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脑泰方血清和血浆蛋白质（肽）组学比较研究
目的：通过对脑泰方含药血清和含药血浆蛋白质（肽）组学的比较研究，发现脑泰方含药血清和含药血浆中的差异蛋白（肽）；以质谱分析技术确定差异蛋白的特征。从而为探索脑泰方的药效物质基础和发展中药血浆药理学方法提供科学依据。方法：取健康成年SD大鼠20只，按体重随机分为空白组、脑泰方给药组，每组10只，连续灌胃给药7天。手术前12 h禁食不禁水，末次给药后1 h，用10%水合氯醛腹腔麻醉，经颈总动脉插管取血。每只大鼠采血后分别制备血清和血浆。每组随机抽取5只大鼠的血清及血浆，采用2-DE技术进行蛋白质（肽）组学比较研究,运用300DPI扫描、PDQuest 7.3.0软件进行分析；采用ESI-MS/MS对重要差异蛋白质点进行鉴定，筛选脑泰方血清和血浆差异蛋白的特征。结果：共获得20张胶图，各胶图分别得到664个蛋白位点。其中与空白血浆组比较，脑泰方血浆样品中共识别到20个差异蛋白点，其中15个差异点表达上调，5个差异点表达下调；与空白血清组比较，脑泰方血清样品中共识别到19个差异蛋白点，其中15个差异点表达上调，4个差异点表达下调；与脑泰方血浆组比较，脑泰方血清样品中共识别到24个差异蛋白点，其中9个差异点表达上调，15个差异点表达下调。选取在脑泰方血浆组和脑泰方血清组中高表达的10个差异蛋白质点进行基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MAL-DI-TOF-MS），成功鉴定了6个蛋白，分别是：inter-alpha trypsin inhibitor, heavy chain 3、Group specific component、complement factor B、Receptor Complexed With A Heterodimeric Fc、complement factor B, isoform CRA-d、Transferrin。结论：脑泰方含药血浆、血清中明显变化的蛋白质可能与其抗凝血促纤溶作用机制相关，这些蛋白参与血管新生、炎症调控等病理生理过程，对研究脑泰方作用的可能有效靶点及其信号转导通路意义重大。
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内质网应激通路在脑泰方提取物保护局灶性缺血大鼠海马神经元中的作用
目的:缺血性脑卒中是发病率越来越高的一种临床疾病,但是有关它的治疗还缺乏十分有效的手段,此实验的目的是通过探索中药复方(脑泰方)提取物作用于脑缺血的可能机制从而为临床提供有针对性的治疗方案.方法:自备中药复方益气活血方(脑泰方)连续灌胃7d,在体制备大鼠大脑中动脉栓塞模型(MCAO),观察术后大鼠的神经行为,同时使用TTC染色观察神经元凋亡情况,RT-qPCR观察内质网应激通路相关蛋白的表达.结果:神经行为学评分反应出脑泰方(NTF)提取物可改善大鼠脑缺血后的神经行为;TTC染色显示脑泰方可明显增加MCAO后海马CA1区神经元的存活.RT-qPCR显示脑泰方能明显促进GRP78基因的表达,同时抑制CHOP基因的表达.结论:内质网应激参与了缺血导致的大鼠大脑海马神经元的损伤.益气活血法对脑缺血引发的内质网应激具有一定的干预作用,尤其是在脑缺血的早期.
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脑泰方对缺血再灌注沙鼠脑组织谷氨酸及其转运体功能的影响
目的:探讨脑泰方对脑缺血再灌注沙鼠脑组织谷氨酸及其转运体功能的影响.方法:采用沙土鼠双侧颈总动脉阻断模型.利用脑组织突触膜颗粒对3H-L-谷氨酸摄入量及高效液相色谱仪观察脑泰方对脑组织谷氨酸含量的影响.结果:模型组脑组织谷氨酸含量明显高于假手术组(P<0.01),而其转运体功能则明显低于假手术组(P<0.01);脑泰方治疗组能明显降低脑组织谷氨酸含量(P<0.01)及显著升高大脑皮层、海马、纹状体谷氨酸转运体功能(P<0.01).结论:脑泰方对缺血脑组织的保护作用是通过提高谷氨酸转运体功能以降低神经元突触中过多堆积的谷氨酸,从而减轻其兴奋性毒性.
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脑泰方对局灶性脑缺血大鼠血清MMP-9、PA及TIMP-1表达的影响
目的 研究脑泰方治疗对局灶性脑缺血大鼠血清中基质金属蛋白酶9(MMP-9),MMP-9前体纤溶酶原激活物(plasminogen activator,PA)及内源性抑制剂1(TIMP1)的作用.方法随机将SD大鼠分为假手术组、空白对照组、脑泰方低、中、高剂量组(3,9,27g/kg),marimastat(BB-2516)组 (6.25mg/kg)ig.各组大鼠预处理ig给药连续3d,每日1次,后采用大脑中动脉栓塞法(Middle cerebral artery occlusion,MCAO)行大鼠局灶性脑缺血模型制备,术后连续ig给药3d.采用Zea Longa神经学评分标准记录动物的行为活动,采用ELISA法检测血清中MMP-9、PA及TIMP1的表达.结果 脑泰方高剂量组神经学评分较空白对照组有显著降低(P＜0.05);脑泰方高、中、低剂量组血清中MMP-9、PA的表达显著降低(P＜0.05),脑泰方高、中、低剂量组TIMP1表达明显升高(P＜0.05).结论 脑泰方对局灶性脑缺血导致的血脑屏障损伤有一定保护作用.
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脑泰方对气虚血瘀型脑梗死患者血浆TXB2、6-Keto-PGF1α及血清TNF-α含量的影响
目的:研究脑泰方对气虚血瘀型脑梗死患者血清肿瘤坏死因子(TNF-α)及血浆血栓素B2(TXB2)和6-酮-前列腺素F1α(6-Keto-PGF1α)含量的影响,进一步探讨脑泰方治疗气虚血瘀型脑梗死的有效作用机制,为其临床应用提供理论依据.方法:利用放免法检测36例气虚血瘀型脑梗死患者用脑泰方前后血清TNF-α及血浆TXB2、6-Keto-PGF1α的含量,并与36例未用脑泰方的气虚血瘀型脑梗死患者进行对照.结果:用药3周后,治疗组降低血清TNF-α及血浆TXB 2含量和升高血浆6-Keto-PGF1α的含量较对照组明显(P＜0.05).结论:脑泰方治疗气虚血瘀型脑梗死的疗效机理与其具有降低患者血清中增高的TNF-α含量及调节血管内皮/血小板功能平衡有关,且优于尼莫地平.
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脑泰方对缺血再灌注损伤沙鼠大脑皮层氨基酸类神经递质含量的影响
目的:探讨脑泰方对缺血再灌注损伤沙鼠大脑皮层氨基酸类神经递质含量的影响.方法:采用沙土鼠双侧颈总动脉阻断模型.利用高效液相色谱-荧光法检测大脑皮层氨基酸含量.结果:脑泰方可显著降低沙鼠脑缺血再灌注损伤时大脑皮层兴奋性氨基酸类神经递质(EAAs)Glu、Asp含量(P＜0.01),并显著升高抑制性氨基酸类神经递质(IAAs)GABA、Gly、Tau含量(P＜0.01),提高GABA/Glu比值.结论:调节脑组织兴奋性和抑制性氨基酸类神经递质含量的平衡可能是脑泰方抗脑缺血再灌注损伤的机制之一.
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脑泰方对脑梗死大鼠Bax蛋白的影响
目的:观察脑泰方对脑梗死大鼠Bax蛋白的调节作用.方法:采用大鼠左侧大脑中动脉阻塞模型(MCA),通过免疫组织化学法观察大鼠脑组织Bax蛋白的变化.结果:脑泰方组大鼠Bax蛋白阳性数目明显减少,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.01).结论:脑泰方可能通过下调脑组织中Bax蛋白阳性数目,从而抑制脑神经细胞凋亡,达到治疗和预防脑梗死的作用.
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脑泰方干预的MCAO模型大鼠血浆差异蛋白筛选及其生物信息学分析
目的:应用蛋白质组学技术探索脑泰方干预脑梗死大鼠血浆中的特异蛋白,筛选出药物作用的关键蛋白,为明确中药治疗脑梗死的作用靶点和作用机制研究提供依据.方法:建立MCAO大鼠模型,将脑梗死+脑泰方组、脑梗死组大鼠的血浆采用2-DE技术结合质谱分析进行蛋白质的比较分析,筛选出差异蛋白,运用生物信息学技术对差异蛋白质进行功能分析.结果:(1)对“脑梗死组”血浆与“脑梗死+脑泰方组”血浆的胶图扫描结果进行比较显示:有21个显著差异蛋白点;其中“脑梗死组”血浆中的5个蛋白质(肽)在“脑梗死+脑泰方组”血浆中不存在;另外有13个蛋白质(肽)在“脑梗死+脑泰方组”血浆中比在“脑梗死组”血浆中明显减少,有3个蛋白质(肽)在“脑梗死+脑泰方组”血浆中比在“脑梗死组”血浆中明显增加.结论:通过分析发现脑泰方干预脑梗死的相关特异性蛋白,发现脑泰方可能是通过改善脑血液流变学、血管内皮细胞损伤等途径起作用,阐明中药对于脑梗死可能的治疗靶点和作用机制.
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脑泰方对SD大鼠凝血功能的影响
目的:观察脑泰方对SD大鼠凝血功能的影响.方法:将SPF级72只SD大鼠随机分6组:空白组、模型组、脑泰方低、中、高剂量组、阳性对照组;空白组、模型组按0.1 mL/(kg·d)给予生理盐水灌胃,脑泰方低、中、高剂量组按0.19 g/(kg·d)、0.39 g/(kg·d)、0.77 g/(kg·d)给予脑泰方煎液灌胃,阳性对照组按0.72 g/(kg·d)给予复方血栓通片灌胃,连续灌胃3d.末次给药1h后,开始造模取血,观察颈总动脉血栓形成时间、测定血小板聚集率及凝血四项.结果:脑泰方各剂量组可使大鼠血栓形成时间明显延长,各剂量组的出血时间、凝血酶时间、凝血酶原时间、部分凝血活酶时间均较模型组明显延长(P＜0.05),且对ADP诱导的血小板聚集有明显抑制作用.结论:脑泰方具有明显的改善微循环、抑制血栓形成作用.
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脑泰方对沙鼠脑缺血再灌注损伤保护作用的药效学研究
目的:探讨脑泰方对沙鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用.方法:采用沙土鼠双侧颈总动脉阻断模型.利用放免法测定脑组织TXB2、6-Keto-PG1a及其血清TNF-2的含量.结果 :模型组脑组织TXB2、及其血清TNF-a的含量明显高于假手术组(P＜0.01), 而6-Keto-PG1a含量则明显高于假手术组(P＜0.01);脑泰方治疗组能明显降低脑组织TXB2及其血清TNF-a的含量(P＜0.05或P＜0.01),并能显著升高脑组织6-Ke to-PG1a含量(P＜0.05),且疗效优于尼莫地平组(P＜0.05).结论:脑泰方保护缺血脑组织的作用机理可能与其调节TXA2与PGI2的相对平衡以增加脑血流量和减少TNF-α的生成,减轻TNF-α激活的炎性介质的致炎作用,促进神经功能恢复有关.脑泰方对缺血脑组织的保护作用可能是与其调节TXA2与PGI2的相对平衡和抑制TNF-a的分泌有关.
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局灶性脑缺血大鼠VEGF／Notch1信号分子的表达及脑泰方的调节作用
目的：从VEGF-Notch1信号通路观察脑泰方对局灶性脑缺血大鼠的治疗性血管新生样作用。方法将65只SD大鼠随机分为假手术组、MCAO组（模型组）、脑泰方组（NTF）、NTF＋ED（重组人血管内皮抑制素）组。线栓法制备大鼠大脑中动脉栓塞（MCAO）模型，NTF 组及NTF＋ED组分别于造模成功后24 h 灌胃NTF或灌胃NTF加腹腔注射ED，术后1、7、14、28 d 取脑，采用RT-PCR、Western 印迹方法观察血管内皮样生长因子（ VEGF）、Flk-1、Notch1的表达。结果与MCAO组比较，NTF组大鼠各时间点缺血侧脑组织VEGF、Flk-1、Notch1表达水平升高，在第14天时达高峰，而加用血管内皮生成抑制素恩度后，这种增高效应随即消失。结论脑泰方可能通过上调VEGF-Notch1信号通路的表达以达到治疗性血管新生样作用。
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内质网应激PERK通路在脑泰方提取物保护局灶性脑缺血大鼠海马神经元中的作用
目的 探讨中药复方脑泰方(NTF)提取物(NTE)对局灶性脑缺血的治疗作用及其对内质网应激PERK通路的干预作用.方法 自备NTE连续灌胃7 d后,在体制备大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,观察术后大鼠的神经行为,同时使用Nissl染色观察神经元凋亡情况,使用免疫组织化学、Western及RT-qPCR观察内质网应激PERK通路相关蛋白的表达.结果 NTE对大鼠脑缺血后的行为有一定的改善作用;NTE可明显增加MCAO后海马CA1区神经元的存活.NTE从术后12 h开始抑制PERK通路p-PERK的表达,明显促进GRP78蛋白的表达,抑制术后CHOP蛋白的表达,尤其在术后24 h.RT-qPCR结果显示NTE可以显著降低MCAO术后72 h海马CA1区神经元内CHOP的表达.结论 NTE对脑缺血具有治疗作用,其可能的机制是抑制内质网应激PERK通路,尤其是在脑缺血的早期.
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脑泰方对脑缺血/再灌注大鼠海马区Nrf2、HO-1和膜铁转运辅助蛋白表达的影响
目的 研究益气活血中药脑泰方通过Keap1-Nrf2/ARE信号通路对脑缺血/再灌注后大鼠海马区血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)和膜铁转运辅助蛋白(hephaestin,Heph)表达的影响.方法 将80只♂大鼠随机分为假手术组、模型组、脑泰方低剂量组(4.5 g·kg-1)、中剂量组(9 g·kg-1)和高剂量组(18 g·kg-1).各组大鼠术前连续灌胃给药3 d,每日1次,再行大脑中动脉线栓法脑缺血/再灌注模型制备术,术后连续灌胃给药2 d.术后72 h采用Zea Longa神经功能学评分标准记录大鼠行为活动,TTC染色法测定脑梗死体积,real-time PCR检测大鼠海马区Nrf2、HO-1、Heph的mRNA表达,Western blot检测 Nrf2、HO-1、Heph的蛋白表达.结果 与模型组比较,脑泰方中、高剂量组的神经行为学评分明显下降(P<0.01),各脑泰方组脑梗死体积明显缩小(P<0.01);HO-1 mRNA表达均增加(P<0.05).脑泰方中、高剂量组Heph mRNA表达增加(P<0.05);Nrf2和Heph蛋白表达明显增加(P<0.05,P<0.01).各脑泰方组HO-1蛋白表达增高(P<0.01).结论 脑泰方能减轻脑缺血/再灌注损伤,其机制可能是通过激活Keap1-Nrf2/ARE信号通路,促进HO-1生成,上调Heph的表达,减少脑铁沉积,发挥脑缺血/再灌注后神经元的保护作用.
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脑泰方抗血小板活化作用的实验研究
目的 观察脑泰方对大鼠血小板活化作用的影响,探讨其抗血栓作用机制.方法 采用旋转玻璃球法测定血小板粘附率,采用比浊法测定ADP,ACA,COL诱导的大鼠血小板大聚集率;采用血栓法观察脑泰方对大鼠血栓形成的影响.结果 脑泰方能降低血小板粘附率;降低ADP,ACA,COL诱导的大鼠血小板大聚集率;减短大鼠体外血栓长度、减轻血栓湿重、干重.结论 抗血小板活化、抗血栓形成是脑泰方预防、治疗脑梗死的作用机制之一.
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脑泰方抗血栓作用的实验研究
目的:观察脑泰方对大鼠血栓形成及凝血功能的影响,评价其抗血栓作用.方法:采用电刺激大颈静总动脉法,观察其抗血栓作用;测定其对正常大鼠PT、APTT、TT及Fib的影响,观察凝血功能;采用酶联免疫法测定其对大鼠血浆中6-K-PGFlα、TXB2含量的影响,观察血小板的释放功能.结果:脑泰方能明显延长血栓形成时间;升高大鼠血浆中6-K-PGF1α含量,降低血浆TXB2含量、维持TXB2/6-K-PGF1α比值平衡;对正常大鼠PT、APTT、TT、FIB的有一定改善,但差异无统计学意义(P＞0.05).结论:脑泰方具有一定的抗血栓作用.
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中药脑泰方对大鼠脑缺血后VEGF和Angiopoietins表达的实验研究
目的 探讨中药脑泰方对大鼠脑缺血后血内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和血管生成素(angiopoietins,Ang)的表达变化及其在血管生成中的作用.方法 选择40只雄性SD大鼠,采用随机区组法分为A正常对照组,B假手术组,C MCAO模型组,D脑泰方组;,观察各组大鼠神经功能缺失计分、脑梗死体积;RT-PCR、Western blot方法检测不同组大鼠脑组织中VEGF、Ang-1及Ang-2 mRNA和蛋白的表达变化.结果 神经功能缺失计分及TTC染色显示脑泰方组脑缺血情况缓解;大鼠脑缺血后VEGF、Ang-2 的表达水平增高,脑泰方组表达显著高于模型组(P<0.05);Ang-1的表达水平在大鼠脑缺血后呈下降趋势,脑泰方组表达显著低于模型组(P<0.05).结论 大鼠脑缺血后VEGF、Ang-1和Ang-2共同协调作用促进血管生成,中药脑泰方在脑缺血损伤后治疗血管新生样作用中发挥着促进作用.
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脑泰方对动脉粥样硬化兔氧化应激的影响研究
目的 观察脑泰方对动脉粥样硬化兔氧化应激的影响,探讨脑泰方抗动脉粥样硬化的作用机制.方法 采用"高脂饲料喂养+免疫刺激方法"建立动脉粥样硬化兔模型,模型成功后随机分为脑泰方组、模型组、阿托伐他汀组,另设空白对照组,每组10只.药物干预后,采用酶联免疫法测定兔血清SOD、MDA及ox-LDL含量;采用PCR及Western Blot技术检测LOX-1、VCAM-1、ICAM-1及MCP-1相关基因及蛋白表达情况.结果 模型兔SOD较空白对照组显著降低(P＜0.01),MDA及ox-LDL显著升高(P＜0.01),主动脉LOX-1、VCAM-1、ICAM-1、MCP-1mRNA和蛋白表达较对照组显著升高(P＜0.01).药物干预后,与模型组比较,脑泰方组兔SOD明显升高(P＜0.01),MDA及ox-LDL含量明显降低(P＜0.01),LOX-1、VCAM-1、ICAM-1、MCP-1的mRNA和蛋白质表达明显下降(P＜0.01).结论 脑泰方可能通过增强抗氧化能力,降低脂质过氧化程度及保护血管内皮的途径而发挥抗动脉粥样硬化作用.
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脑泰方对脑缺血再灌注大鼠血管新生作用的实验研究
目的 观察脑泰方对脑缺血再灌注大鼠血管新生的影响.方法 将SD大鼠随机分为假手术组、脑缺血再灌注损伤组(模型组)和脑泰方(NTE)组,采用线栓法复制大鼠脑缺血再灌注损伤模型,模型组和NTE组再分为再灌注1、3、5、7 d 4个时相亚组,观察各组大鼠神经功能缺失计分、脑梗死体积、脑微血管密度(CMVD)的表达.结果 ①神经功能缺失计分:假手术组大鼠神经功能缺失计分均为0分;1 d至7 d时NTE组和模型组评分均下降;3 d时NTE组与假手术组比较无统计学意义(P>0.05);7 d时模型组与假手术组比较差异有统计学意义(P<0.05).②脑梗死体积:假手术组未见明显脑梗死;1～7 d时模型组脑梗死体积均明显增大;NTE组3 d至7 d脑梗死体积减小,与同时相模型组比较差异有统计学意义(P<0.05).③CMVD:1 d时模型组及NTE组的微血管数均较假手术组增加,但差异无统计学意义(P>0.05);与假手术组比较,3 d时NTE组微血管数增多,差异有统计学意义(P<0.05),7 d时NTE组微血管数显著增加,两者比较差异有统计学意义(P<0.01).而模型组至7 d CMVD高于假手术组.差异有统计学意义(P<0.05).结论 脑泰方可通过促进脑缺血再灌注损伤大鼠缺血脑组织血管新生从而改善脑梗死体积和神经功能缺失计分.
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基于网络药理学方法对脑泰方干预脑梗死的作用机制研究
目的 筛选脑泰方主要有效成分,预测其活性成分干预脑梗死的靶点及通路,对比脑梗死有效靶点及涉及的通路,探究脑泰方干预脑梗死的作用机制.方法 采用检索中药系统药理学技术平台(traditional Chinese medicine systems pharmacolo-gy database and analysis platform,TCMSP)、台湾中医药资料数据库以及文献资料筛选出脑泰方的主要有效成分,利用其活性成分基于Pubchem数据库和Swiss Target Prediction数据库预测脑泰方有效成分的作用靶点,利用TTD数据库检索出脑梗死涉及的靶点,通过生物学信息注释数据库(DAVID)预测分析相应靶点涉及的通路;然后对比不同途径获得的靶点及通路.结果 脑泰方中有40个活性成分,预测得到靶点254个,预测到相关信号通路46条;疾病涉及的靶点26个,相关信号通路6条;其中药物活性成分预测的通路与疾病涉及的通路重合的有5条.结论 通过数据对比分析可知,脑泰方干预脑梗死可能是通过调节补体和凝血级联通路、钙离子信号通路、肌动蛋白细胞骨架通路等多途径发挥作用,为进一步阐明脑泰方干预脑梗死具体的作用机制提供了重要参考.
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脑泰方治疗气虚血瘀证脑梗塞临床研究
目的观察脑泰方治疗气虚血瘀证脑梗塞疗效.方法72例经确诊的气虚血瘀证脑梗塞患者随机分为2组,每组各36例,治疗组和对照组在常规方法治疗基础上分别口服或鼻饲脑泰方和尼莫地平.结果治疗3周后,治疗组在愈显率、临床神经功能减少百分率均明显高于对照组(P＜0.05或＜0.01),且在改善临床症状及血液流变学方面亦优于对照组(P＜0.05或＜0.01).结论脑泰方对气虚血瘀证脑梗塞有良好的治疗作用,临床疗效优于尼莫地平.
