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常春藤皂苷元对肠癌SW480细胞上皮-间质转化(EMT)及侵袭的影响
目的:探讨常春藤皂苷元(HG)通过调控上皮-间质转化(EMT)途径抑制大肠癌侵袭转移的机制.方法:以肠癌细胞SW480细胞为研究对象,不同质量浓度HG干预转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的SW480细胞,作用24 h后噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力.转移小室(Transwell)实验检测细胞侵袭能力.实时荧光定量-聚合酶链式反应(qPCR)和蛋白质免疫印迹(Western blot)法分别检测EMT标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin),N-钙黏蛋白(N-cadherin),波形蛋白(Vimentin),蜗牛同源物1(果蝇)样1蛋白(Snail)及侵袭转移标志分子信号传导蛋白和转录激活物(STAT3),基质金属蛋白酶-9(MMP-9),MMP-14,伴有Kazal域的富含半胱氨酸的逆转诱导蛋白(RECK)表达变化.结果:HG可抑制TGF-β1诱导的肠癌SW480细胞增殖、干预EMT和降低侵袭能力,降低EMT标志分子N-cadherin,Vimentin,Snail及侵袭转移标志分子STAT3,MMP-9,MMP-14表达,增强E-cadherin,RECK的表达,与TGFβ1组比较均具有统计学差异(P＜0.05).结论:HG可通过抑制EMT途径影响大肠癌细胞SW480侵袭转移.
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常春藤皂苷元对胃癌细胞MGC-803增殖、黏附、侵袭和迁移能力的影响
目的:探讨常春藤皂苷元对胃癌细胞MGC-803细胞的生长、黏附、侵袭和迁移能力的影响.方法:采用MTT法、细胞黏附实验、Transwell小室侵袭实验、划痕实验检测对人胃癌细胞MGC-803的增殖、黏附、侵袭、迁移能力的影响.结果:①常春藤皂苷元有抑制人胃癌细胞MGC-803增殖的作用,与对照组比较,随着药物质量浓度的增大,其对细胞的抑制率也明显增大(P＜0.01),呈现质量浓度依赖性.②常春藤皂苷元作用人胃癌细胞MGC-803后,细胞的黏附能力明显降低(P＜0.01),随着质量浓度的增加和时间的推移,呈现抑制率递增的结果.③常春藤皂苷元作用人胃癌细胞MGC-803后,侵袭的细胞数较对照组明显减少(P＜0.01),质量浓度越高,侵袭的数量越少.④常春藤皂苷元作用人胃癌细胞MGC-803后,细胞愈合的程度有明显的分组差别,质量浓度越高,愈合度越差,表明迁移能力受到很大影响.结论:常春藤皂苷元对人胃癌细胞MGC-803的增殖具有抑制作用；常春藤皂苷元能抑制人胃癌细胞MGC-803的黏附能力、侵袭能力和迁移能力.
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HPLC测定丝瓜根药材中常春藤皂苷元的含量
目的:测定丝瓜根药材中常春藤皂苷元的含量.方法:采用HPLC,Dikma Diamonsil C18色谱柱(钻石)(4.6 mm× 250 mm,5μm),甲醇-水-冰醋酸-三乙胺(85∶15∶0.04∶0.02)为流动相,流速1 mL· min-,检测波长210 nm,柱温35℃.结果:常春藤皂苷元在0.563 2 ～5.632 μg线性关系良好(r=0.999 9),加样回收率97.49％,RSD 1.86％ (n=6),重复性RSD 1.73％ (n=6).结论:方法简便可行,重复性好,可用于丝瓜根药材的质量控制.
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HPLC-ELSD测定咽炎颗粒中齐墩果酸与常春藤皂苷元
目的:建立测定咽炎颗粒中齐墩果酸与常春藤皂苷元的高效液相色谱-蒸发光散射含量测定方法.方法:采用高效液相色谱法,Cosmosil PAQ-C18(4.6 mm×250mm,5μm)色谱柱,甲醇(A)-水(B)流动相梯度洗脱,蒸发光散射检测,流速0.9 mL· min-.结果:齐墩果酸的线性范围为1.321 ～5.285 μg(r =0.999 3),平均加样回收率为98.5％;常春藤皂苷元的线性范围为0.473 6 ～1.894 μg(r =0.999 2),平均加样回收率为100.2％.结论:该方法操作简便,结果准确可靠,可作为咽炎颗粒中齐墩果酸与常春藤皂苷元的含量测定方法.
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HPLC同时测定败酱草中常春藤皂苷元、齐墩果酸和熊果酸的含量
目的:建立高效液相色谱法同步测定败酱草败酱药材中常春藤皂苷元、齐墩果酸和熊果酸的含量.方法:采用反相高效液相色谱法,色谱柱为Ultimate C18(4.6 mm×250 mm,5μm)；以甲醇-0.2％乙酸铵水溶液为流动相,进行梯度洗脱,检测波长为210 nm,流速为1.0 mL· min-1,柱温为25℃.结果:常春藤皂苷元、齐墩果酸和熊果酸在0.026～0.26,0.082～0.82,0.079～0.79 g·L-1具有良好线性关系(r ＞0.9998),平均回收率分别为100.62％( RSD 2.01％,n=6),96.71％( RSD1.89％,n=6),97.85％( RSD 2.17％,n=6).结论:该方法灵敏度高,快速,简便,专属性强,准确和重复性好,为败酱草药材质量控制标准的建立提供科学依据.
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不同品种威灵仙药材的质量调查
对不同品种威灵仙药材进行质量调查.优化《中国药典》2010年版威灵仙含量测定项下方法,并测定威灵仙样品中常春藤皂苷元和齐墩果酸的含量.所测30批样品中仅有3批威灵仙Clematis chinensis药材中常春藤皂苷元和齐墩果酸的含量符合《中国药典》2010年版规定的标准；东北铁线莲C.manshurica药材中齐墩果酸质量分数大于0.30％,但常春藤皂苷元含量极微；棉团铁线莲C.hexapetala中未检测到常春藤皂苷元和齐墩果酸.
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川续断皂苷Ⅵ及其活性代谢物在大鼠体内的药代动力学研究
研究川续断皂苷Ⅵ(asperosaponin Ⅵ,A-Ⅵ)及其活性代谢产物常春藤皂苷元(hederagenin,M1)在大鼠体内的药代动力学、排泄特征和A-Ⅵ的大鼠血浆蛋白结合率.采用已建立的LC-MS/MS法测定大鼠血浆、胆汁、尿液和粪便中A-Ⅵ和M1浓度,计算药代动力学参数,并用平衡透析法测定大鼠血浆中A-Ⅵ的血浆蛋白结合率.大鼠以低、中、高(0.03,0.09,0.27g· kg-1)3个剂量分别单次灌胃给予A-Ⅵ后,A-Ⅵ的血药浓度-时间曲线出现双峰现象,Cmax1和Cmax2分别为(28.88±49.78)和(4.480±1.872) μg·L-1,(35.19±23.53)和(22.11±16.15)μg·L-1,(73.37±37.28)和(132.2±160.7) μg·L-1;AUC0-t分别为(43.21±37.32),(133.9±102.5),(779.6±876.9)μg·h·L-1；t1/2分别为(3.3±0.8),(3.2±2.3),(4.5±1.2)h.代谢产物M1相应的Cmax分别为(16.03±9.336),(26.41±11.95),(28.71±5.874)μg·L-1；AUC0-t分别为(105.6±73.60),(260.0±153.9),(323.1±107.9) μg·h·L-1；t1/2分别为(4.1±3.4),(4.4±2.3),(3.9±0.9)h.A-Ⅵ和M1在大鼠体内药动学特征不存在性别差异,按0.09 g·kg-1剂量多次灌胃A-Ⅵ后A-Ⅵ和M1在体内均无蓄积.灌胃A-Ⅵ后,A-Ⅵ的胆汁和尿液排泄速率-时间曲线也出现双峰现象,灌胃A-Ⅵ 6 h以后可以在大鼠粪便中检测到M1.A-Ⅵ在大鼠血浆中的平均血浆蛋白结合率为92.9％.
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常春藤皂苷元与5-氟尿嘧啶或奥沙利铂联用对人结肠癌HT-29细胞增殖的影响
目的 观察常春藤皂苷元(HG)与5-氟尿嘧啶(5-FU)或奥沙利铂(Oxa)联用对人结肠癌HT-29细胞增殖的抑制作用及可能作用机制.方法 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定HG、5-FU、Oxa单药及联合作用于指数增殖期HT-29细胞的效应;应用中效原理进行统计分析,绘制单药及联合用药对肿瘤细胞生长的影响曲线,确定联合用药时的药物效应-合用指数的关系,判定药物间的相互作用;集落形成实验检测HG、5-FU、Oxa单药及联合用药对集落形成的影响;采用RT-qPCR方法检测HG对5-FU疗效相关基因乳清酸磷酸核糖转移酶(OPRT)、胸苷酸合成酶(TS) mRNA表达及Oxa疗效相关基因切除修复交叉互补基因(ERCC1)和乳腺癌易感基因(BRCA1) mRNA表达的影响.结果 随着药物浓度增加,HG、5-FU、Oxa单药或联合用药对HT-29生长的抑制效应也增加,高浓度联合应用效应增强.HG联合5-FU或Oxa作用于HT-29细胞株可产生较好的协同效应,HG、5-FU、Oxa、HG+ 5-FU、HG+0xa各组的克隆抑制率分别为39.34％、45.37％、51.01％、70.43％、70.96％,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01).HG作用后TS mRNA下调至0.554,ERCC1 mRNA下调至0.182,BRCA1 mRNA下调至0.044,OPRT mRNA上调至1.655,与对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01). 结论 HG联合5-FU或Oxa用药对人结肠癌HT-29细胞有显著降低细胞增殖能力,增强化疗药物的疗效作用.下调HT-29细胞的TS、ER-CC1、BRCA1基因表达水平,上调OPRT基因表达水平,可能是其协同作用机制之一.
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常春藤皂苷元的抗抑郁药效学研究
目的 探讨常春藤皂苷元(HG)的抗抑郁效果,为开发新型抗抑郁药提供科学的理论依据.方法 采用皮质酮诱导PC12细胞损伤模型和经典的行为绝望动物模型(即小鼠悬尾实验和强迫游泳实验)对HG的抗抑郁活性进行初步研究,检测海马超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量,进一步确定其药效学.结果 HG能提高皮质酮损伤PC12细胞存活率.小鼠实验结果显示,急性单次给药后,与对照组相比,HG低剂量(10 mg/kg)明显缩短小鼠悬尾不动时间.连续灌胃给药2周后,在悬尾实验和强迫游泳实验中,与对照组相比,HG在不影响小鼠自主活动能力的前提下降低小鼠不动时间,其中低剂量具有显著性差异.同时,HG能提高SOD活性,显著降低MDA含量.结论 初步证实HG具有一定的抗抑郁作用,其机制可能与保护细胞及抗氧化有关.
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HPLC法测定瘤果黑种草子中常春藤皂苷元及齐墩果酸含量
目的 建立HPLC法同时测定瘤果黑种草子中常春藤皂苷元及齐墩果酸的含量.方法 色谱柱:Hypersil ODS C18(150 mm×4.6 mm,5μm)；流动相:乙腈-水-冰醋酸-三乙胺(85:15:0.04:0.02)；流速:0.5 ml/min;检测波长210 nm.结果 TLC能检出齐墩果酸、常春藤皂苷元相应的斑点；HPLC法测定常春藤皂苷元、齐墩果酸分别在22.76 ～227.6、40.28～201.4 μg/ml范围内线性关系良好,r值分别为0.9998、0.9997,平均回收率分别为94.6％、93.8％,RSD分别为1.8％、1.2％.结论 本法可用于瘤果黑种草子中皂苷的质量控制,方法简单,结果准确,灵敏度高.
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《中国药典》2010年版威灵仙不同品种常春藤皂苷元和齐墩果酸的含量探讨
目的:探讨《中国药典》2010年版中威灵仙的含量测定指标常春藤皂苷元和齐墩果酸的实用性.方法:优化《中国药典》2010年版威灵仙含量测定项下方法,并测定威灵仙中常春藤皂苷元和齐墩果酸的含量.结果:威灵仙Clematis chinensis Osbeck的药材符合《中国药典》2010年版的要求,常春藤皂苷元和齐墩果酸均大于0.30％；东北铁线莲Clematis manshurica Rup.r的药材中齐墩果酸大于0.30％,但常春藤皂苷元含量极微.结论:《中国药典》2010年版威灵仙的含量测定指标不能同时适用于威灵仙Clematis chinensis Osbeck和东北铁线莲Clematis manshurica Rupr.的质量控制,建议将两个品种含量测定指标分开制定.
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UPLC/Q-TOF-MS/MS鉴定西南银莲花中的皂苷类成分
目的 通过超高效液相色谱-飞行时间质谱(UPLC/Q-TOF-MS/MS)联用技术,对西南银莲花Anemone davidii根茎的皂苷类化学成分进行鉴定.方法 采用Welch C18色谱柱(100 mm×2.1mm,1.7 μm),以0.1％甲酸水(A)-乙腈(B)为流动相梯度洗脱进行色谱分离;质谱采用电喷雾(ESI)离子源,在负离子模式下采集数据,运行时间40.25 min,使用质谱分析软件中的目标化合物筛查法,通过保留时间、精确相对分子质量和二级质谱裂解碎片鉴定监测到的化学成分.结果 包括常春藤型皂苷及齐墩果酸型皂苷在内的52个三萜皂苷类成分得到良好的分离和鉴定,47个为该植物中首次发现,其中有9对同分异构体.结论 该方法快速、准确,为西南银莲花的化学成分鉴定提供一种新的策略.
关键词： 西南银莲花 超高效液相色谱-飞行时间质谱 三萜皂苷 齐墩果酸 常春藤皂苷元 -
灰毡毛忍冬花蕾中三萜皂苷类化学成分研究
目的 研究灰毡毛忍冬Lonicera macranthoides花蕾中的化学成分.方法 采用正相硅胶、ODS、Sephadex LH-20、半制备高效液相色谱等方法对灰毡毛忍冬花蕾的水提取物进行分离纯化,采用NMR、MS等波谱方法进行鉴定结构,采用MTT法研究化合物的细胞毒活性.结果 从灰毡毛忍冬花蕾中分离得到了7个三萜类化合物,分别鉴定为3-O--D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-α-L-吡喃阿拉伯糖基常春藤皂苷元28-O-β-D-吡喃葡萄糖酯苷(1)、3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖基齐墩果酸28-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖基酯苷(2)、3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-L-吡喃阿拉伯糖基常春藤皂苷元28-O-β-D-吡喃葡萄糖酯苷(3)、3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖基常春藤皂苷元28-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖基酯苷(4)、3-O-α-L-吡喃阿拉伯糖基常春藤皂苷元28-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖基酯苷(5)、3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-α-L-吡喃阿拉伯糖基常春藤皂苷元28-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖基酯苷(6)、3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖基常春藤皂苷元28-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→6)-p-D-吡喃葡萄糖基酯苷(7).结论 化合物1为新化合物,命名为灰毡毛忍冬皂苷丙;化合物2～7为首次从该植物中分离得到.细胞毒活性结果显示,化合物1、4和5对人宫颈癌HeLa细胞均有一定的抑制作用,其IC50值分别为54.3、43.9、61.2 μmol/L.
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黄背栎化学成分的研究
目的研究黄背栎Quercus pannosa的化学成分.方法利用硅胶、RP18、高效液相等柱色谱技术对该植物进行分离和纯化,通过波谱和光谱数据鉴定化合物的结构.结果从黄背栎95％乙醇浸出物醋酸乙酯萃取部位中分离得到8个化合物,其中4个木脂素类、4个三萜类化合物,分别鉴定为(7α,8β)-3-甲氧基-4’,7-环氧-8,3'-氧新木脂素-4,9,8’-三醇或(7β,8α)-3-甲氧基-4’,7-环氧-8,3’-氧新木脂素-4,9,8’-三醇(1)、(7α,8β)-3-甲氧基-4’,7-环氧-8,3’-氧新木脂素-4,9,9’-三醇或(7p,8α)-3-甲氧基-4’,7-环氧-8,3’-氧新木脂素-4,9,9’-三醇(2)、(+)-丁香脂素(3)、(8R,8'R)-4,4’-二羟基-3,3’-二甲氧基木脂素-7,7’-二酮(4)、熊果酸(5)、齐墩果酸(6)、马斯里酸(7)、常春藤皂苷元(8).结论化合物1为新的木脂素类化合物,命名为黄背栎三醇;其他化合物均为首次从该植物中分离得到.
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红毛七的化学成分及其抗肿瘤活性研究
目的 研究红毛七Caulophyllum robustum的化学成分及其抗肿瘤活性.方法 采用硅胶柱色谱、葡聚糖凝胶Sephadex LH-20等色谱方法进行分离纯化,根据理化性质和波谱技术鉴定化合物的结构;采用CCK-8法,对化合物进行体外抑制人非小细胞肺癌A549细胞增殖的活性筛选.结果 从红毛七根及根茎中分离出11个化合物,分别鉴定为collinsogenin (1)、常春藤皂苷元(2)、eechinoeystic acid 3-O-a-L-arabinopyranoside (3)、magnolamide (4)、木兰箭毒碱(5)、columbamine(6)、4,4'-diphenylmethane-bis(methyl) Carbamate (7)、(-)-8,8’-二甲氧基-开环异落叶松树脂酚-L-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(8)、紫花松果菊苷A(9)、2-[4-(3-hydroxy-l-propenyl)-2-methoxyphenoxy]-1,3-propanediol (10)、亚油酸甘油酯(11).结论 化合物1～2和4～11均首次从该属植物中分离得到;化合物1和2对人非小细胞肺癌A549细胞增殖具有中等强度的抑制作用.
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基于UFLC-Q-TOF/MS技术的八月札化学成分研究
目的 采用快速液相与四极杆飞行时间串联质谱(UFLC-Q-TOF/MS)联用技术分析鉴定八月札Akebiae Fructus的化学成分.方法 采用Acquity UPLC BEH C18(100 mm×2.1mm,1.7μm)色谱柱,以0.1％甲酸-乙腈和0.1％甲酸-水为流动相进行快速梯度洗脱,体积流量0.3 mL/min,柱温40℃,进样量1μL.质谱定性采用电喷雾离子源(ESI)的飞行时间质谱,负离子模式下采集数据,全扫描的质量扫描范围m/z 100～1 500.结果 依据质谱裂解规律,从八月札的甲醇提取物中共鉴定出25个三萜类成分,并对另外9个未知成分进行了结构推测.结论 UFLC-Q-TOF/MS方法能够快速、准确、全面地鉴定八月札中的多种成分,为八月札的进一步提取分离和药理作用机制研究提供依据.
关键词： 八月札 UFLC-Q-TOF/MS 三萜类 常春藤皂苷元 齐墩果烷皂苷元 -
HPLC法测定金银花中常春藤皂苷元、齐墩果酸、槲皮素、木犀草苷和绿原酸
目的 用反相高效液相色谱法,同时测定重庆武陵山区金银花药材5种成分的量.方法 采用SHIMADZUC18(250 mm×4.6 nm,5μm)色谱柱,以乙腈-0.4%磷酸水溶液为流动相,检测波长为210和350 nm,进行梯度洗脱.结果 上述5种成分分离效果较好.结论 本法简单,准确.快速,可同时测定金银花药材中5种成分的量.
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RP-RPLC法测定维吾尔药材黑种草子中常春藤皂苷元的含量
目的:建立HPLC法测定维吾尔药材黑种草子中常春藤皂苷元的含量.方法:采用AileniZorbaxCl8柱（5μm,25mm×4.6mm）；以甲醇-水-冰乙酸-三乙胺(87:13:0.04:0.02)为流动相,流速:1.0mL·min-1.检测波长210nm；柱温:30℃.结果:常春藤皂苷元的线性范围为2.00 ～ 10.00μg·mL-1(r =0.9998)；平均回收率(n=6)为99.1％.结论:本法简便,灵敏,专属性强,重复性好,可用于黑种草子的药材的含量测定,控制内在质量.
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兴安白头翁常春藤皂苷元的含量测定
[目的]建立兴安白头翁药材中常春藤皂苷元含量的测定方法.[方法]采用反相高效液相色谱法,色谱柱为BDS HYPERSIL C18色谱柱(4.6 mm×250.0 mm,5μm),流动相为乙腈∶水(85∶15),流动速度为0.5 mL/min,柱温为30℃,检测波长为210 nm.[结果]常春藤皂苷元的线性范围为1～100mg/L(r=0.9995),平均加样回收率为107.86％,RSD为0 78％.[结论]反相高效液相色谱法准确,专属性强,可作为兴安白头翁的含量测定方法.
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RP-HPLC测定分清五淋丸中齐墩果酸和常春藤皂苷元的含量
分清五淋丸收载于《中国药典》2005年版一部[1],具有清热泻火,利尿通淋之功效.现尚无含量测定方法,本实验参照《中国药典》2005年版一部相关品种项下和有关文献资料,对处方中主药木通所含的齐墩果酸和常春藤皂苷元进行了HPIC法含量测定的试验摸索,结果满意.
