植物灰毡毛忍冬L.macranthoides Hand.-Mazz.、红腺忍冬L.hypoglauca Miq.或华南忍冬L.confusa DC.的干燥花蕾或初开的花.
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灰毡毛忍冬花蕾中三萜皂苷类化学成分研究
目的 研究灰毡毛忍冬Lonicera macranthoides花蕾中的化学成分.方法 采用正相硅胶、ODS、Sephadex LH-20、半制备高效液相色谱等方法对灰毡毛忍冬花蕾的水提取物进行分离纯化,采用NMR、MS等波谱方法进行鉴定结构,采用MTT法研究化合物的细胞毒活性.结果 从灰毡毛忍冬花蕾中分离得到了7个三萜类化合物,分别鉴定为3-O--D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-α-L-吡喃阿拉伯糖基常春藤皂苷元28-O-β-D-吡喃葡萄糖酯苷(1)、3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖基齐墩果酸28-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖基酯苷(2)、3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-L-吡喃阿拉伯糖基常春藤皂苷元28-O-β-D-吡喃葡萄糖酯苷(3)、3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖基常春藤皂苷元28-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖基酯苷(4)、3-O-α-L-吡喃阿拉伯糖基常春藤皂苷元28-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖基酯苷(5)、3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-α-L-吡喃阿拉伯糖基常春藤皂苷元28-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖基酯苷(6)、3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖基常春藤皂苷元28-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→6)-p-D-吡喃葡萄糖基酯苷(7).结论 化合物1为新化合物,命名为灰毡毛忍冬皂苷丙;化合物2～7为首次从该植物中分离得到.细胞毒活性结果显示,化合物1、4和5对人宫颈癌HeLa细胞均有一定的抑制作用,其IC50值分别为54.3、43.9、61.2 μmol/L.
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灰毡毛忍冬花蕾的化学成分研究
目的 研究灰毡毛忍冬花蕾的化学成分.方法 应用溶剂萃取及柱色谱方法分离灰毡毛忍冬花蕾的化学成分,通过波谱技术鉴定化合物的结构.结果 从灰毡毛忍冬花蕾中分离得到7个化合物,其中1个单萜苷类成分、2个香豆素苷类成分、1个三萜皂苷类成分、3个黄酮苷类成分,分别为(2E,6E)-3,7-二甲基-8-羟基八二烯-1-O-β-D-葡萄糖苷(Ⅰ)、6-甲氧基香豆素-7-O-β-D-葡萄糖苷(东莨菪苷)(Ⅱ)、香豆素-7-O-β-D-葡萄糖苷(茵芋苷)(Ⅲ)、齐墩果酸皂苷元-28-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1-6)-O-β-D-吡喃葡萄糖酯(Ⅳ)、异鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖苷(Ⅴ)、山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖苷(Ⅵ)、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷(Ⅶ).结论 化合物Ⅰ～Ⅴ为首次从忍冬属中分得.
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灰毡毛忍冬与忍冬的主要药效学比较研究
目的 研究灰毡毛忍冬的主要药效,并与忍冬相关药效进行比较.方法 通过测定灰毡毛忍冬的小抑菌浓度(MIC)和小杀菌浓度(MBC),研究其对6种常见致病菌的抗菌作用;采用醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增加、二甲苯致小鼠耳廓肿胀、角叉菜胶致大鼠足肿胀和大鼠棉球植入致肉芽肿等实验,研究其抗炎作用；采用酵母粉致热大鼠模型,研究其解热作用；通过测定大鼠白细胞数和免疫低下小鼠免疫器官质量及碳粒廓清实验,研究其免疫作用,并与忍冬进行比较.结果 灰毡毛忍冬对6种常见致病菌具有显著的抑菌和杀菌作用,MIC为7.8～62.8 mg/mL,MBC≥250 mg/mL;灰毡毛忍冬(10 g/kg)能显著降低小鼠腹腔毛细血管通透性、大鼠足肿胀度和减少肉芽组织的增生,有抑制小鼠耳肿胀和降低发热大鼠体温的趋势,显著提高小鼠脏器指数、廓清指数(K)、吞噬指数(α),有增加大鼠白细胞数的趋势.灰毡毛忍冬与忍冬的上述药效学指标无显著差异.结论 灰毡毛忍冬具有抗菌、抗炎作用和解热的趋势,能增强动物非特异性免疫功能,作用强度与忍冬相当.
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灰毡毛忍冬MADS-box基因家族AGL15基因的克隆、生物信息学和表达分析
目的 基于前期对灰毡毛忍冬Lonicera macranthoides转录组测序结果,从灰毡毛忍冬RNA中克隆灰毡毛忍冬MADS-box基因家族蕾期延长相关基因AGL15,并对其进行生物信息学及表达分析.方法 对灰毡毛忍冬总RNA进行反转录酶链式反应(reverse transcription-PCR,RT-PCR)和cDNA末端快速扩增反应(rapid amplification of cDNA ends,RACE),获得完整的开放阅读框(ORF).运用生物信息学的方法对该序列进行同源性分析和相似性比较,预测编码蛋白,并对其进行各种理化性质分析.运用半定量PCR测得该基因在灰毡毛忍冬不同部位的表达情况.结果 获得AGL15基因,ORF长795 bp,编码264个氨基酸,与葡萄Vitis vinifera中MADS-box基因家族AGL15基因相似性高,且包含MADS和K-box的保守序列.AGL15蛋白无跨膜区域,定位于细胞质中,在灰毡毛忍冬各部位均有表达.结论 首次从灰毡毛忍冬中克隆得到可能控制蕾期延长的基因,分析了其在灰毡毛忍冬不同部位表达差异性,为灰毡毛忍冬蕾期延长研究提供参考.
