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温肺降浊方对血管性痴呆大鼠认知功能及温肺降浊方对血管性痴呆大鼠认知功能及VEGF和iNOS表达的影响
目的 观察温肺降浊方对血管性痴呆(VD)大鼠的认知功能的改变及其对脑内相关血氧动力改变诱导的血管内皮生长因子(VEGF)以及一氧化氮合酶(iNOS)基因表达,以评价温肺降浊方的脑保护作用.方法 实验大鼠随机分为:空白对照组、假手术组、模型组、尼莫地平组、温肺降浊方组,采用双侧颈总动脉永久结扎法制备VD动物模型,以Morris水迷宫试验和穿梭箱实验检测来评价大鼠的认知功能,采用免疫组化法测定大鼠VEGF和iNOS的表达.结果 模型组的潜伏期短,错误次数多(P<0.01).温肺降浊方组的潜伏期大于尼莫地平组(P<0.01).温肺降浊方组及尼莫地平组潜伏期大于模型组(P<0.01).同时,假手术组与空白对照组大鼠跨越平台次数、目标象限次数无差异(P>0.01);模型组跨越平台次数、目标象限次数均低于假手术组(P<0.01);温肺降浊方组及尼莫地平组越平台次数、目标象限次数高于模型组(P<0.01);温肺降浊方组与尼莫地平组指标比较,差异有统计学意义(P<0.05).温肺降浊组、尼莫地平组VEGF阳性细胞多于模型组(P<0.01),温肺降浊方组阳性细胞数多于尼莫地平组(P<0.05).各组大鼠海马区iNOS阳性细胞数分布状况:假手术组及空白对照组iNOS阳性细胞数低于模型组,温肺降浊方组和尼莫地平组iNOS阳性细胞数低于模型组,温肺降浊方组iNOS阳性细胞数与尼莫地平组比较,差异有统计学意义(P<0.05).结论 温肺降浊方能抑制血管性痴呆大鼠iNOS表达,上调VEGF的表达,改善认知功能.
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温肺降浊方对血管性痴呆大鼠海马神经元凋亡的影响
目的:探讨温肺降浊方对血管性痴呆(VD)大鼠海马Cytc、Bax蛋白表达的影响及其神经保护作用.方法:SD大鼠120只,随机分为假手术组、模型组、温肺降浊方组(中药组)、盐酸多奈哌齐组(西药组),每组30只.采用2-VO法制作VD大鼠模型,Morris水迷宫测试大鼠学习、记忆能力,流式细胞术检测海马细胞的凋亡情况,免疫组化法检测Cytc、Bax蛋白的含量.结果:①与假手术组比较,模型组大鼠学习、记忆成绩下降;与模型组比较,中药组与西药组大鼠的学习与记忆成绩均有显著提高(P＜0.05);②与假手术组比较,模型组细胞凋亡发生率显著增加(P＜0.05);与模型组比较,中药组及西药组细胞凋亡率均显著下降(P＜0.05);③与模型组比较,中药组与西药组Cytc、Bax蛋白表达均显著下降(P＜0.05),且中药组与西药组比较无统计学意义.结论:温肺降浊方能明显改善VD大鼠学习记忆能力,其作用机制可能与其通过抑制Cytc、Bax蛋白的表达,从而抑制海马神经元的凋亡有关.
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基于药效筛选和正交试验优化温肺降浊方的提取工艺
目的 通过药效、急毒实验筛选温肺降浊方的提取工艺,并以正交试验进行优化,确定温肺降浊方的佳提取工艺.方法 对不同工艺样品进行急性毒性实验,并以血管性痴呆(VD)大鼠的学习和记忆能力的改善程度为药效指标,综合急毒与药效实验的结果,筛选出佳工艺方案;以多个成分含量和出膏率为指标,采用正交试验筛选溶剂倍量、提取时间和提取次数的优水平,并进行验证.结果 急毒实验结果显示所有小鼠均健康存活,未见明显毒性反应.药效实验结果表明白附片、党参、炙甘草混合水提,三七、干姜、酒大黄混合醇提为温肺降浊方的佳提取方案;优提取工艺为白附片先煎2h,再入党参、炙甘草加10倍水加热回流提取3次,每次l h;三七、干姜、酒大黄加6倍70％乙醇加热回流提取3次,每次1.5 h.结论 温肺降浊方能明显改善VD模型大鼠的学习和记忆能力,优选的工艺条件合理可行,为温肺降浊方的后续开发提供依据.
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温肺降浊方对血管性痴呆大鼠学习记忆及Caspase-3蛋白表达的影响
目的 研究温肺降浊方对血管性痴呆(VD)大鼠学习记忆及Caspase-3蛋白表达的影响.方法 双侧颈总动脉永久性结扎法制做VD模型大鼠,将造模成功的大鼠随机分为模型组,低、中、高剂量温肺降浊方组及石杉碱甲组,另设假手术组.灌胃给予相应药物治疗,连续给药30 d后,用Morris水迷宫检测学习记忆能力,HE染色观察大鼠海马CA1区神经元形态学的改变,Western印迹检测海马组织Caspase-3的表达.结果 Morris水迷宫检测结果,温肺降浊方各组平均逃避潜伏期明显低于模型组(P<0.01),找到平台的次数较模型组明显增多(P<0.01).HE染色结果表明,温肺降浊方各组能够不同程度地改善海马CA1区神经元形态异常.Western印迹实验结果发现,温肺降浊方各组大鼠海马组织Caspase-3的表达明显低于模型组(P<0.01).结论 温肺降浊方可通过抑制Caspase-3的表达,改善VD大鼠海马CA1区神经元形态异常,从而改善VD大鼠的学习记忆能力.
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从线粒体相关凋亡蛋白表达探讨温肺降浊方对VD大鼠学习记忆能力的影响
目的:探讨温肺降浊方对血管性痴呆(VD)大鼠海马组织Cytc、Bax蛋白表达变化及大鼠学习记忆能力的影响.方法:雄性SPF级SD大鼠120只,随机分为假手术组、模型组、中药组、西药组,每组各30只.采用双侧颈总动脉永久性结扎法制作VD大鼠模型,中药组给予温肺降浊方灌胃,西药组予盐酸多奈哌齐灌胃,其余两组则予以等量生理盐水灌胃.采用Morris水迷宫测试大鼠学习、记忆能力,RT-PCR检测大鼠海马Cytc、Bax mRNA含量,Western blot检测大鼠海马Cytc、Bax蛋白表达水平.结果:①Morris水迷宫学习记忆能力测试结果证实与假手术组比较,模型组大鼠学习成绩与记忆成绩下降,各用药组大鼠的学习成绩与记忆成绩均有显著提高(P<0.05);②与模型组比较,中药组及西药组大鼠海马Cytc、Bax mRNA及蛋白表达量含量显著下降 (P<0.05),且药物组之间比较无统计学意义(P>0.05).结论:温肺降浊方可明显改善VD大鼠学习记忆能力,其机制可能与其抑制海马Cytc及Bax表达有关.
