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代综方对油酸诱导的HepG2细胞内脂质堆积的影响
目的：研究代综方（ Dai Zong Fang，DZF）对于体外油酸诱导的HepG2细胞内脂质堆积的作用。方法采用油酸（ oleic acid，OA）诱导HepG2细胞形成脂质堆积的肝细胞模型，通过噻唑蓝（ MTT）实验检测不同浓度油酸或DZF对HepG2细胞活力的影响，采用BODIPY493/503与苯基吲哚（ DAPI）双荧光染色进行胞内脂质堆积的形态学观察，通过MATLAB软件对荧光照片进行数学处理以测量胞内脂质含量。结果100～800μM的油酸对HepG2细胞存活率的影响无统计学意义（ P>0.05），油酸使HepG2细胞发生胞内脂质堆积，与剂量呈正相关；一定剂量的DZF（1 mg/L～20 mg/L）对HepG2细胞存活率的影响无统计学意义（P>0.05），可以显著减少油酸所致的肝细胞胞内脂质含量；10 mg/L的DZF作用4 h起效，作用96 h之内效果稳定；40 mg/L的DZF可降低HepG2细胞存活率（P<0.05），对胞内脂质含量的影响无统计学意义（P>0.05）。结论代综方可以抑制油酸所致HepG2细胞内脂质的堆积。
关键词： 代综方 HepG2 游离脂肪酸 脂代谢异常 BODIPY493/503 -
陈秋教授自拟代综方联合穴位埋线治疗脾虚湿阻型肥胖症的临床疗效研究
目的 探讨陈秋教授自拟代综方联合穴位埋线治疗脾虚湿阻型肥胖症的临床疗效.方法 选取2014年11月-2015年11月在成都中医药大学附属医院内分泌科门诊和肥胖门诊就诊的脾虚湿阻型肥胖症患者74例,采用随机数字表法分为对照组(n=38)和观察组(n=36).在接受基础治疗的同时,对照组患者采用代综方+二甲双胍治疗,观察组患者采用代综方+穴位埋线治疗,药物治疗周期均为12周.比较两组患者治疗前后的体格检查指标、相关实验室检测指标、中医证候积分及临床疗效.结果 治疗前两组患者身高、体质量、腰围、臀围、大腿围、BMI、腰高比比较,差异无统计学意义(P>0.05).治疗后观察组患者体质量、腰围、BMI、腰高比低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);而两组患者臀围、大腿围比较,差异无统计学意义(P>0.05).治疗前两组患者总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)比较,差异无统计学意义(P>0.05).治疗后观察组患者TG低于对照组,LDL-C高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);而两组患者TC、HDL-C比较,差异无统计学意义(P>0.05).治疗前和治疗后,两组患者胰岛素(Ins)比较,差异均无统计学意义(P>0.05);不同时间点比较,差异有统计学意义(P<0.05);治疗方法与时间在Ins上不存在交互作用(P>0.05).治疗后两组患者Ins与治疗前比较,差异均有统计学意义(P<0.05);不同时间点比较,差异有统计学意义(P<0.05);治疗方法与时间在Ins上存在交互作用(P<0.05).治疗前两组患者胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、胰岛素敏感指数(ISI)、胰岛β细胞功能(HOMA-β)比较,差异无统计学意义(P>0.05).治疗后两组患者HOMA-IR、ISI比较,差异无统计学意义(P>0.05);观察组患者HOMA-β低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).治疗前两组患者中医证候积分比较,差异无统计学意义(P>0.05);治疗后观察组患者中医证候积分低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).观察组患者西医临床疗效、中医证候疗效均优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).治疗前和治疗后,两组患者红细胞计数(RBC)、白细胞计数(WBC)、血红蛋白(Hb)、血小板计数(PLT)、ALT、AST、血肌酐(SCr)、血尿素氮(BUN)、尿酸(UA)比较,差异均无统计学意义(P>0.05).结论 代综方联合穴位埋线治疗可明显改善脾虚湿阻型肥胖症患者的临床症状,减轻体质量,增加胰岛素敏感性,改善胰岛素抵抗,疗效显著.
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UPLC法同时测定黄连与代综方中4种生物碱的含量
目的:建立同时测定黄连与代综方中药根碱、黄连碱、巴马汀、小檗碱4种原小檗碱型生物碱含量的方法.方法:采用超高效液相色谱法.色谱柱为ACQUITY UPLC BEH C18(100 mm×2.1 mm,1.7 μm),流动相为乙腈-水(含2 mmol乙酸铵和0.05％甲酸,30∶70,V/V,pH3.20),流速为0.3 ml/min,柱温为30℃,检测波长为345 nm.结果:盐酸药根碱、盐酸黄连碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱的质量浓度分别在21.76～1 088.05、20.88～1 044.00、17.68～884.05、18.32～916.10 ng/ml范围内与各自峰面积积分值呈良好的线性关系(r均为0.999 9).精密度、稳定性、重复性试验结果的RSD均＜5％.平均加样回收率结果:(1)黄连:盐酸药根碱为101.56％,RSD=2.16％(n=6)；盐酸黄连碱为100.21％,RSD=3.32％(n=6)；盐酸巴马汀为97.60％,RSD=1.96％(n=6)；盐酸小檗碱为98.81％,RSD=1.48％(n=6).(2)代综方:盐酸药根碱为98.87％,RSD=2.41％(n=6)；盐酸黄连碱为99.12％,RSD=2.68％(n=6)；盐酸巴马汀为98.98％,RSD=2.23％(n=6)；盐酸小檗碱为98.55％,RSD=2.82％(n=6).低检出限和低定量限:盐酸药根碱分别为4.50、14.99 ng/ml,盐酸黄连碱分别为5.10、17.00 ng/ml,盐酸巴马汀分别为4.81、16.04 ng/ml,盐酸小檗碱分别为4.64、15.47 ng/ml.结论:该方法简便、灵敏、准确、高效,可用于黄连及其复方制剂的质量控制.
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代综方对C2C12骨骼肌细胞葡萄糖摄取及GLUT4蛋白表达的影响
目的:研究代综方(dai zong fang,DZF)对骨骼肌细胞葡萄糖摄取及葡萄糖转运体4(glucosetransponer 4,GLUT4)蛋白表达的影响.方法:采用含2％马血清(horse serum,HS)的DMEM培养液诱导C2C12骨骼肌细胞分化为肌管,荧光标记的葡萄糖类似物2-NBDG测定葡萄糖摄取,对2-NBDG的量效时效关系进行测定;采用不同剂量DZF干预分化的C2C12细胞,检测其对细胞基础状态及胰岛素刺激状态下葡萄糖摄取的影响;Western blot检测DZF对C2C12细胞GLUT4总蛋白表达及膜转位的影响.结果:在基础状态或胰岛素刺激下,DZF低、中、高剂量均可提高骨骼肌葡萄糖摄取,差异有统计学意义(P＜0.05).基础状态下,DZF能促进GLUT4总蛋白及膜转位蛋白的表达(P＜0.05);胰岛素刺激状态下,DZF对GLUT4总蛋白表达无显著影响(P＞0.05),但仍可促进GLUT4膜转位蛋白的表达(P＜0.05).结论:DZF可增加骨骼肌细胞葡萄糖摄取,具有类胰岛素作用,其作用机制可能与促进GLUT4蛋白向细胞膜转位有关.
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代综方对3T3-L1脂肪细胞分化及相关基因表达的影响
目的:研究代综方(Dai Zong Fang,DZF)对3T3-L1脂肪细胞分化及分化过程中相关基因表达的影响.方法:体外培养3T3-L1前脂肪细胞,鸡尾酒式诱导脂肪细胞分化,给予不同浓度DZF干预6d.BODIPY493/503与DAPI双荧光染色观察脂肪细胞分化情况;甘油磷酸氧化酶-过氧化物酶法测定细胞内甘油三酯(triglyceride,TG)含量;RT-PCR检测CCAAT增强子结合蛋白-α(CCAAT enhancer binding protein-α,C/EBP-α)、过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(peroxisome proliferator activated re-ceptor-γ,PPAR-γ)、乙酰辅酶A羧化酶(acetyl-CoA carboxylase,ACC)、脂肪酸合成酶(fatty acid synthetase,FAS)的mRNA表达;Western blot法检测PPAR-γ、C/EBP-α的蛋白表达.结果:DZF抑制脂肪细胞分化,降低细胞内TG含量,并呈剂量依赖效应;与对照组比较,DZF大剂量组明显下调ACC的mRNA表达(P＜0.05),DZF小中大剂量均明显下调FAS的mRNA表达(P＜0.01);与对照组比较,DZF中、大剂量组明显下调C/EBPα、PPAR-γ的mRNA表达(P＜0.01),Western蛋白表达结果与mRNA结果一致.结论:DZF能够明显抑制3T3-L1脂肪细胞的分化程度,其机制可能与下调C/EBPα、PPAR-γ、ACC、FAS基因的表达有关.
