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电针对MCAO大鼠脑小胶质细胞TLR4及NF-κB p65蛋白表达的调控研究
目的：研究电针对MCAO大鼠脑组织小胶质细胞TLR4及NF-κB蛋白表达的影响。方法建立MCAO大鼠模型，分别电针内关、曲池后进行神经体征评分，HE染色检测神经元坏死率，双重免疫荧光染色检测TLR4、NF-κB p65蛋白在小胶质细胞的表达。结果模型组与正常组比较，大鼠神经体征评分、脑海马神经元坏死率、脑组织TLR4、NF-κB p65蛋白表达均明显升高，差异有统计学意义（ P<0,01）；内关组、曲池组与模型组比较，神经体征评分、脑海马神经元坏死率、TLR4、NF-κB p65蛋白表达明显降低，差异有统计学意义（ P<0,05）；曲池组与地机组比较，脑海马神经元坏死率明显降低，差异有统计学意义（ P<0,05）；内关组与地机组比较，大鼠脑组织小胶质细胞TLR4蛋白表达明显降低，差异有统计学意义（ P<0,05）。结论电针内关、曲池能改善MCAO大鼠的神经功能损伤，抑制TLR4及NF-κB蛋白在小胶质细胞的表达，提示电针能够通过影响小胶质细胞TLR4/NF-κB信号通路的活化从而发挥脑保护作用。
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丹芪偏瘫胶囊中羚羊角用人工牛黄替代的初步研究
为研究丹芪偏瘫胶囊(DPC)及其羚羊角替代方(DPCAS)对脑缺血的保护作用,初步探讨人工牛黄替代羚羊角的可能性,该文采用左侧大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,将150只SD大鼠随机分为假手术组,模型组,DPC(0.246 g· kg-1·d-1)组,丹芪偏瘫胶囊去羚羊角(DPCRA,0.246g·kg-1 ·d-1)组,丹芪偏瘫胶囊去羚羊角人工牛黄翻倍(DPCBD,0.246 g· kg-1·d-1)组.于第5天给药后1h制备MCAO模型.术后24 h,眼内眦取血,测定血清超氧化物歧化酶(SOD)活性、内皮素(ET)含量.术后72 h取脑组织,氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法测定大脑梗死面积、测定脑指数.荧光定量PCR方法检测脑组织bcl-2,caspase-3,IL-1β,P-选择素,E-选择素,ICAM-1 mRNA的表达,免疫组化方法检测缺血半暗区ICAM-1,IL-1β,TNF-α,IL-6的表达.结果,与模型组比较,DPCBD和DPC组实验结果基本一致,均能明显改善脑梗死指数和脑指数(P＜0.05),均可明显增强大鼠血清SOD活性(P＜0.05);均可在一定程度上降低大鼠血清ET水平;均可降低脑组织caspase-3的表达(P＜0.05),升高bcl-2的表达(P＜0.05);均可降低脑组织IL-1β,P-选择素,E-选择素,ICAM-1 mRNA的表达(P＜0.05),均能减少缺血半暗区ICAM-1,IL-1β,TNF-α,IL-6阳性细胞的表达(P＜0.05).DPCRA组对各指标的影响明显不如DPCBD和DPC组.表明DPCBD与DPC疗效相当,提示丹芪偏瘫胶囊中羚羊角可用人工牛黄进行替代.
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AMPA受体亚单位GluR2在大鼠局灶性脑缺血不同时期表达及其机制研究
目的通过研究大鼠局灶性脑缺血不同时期缺血中心区与半暗带α-氨基羟甲基异恶唑丙酸(AMPA)受体亚单位GluR2蛋白表达,并同时观察凋亡指数,以进一步阐述GluR2在缺血性脑卒中的作用机制.方法采用免疫组化和Tunnel染色分别检测大脑中动脉梗塞(MCAO)2 h再灌后1 h、1 d、3 d、7 d、15 d、30d大鼠GluR2蛋白和凋亡细胞的表达.结果再灌1 h,缺血侧中心区(ischemia core IC)与缺血半暗带区(ischemia penumbra,Ip)GluR2蛋白表达与对照组无差异.在缺血中心区,再灌后1dGluR2蛋白表达开始减少(F=1.104,P＜0.05),3 d表达达到低(F=3.252,P＜0.01),7、15 d表达回升(F=1.878,P＜0.01;F=1.185,P＜0.05),30 d基本上与对照组相同.在缺血半暗带,GluR2蛋白表达在再灌后1、3、7d与健侧无明显差异,但在15 d可见表达明显增强(F=27.166,P＜0.01),在30 d表达呈更强(F=28.515,P＜0.01),且阳性细胞数目也稍有所增多.在缺血中心区,再灌1h即检测到表达非常弱但数目较多的凋亡细胞,再灌1 d后更为明显,3 d和7 d凋亡细胞在数量上和表达程度上达到高峰,15 d凋亡细胞减少,1个月后只见中心区少许凋亡细胞.在半暗带区,MCAO再灌后3d,7 d和15 d仅见少许TUNNEL阳性细胞.结论再灌后细胞凋亡出现时间先于GluR2蛋白表达下调时间提示GluR2不是早期凋亡的启动因子.再灌后1～30d,GluR2蛋白表达变化与凋亡阳性细胞几乎平行,提示GluR2虽不启动早期凋亡,但可能导致神经元进一步凋亡,或参与迟发性神经元死亡.缺血侧半暗带区GluR2蛋白在再灌后15～30 d表达明显增强,且数目也稍有增多,提示GluR2与突触的可塑性有关.
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针刺人中穴对 MCAO 大鼠中枢神经系统神经干细胞增殖影响的研究
[目的]探讨针刺人中穴治疗缺血性脑卒中的神经发生机制。[方法]用 BrdU+/nestin+免疫荧光双标和蛋白免疫印迹法观察针刺对线栓法大鼠大脑中动脉阻断实验模型（MCAO）大鼠大脑新生神经细胞及皮质、海马、纹状体nestin 蛋白表达量的变化的影响。[结果]针刺组 MCAO 大鼠 BdrU+、nestin+和 BrdU+/nestin+细胞数均高于正常组、假手术组和模型组（P﹤0.05），模型组高于正常组和假手术组（P﹤0.05）；针刺组 nestin 在海马和皮质的表达量高于其他组别（P﹤0.05）。[结论]缺血缺氧能引起 MCAO 大鼠脑神经干细胞的增殖，而针刺人中穴能增强神经干细胞增殖作用，促进大脑功能的修复。
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通脉复脑胶囊对局灶性脑缺血大鼠的保护性作用
目的:研究通脉复脑胶囊对局灶性脑缺血大鼠的影响及其机制.方法:用线栓法建立大鼠局灶性脑缺血模型,预先给予大鼠通脉复脑胶囊,给中动脉阻塞(MCAO)大鼠的行为打分,并测定大鼠血清MDA(丙二醛)水平及SOD(超氧化物歧化酶)活性,观察阻塞区域脑组织的病理改变,以评价药物对局灶性中动脉阻塞损害程度的影响.结果:通脉复脑胶囊能改善MCAO大鼠的行为障碍,降低MDA水平,提高SOD活性,与维脑路通对照组比较,上述指标呈显著性差异;通脉复脑胶囊明显改善MCAO大鼠脑组织细胞的病理性损伤.结论:通脉复脑胶囊能够改善脑缺血损伤,作用机制可能与增强SOD活性、降低MDA等过氧化物水平有关.
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中药T2100对缺血性脑中风的药理作用
以Wister大鼠为研究对象进行T2100的药效学研究，以观察T2100治疗缺血性中风的疗效，并揭示其可能的作用途径及机制。
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血塞通注射液对局灶性脑梗死大鼠NgR mRNA及蛋白表达的影响
目的:观察血塞通注射液在不同时点对局灶性脑梗死大鼠Nogo-A受体(NgR)蛋白及mRNA表达的影响,揭示血塞通注射液对脑缺血受损神经元的重塑作用机制.方法:采用改良Zea-Longa方法制备MCAO模型,SD大鼠35只随机等分为假手术组、模型组、血塞通小剂量组、血塞通大剂量组、尼莫地平组.各组动物分别于术后7天、14天、28天麻醉断头取材,行免疫组织化学及荧光定量PCR检测.结果:模型组NgR蛋白及mRNA表达随着缺血时间延长而逐渐升高,到28天时达到高峰,较同时间点假手术组比较均增高(P＜0.05);各用药组均比模型组低,术后14天及28天,血塞通大剂量组较模型组显著降低(P＜0.05).结论:NgR参与了脑梗死后突触的再生抑制,血塞通注射液可以抑制NgR蛋白及mRNA表达,从而促进神经再生.
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基于神经功能行为学筛选内关穴的佳刺激参数
目的:筛选针刺内关穴并采用捻转手法改善大脑中动脉阻塞模型(MCAo) Wistar大鼠神经功能行为学佳针刺频率和时间优化方案.方法:参照Zea-Longa线拴法复制Wistar大鼠MCAo模型,分别施以频率1、2、3次/s,时间5、60、180s不同组合下的针刺干预,以大鼠神经功能行为学为评价效应指标.结果:针刺时间和频率参数3次/s,60s较其它实验组能够非常显著的改善MCAo大鼠的行为学,P＜0.01.结论:醒脑开窍针刺法中内关穴的针刺频率和时间存在优搭配方案为3次/s,60s.
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片仔癀对局灶性脑梗死大鼠炎性相关因子IL-6、IL-1β含量的影响
目的:观察片仔癀对局灶性脑梗死大鼠模型炎性相关因子IL-6、IL-1β含量的影响.方法:采用改良的Longa法制备大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,将SD大鼠随机分为7组:假手术组、模型组、片仔癀大、中、小剂量组、尼莫地平组和脑得生组.提前给药3天,造模后给药4天取材,采用ELISA法检测IL-6、IL-1β的含量.结果:模型组血清IL-6、IL-1β水平较假手术组显著升高(P＜0.01);各给药组较模型组均有不同程度的降低,其中片仔癀大剂量组、脑得生组与尼莫地平组血清IL-6水平较模型组显著降低(P＜0.01或P＜0.05);各给药组血清IL-1β水平较模型组均显著降低(P＜0.01或P＜0.05).结论:片仔癀胶囊可以降低局灶性脑梗死后大鼠IL-1β、IL-6的含量,减轻脑梗塞后的炎症病理过程,从而对于神经功能起保护作用.
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化瘀通络方对局灶性脑缺血大鼠再灌注(MCAO)后脑组织中HIF-1α及VEGF表达的影响
目的:探讨化瘀通络方对局灶性脑缺血大鼠再灌注(MCAO)后脑组织血管内皮生长因子(VEGF)及缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的影响.方法:制备大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型,给予化瘀通络方治疗后,用免疫组化法检测各组脑组织中VEGF及HIF-1α的表达.结果:化瘀通络方可显著减少MCAO大鼠VEGF和HIF-1α阳性细胞数量,降低脑组织中VEGF及HIF-1α的表达较(P<0.05,P<0.01).结论:化瘀通络方对脑缺血损伤的保护作用与降低VEGF和c-fos表达有关.
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清脑胶囊对大鼠局灶性脑缺血神经功能的保护作用
目的 研究清脑胶囊对大鼠局灶性脑缺血神经功能的保护作用. 方法 以线栓法阻塞大脑中动脉(Middle cerebral artery occlusion,MCAO)制作大鼠模型.分别于4 h和24 h进行神经功能评分,观察清脑胶囊对脑缺血造成的行为障碍的影响. 结果 清脑胶囊可减轻大鼠局灶性脑缺血和24h的行为障碍,与模型组比较有统计学意义(P<0.05). 结论 清脑胶囊对大鼠局灶性脑缺血的神经功能有保护作用.
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针刺对MCAO大鼠脑组织小胶质细胞活化及炎症介质含量的影响
目的 研究针刺对MCAO大鼠脑组织小胶质细胞活化及TNF-α、IL-1β、IL-6含量的影响.方法 建立MCAO大鼠模型,分别针刺内关、曲池后进行神经体征评分,HE染色检测神经元坏死率,ELISA法检测脑组织炎症介质含量,IBA1免疫荧光染色检测小胶质细胞活化.结果 与假手术对照组相比,模型对照组大鼠神经体征评分、脑海马神经元坏死率、脑组织TNF-α、IL-1β、IL-6含量、IBA1表达均明显升高(P＜0.01);与模型对照组相比,内关组、曲池组神经体征评分、脑海马神经元坏死率、IL-1含量、IBA1表达明显降低,曲池组TNF-α、IL-6含量明显降低(P＜0.05).结论 针刺内关、曲池能改善MCAO大鼠的神经功能损伤,抑制小胶质细胞活化,降低炎症介质含量,提示针刺可能通过影响小胶质细胞活化从而调控脑缺血继发的炎症反应.
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扫描仪在大脑中动脉阻断脑梗死面积测量中的应用
目的:建立一种应用扫描仪测量脑梗死面积的方法.方法:利用扫描仪扫描红四氮唑染色的梗死脑组织,计算机测量脑梗死面积.结果:扫描所得图像更为清晰,可观察到微小的变化,测量灵敏度可达1 mm2.结论:扫描仪扫描测量脑梗死面积方法精确度高,操作简便、快捷,适用于多种标本的测量.
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活血熄风方对MCAO模型大鼠脑皮质c-fos蛋白表达的影响
目的:通过观察活血熄风方对局灶性脑缺血模型大鼠脑皮质中c - fos蛋白表达的影响,探讨其对神经的保护作用和机制.方法:线栓法阻断大鼠一侧大脑中动脉(MCAO),制作大鼠局灶性脑缺血模型,观察活血熄风方对MCAO模型大鼠脑缺血24h、48h和72h后神经功能缺损评分的变化,采用免疫组化法检测其对上述时间点大鼠脑皮质中c - fos蛋白表达的变化.结果:活血熄风方能降低MCAO模型大鼠脑皮质中c - fos蛋白的表达.结论:活血熄风方对大鼠局灶性脑缺血具有神经保护作用,其机制可能与其降低MCAO模型大鼠脑皮质c- fos蛋白的表达有关.
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局灶性脑缺血大鼠皮层神经元超微结构及线粒体呼吸功能变化的研究
目的:研究局灶性脑缺血大鼠脑细胞超微结构及脑组织线粒体呼吸链功能的变化.方法:采用改良Zea Longa方法复制大鼠大脑中动脉缺血(MCAO)模型,透射电镜观察缺血后脑组织神经元超微结构的改变;检测呼吸链R3、R4、RCR、OPR等评价呼吸功能的指标.结果:局灶性脑缺血大鼠脑组织神经元细胞结构严重破坏;与对照组相比,脑缺血时大鼠脑线粒体ST3、RCR和OPR降低,ST4升高.结论:脑缺血急性期线粒体结构破坏,功能受损严重,随着时间延长均有所恢复;保护线粒体呼吸链可能对脑缺血损伤有保护作用.
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川芎嗪对大鼠局灶性脑缺血后额叶、丘脑、小脑病理形态改变的影响
目的观察大鼠一侧大脑中动脉闭塞(MCAO)后两侧额叶、丘脑、小脑细胞形态学变化及川芎嗪的干预作用.方法采用线栓法建立大鼠一侧大脑中动脉闭塞模型,按实验需要将实验动物分成正常、单纯缺血及川芎嗪干预组;用HE染色和TUNEL法观察两侧额叶、丘脑、小脑MCAO后6 h、24 h、1 w细胞形态学变化.结果同侧额叶、丘脑MCAO后6 h开始出现TUNEL阳性细胞,24 h后明显增加,至1周阳性细胞减少(P<0.01),而对侧丘脑、额叶及两侧小脑未见明显细胞形态学改变;干预组同侧额叶、丘脑凋亡阳性细胞数明显减少(P<0.05).结论川芎嗪能增加MCAO后远隔部位的脑灌注,减轻远隔部位的脑功能障碍.
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近十年来线栓法制作MCAO大鼠模型的问题浅析
人类脑血管疾病发病率日益增加,其中缺血性脑血管病所占比例较大,因此关于大脑中动脉闭塞(Middle cerebral artery occlusion,MCAO)的研究以及总结显得格外重要.目前线栓法制备MCAO大鼠模型被广泛接受、肯定和使用,但不同研究者根据需要在制作模型过程中进行了多方面改进.笔者就大鼠年龄与体重、麻醉剂的选择、线栓制备方法、切口位置、是否阻断PPA、线栓插入方法、插线深度、进线后是否缝合再抽线以及缺血时间的问题进行探讨和分析.
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胱氨酸对MCAO模型鼠海马CA1区神经干细胞核磷蛋白表达的影响
目的:研究胱氨酸(CYS)对大鼠MCAO模型再灌注后海马CA1区神经干细胞凋亡相关蛋白核磷蛋白(NPM)表达水平的影响,探讨CYS保护细胞的机制.方法:线栓法制备MCAO模型,104只大鼠随机分为假手术组8只,MCAO组与MCAO+ CYS治疗组各按时间点随机分为6个亚组,每亚组8只.MCAO+ CYS治疗组给予CYS(0.15mg/g),腹腔注射;MCAO组与假手术组给予生理盐水(1mL/d),腹腔注射;TUNEL染色方法检测海马CA1区的神经干细胞的凋亡水平,免疫组织化学染色方法检测NPM表达水平的变化.结果:MCAO组与MCAO+CYS治疗组海马CA1区TUNEL阳性细胞数目增加,MCAO组增加显著.假手术组海马CA1区NPM的表达有一定的数量,MCAO组表达数量增加,MCAO+CYS治疗组显著增强.结论:大鼠海马CA1区核磷蛋白可受大脑中动脉阻塞急性缺血缺氧的作用而表达水平增加,应用胱氨酸治疗大大增加核磷蛋白的表达.
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垂体腺苷酸环化酶激活肽对MCAO大鼠自体神经干细胞分化影响
目的:研究垂体腺苷酸环化酶激活肽(PACAP)对MCAO大鼠自体神经干细胞分化影响.方法:将大鼠随机分为不同浓度PACAP治疗组:P8组(1×10-8mol/L),P10组(1×10-10mol/L),P12组(1×10-12mol/L);对照组.免疫荧光双标观察BrdU+/NSE+及BrdU+/GFAP+细胞的表达变化.结果:各组BrdU+/NSE+及BrdU+/GFAP+细胞7d时较少,14d显著增加,28d时高,PACAP治疗组高于对照组(P<0.01);P8组高于P10组,P12组(P<0.05).结论:PACAP具有诱导神经干细胞分化的作用,以1×10-8mol/L为佳浓度.
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通腑法开通玄府对MCAO大鼠脑AQP4mRNA表达的影响
目的 研究通腑醒神胶囊(简称TFXSJN)通腑法开通玄府对大鼠大脑中动脉阻塞(Middle cerebral arteryocclusion,简称MCAO)模型脑组织水通道蛋白4(Aqμaporin-4,简称AQP-4)mRNA表达的影响.方法 采用线栓法制作大鼠MCAO模型,2 h后拔线造成缺血再灌注损伤.观察拔线后12 h、1 d、2 d、3 d及7 d不同时间点大鼠神经行为评分、脑组织AQP-4mRNA的表达水平,以及各组大鼠在1 d、3 d及7 d时脑含水量变化.结果 TFXSJN治疗后能明显减轻大鼠在1 d、2d、3 d及7 d时的神经功能评分,与模型组比较P<0.05或P<0.01:造模后,TFXSJN组及模型组大鼠脑含水量在1d及3 d时均明显高于假手术组及正常组,具有显著差异(P<0.01),以3 d时的脑含水量高,7 d时4组大鼠的脑含水量无显著差异(P>0.05);与模型组比较,TFXSJN组3 d时脑含水量明显降低(P<0.01);TFxSJN组及模型组大鼠脑组织损伤侧AQP-4mRNA的表达在12 h时已经明显升高,与健侧、假手术及正常组比较均有显著差异(P<0.05):模型组在3d时达高峰,TFXSJN组在2 d时达高峰,3 d时已有所下降,与模型组损伤侧比较有显著差异(P<0.05),但仍高于健侧(P<0.05).7 d时两组损伤侧的AQP-4mRNA表达水平基本恢复正常,与健侧、假手术及正常组比较无显著差异(P>0.05).假手术组在各时点内其损伤侧AQP-4mRNA表达水平与健侧及正常组比较均无显著差异(P>0.05).结论 急性脑缺血再灌注损伤时存在AQP-4mRNA基因表达的上调.12h时即明显升高,3 d时达高峰,7 d时基本恢复正常.AQP-4mRNA表达的上调可能与缺血性脑水肿的形成密切相关,而TFXSJN通腑法开通玄府法能够调节缺血再灌注损伤后AQP-4mRNA表达的失衡状态,减轻缺血后脑水肿,其调节AQP-4mRNA基因的异常表达可能是通腑法开通玄府治疗缺血性中风的分子机制之一.因此推测玄府与神经细胞膜上通道蛋白(如AQP-4等)之间可能存在共同的实质内涵.
