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醒脑静对中风后认知功能障碍的疗效及机制
目的：观察醒脑静治疗中风后老年患者认知障碍的疗效，并探讨其基于脑脊液中 PI3K／AKT 信号通路的作用机制。方法：选取2016年1月至2016年6月收住我科的诊断为“中风”的老年患者90例，随机分成对照组和治疗组，各45例。2组均使用常规治疗，治疗组注射醒脑静注射液20 mL，对照组注射等量生理盐水。在治疗后1 d 及治疗后3、7 d 使用恢复质量评估（Physician Quality Reporting System，PQRS）量表新认知评价体系评估患者的认知功能水平。利用蛋白免疫印迹法（Western blotting）检测治疗前（T0）、治疗后1个月（T1）、2个月（T2）、3个月（T3）和4个月（T4）不同时间点脑脊液中PI3K、AKT、pAKT、Bcl、Bax 的浓度。结果：1）治疗后2组患者认知功能均出现降低，对照组变化较治疗组明显，2组患者治疗后7 d 的 MMSE 评分恢复正常，而 PQRS 评分则显示患者仍存在认知功能缺损。2）PQRS 评分显示，对照组治疗后发生OCD15例（33．3％），治疗组治疗发生 OCD 9例（20％）；MMSE 评分显示，对照组治疗后发生 OCD 15例（33．3％），治疗组治疗后发生 OCD 9例（20％）。PQRS 评分显示 OCD 发生率明显高于 MMSE 评分（P ＜0．05）。3）Western blotting 结果显示：与 T0相比，2组 T1、T2、T3及 T4时间点 PI3K、pAKT、bcl 水平明显降低，而 bax 水平明显升高，其中各时间点对照组各标志性蛋白水平变化的趋势较治疗组明显（P ＜0．05）。结论：醒脑静对老年中风患者中风后认知功能的恢复作用显著，此机制可能与介导 PI3K／AKT 信号通路的标志性蛋白表达水平有关。
关键词： 醒脑静 认知功能 中风 PI3K/AKT 信号通路 -
PI3K／Akt 信号通路介导电针促进血管生成的研究进展
有效的促进损伤的愈合是一项有意义且具有挑战性的工程，许多临床工作者提出了不同的治疗手段，其中，电针傍刺是简便易行且行之有效的一种方法，并且电针被认为可通过活化 PI3K／AKT 信号通路达到加速损伤组织愈合目的，本文对 PI3K／Akt 信号通路介导电针促进血管生成进行了深入的研究。此研究将对糖尿病性皮肤损害，老年性，难治性溃疡等的中医电针治疗提供理论帮助。
关键词： 电针 PI3K/AKT 信号通路 损伤修复 血管再生 -
紫草素对脑胶质瘤干细胞干性维持的相关研究
目的：研究紫草素对脑胶质瘤干细胞(GSCs)干性维持的影响及相关分子机制。方法应用免疫荧光方法对分离提取的细胞球进行干细胞表面标志性分子 CD133和 nes-tin 的检测；紫草素(2μmol·L -1)处理 GSCs 12、24和48 h后,光镜下观察紫草素对 GSCs 悬浮细胞球形态的影响；采用亚球形成实验评估紫草素对 GSCs 自我更新能力的影响；应用 Western blot 方法检测紫草素作用下 GSCs 干细胞标志分子 CD133的表达变化,同时检测紫草素作用下,GSCs 中PI3K、p-PI3K、Akt 和 p-Akt 的表达变化；联合应用胰岛素样生长因子-1(IGF-1)后检测紫草素作用下,GSCs 干性维持的改变。结果分离提取的细胞球表面 CD133和 nestin 呈阳性表达；紫草素能够明显抑制 GSCs 悬浮细胞球的形态和二代细胞球的形成,同时能够降低 CD133的表达；与对照组相比,紫草素作用下,GSCs 中 PI3K 和 Akt 的表达无变化,p-PI3K 和 p-Akt 的表达呈现药物时间依赖性明显下降；此外, IGF-1能够明显改善紫草素对 GSCs 干性维持的抑制作用。结论紫草素能够明显抑制 GSCs 的干性维持,其机制可能与 PI3K/ Akt 信号通路有关。
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丹酚酸A对异丙肾上腺素致小鼠心肌缺血的保护作用及其机制
目的：丹酚酸 A 是我国传统中药丹参中提取的主要水溶性成分之一，本研究探讨了丹酚酸 A 抗异丙肾上腺素诱导的小鼠心肌缺血的作用及其机制。方法采用皮下注射异丙肾上腺素（isopropranol，ISO）8 mg·kg －1致小鼠心肌缺血模型，从动物死亡率、心电图、心脏指数、血清心肌酶谱以及病理切片评价丹酚酸 A 对小鼠心肌的保护作用，并从抗氧化、炎症以及细胞凋亡通路探讨其作用机制。结果丹酚酸 A 能够剂量依赖性地增强心肌缺血小鼠的心脏功能，减少心肌损伤酶的漏出，改善缺血心肌的病理变化，具有明显的心肌保护作用。丹酚酸 A 能降低心肌炎症因子白细胞介素-6（interleukin-6，IL-6）、肿瘤坏死因子-α（tumornecrosis factor-α，TNF-α）的水平，减少 ISO 损伤引起的心肌细胞凋亡，增加抗凋亡蛋白 Bcl-2表达，降低促凋亡蛋白 Bax 表达，
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激活 PI3K／Akt 信号通路抗少突胶质细胞凋亡的研究
目的探讨在脑室周围白质软化的早产大鼠中，脑组织 PI3K/Akt 通路的磷酸化激活情况，以及神经生长因子是否有抗少突胶质细胞凋亡的作用。方法本实验研究在早产大鼠脑室周围白质软化后，脑组织中少突胶质细胞的凋亡情况。给予神经生长因子，比较脑组织中 Akt 磷酸化激活情况及相应少突胶质细胞凋亡改变。结果早产大鼠脑损伤后，脑组织中少突胶质细胞凋亡急剧增加，给予神经生长因子后，脑组织中 Akt 磷酸化激活明显增加，相应少突胶质细胞凋亡明显减少。结论神经生长因子对脑损伤的保护机制与其增强 PI3K/Akt 信号转导通路的激活有关，激活 PI3K/Akt 信号转导通路可防治脑损伤刺激后的少突胶质细胞的凋亡。
关键词： 神经生长因子 PI3K/AKT 信号通路 少突胶质细胞 早产 大鼠 -
PTEN 通过拮抗 PI3K/Akt 信号通路抑制神经干细胞增殖
目的：探讨 PTEN 抑制神经干细胞增殖的作用,以阐明是否可以通过抑制 PTEN 蛋白表达来促进神经干细胞增殖。方法取新生24 h 昆明小鼠海马组织,分离培养原代神经干细胞,并采用免疫荧光检测鉴定；将所培养的传代神经干细胞随机分组：正常组、缺血模型组、低氧组(低氧+缺血模型组)、Lip2000组(低氧+缺血模型组+Lip2000空转染组)、PTEN 转染组(低氧+缺血模型组+Ad5-PTEN 转染组)、PTEN 干扰组(低氧+缺血模型组+ Lip2000+PTENsiRNA 干扰组),检测0、6、24、36、48 h 不同时间点各组神经干细胞的增殖情况,同时检测 PTEN 转染后 PTEN蛋白在各组神经干细胞的表达情况,以及对 PI3K-Akt 信号通路上标志性蛋白表达的影响。结果免疫荧光检测Nestin 以鉴定神经干细胞球,在荧光显微镜下观察到绿色明亮且典型的细胞球,球内可见清晰结构。MTT 测定发现低氧组、Lip2000组培养36 h 时神经干细胞出现明显增殖,与模型组、PTEN 转染组及 PTEN 干扰组相比,差异有统计学意义(P <0.05),其中 PTEN 干扰组的细胞增殖又较模型组、PTEN 转染组明显,差异亦有统计学意义(P <0.05)；与正常组细胞比较,模型组与 PTEN 转染组的 PTEN 表达升高(P <0.05),且均较正常组降低(P <0.05),其中低氧组、Lip2000组与 PTEN 干扰组降低的趋势相当(P >0.05)。PTEN 质粒转染后各组总的 Akt 和 bad 未出现明显变化,但是与正常组比较,模型组与 PTEN 转染组的 PI3K、p-Akt、p-bad 表达降低(P <0.05),其中 PTEN 转染组的变化较为明显。低氧组、Lip2000组与 PTEN 干扰组的 PI3K、p-Akt、p-bad 表达升高(P <0.05)。结论低氧有助于促进神经干细胞增殖,PTEN 对 PI3K/Akt 的抑制作用可能是成体神经干细胞增殖受阻的关键因素。
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COMMD7基因活化 PI3K/AKT 信号通路促进 HepG2细胞增殖转移的分子机制研究
目的：探索肝癌相关基因 COMMD7促进 HepG2细胞增殖转移的分子机制。方法设计针对 COMMD7基因的特异性 siRNA（small interference RNA）转染人类肝癌细胞株 HepG2，作为干扰组（Si-HepG2）；并设置 PTEN 抑制剂处理组（Si ＋BpV-HepG2）；空白对照组（HepG2）；空载体对照组（N-HepG2）。qRT-PCR 检测转染后各组 COMMD7、PTEN 基因 mRNA 的表达变化；Western blot 检测各组 COMMD7、PTEN、p-AKT 和 AKT 蛋白的表达变化；MSP 法检测 PTEN 基因甲基化水平；CCK8法检测细胞增殖能力；Transwell 实验检测细胞在转染前后转移及侵袭能力的改变。结果siRNA-COMMD7转染 HepG2细胞后，qRT-PCR 检测结果显示，与空白对照组及空载体对照组相比较干扰组 COMMD7基因的表达量降低89．9％，PTEN 基因的表达量升高2．841倍，差异均有统计学意义（P ＜0．05）；Western blot 检测结果显示，siRNA 干扰组 COMMD7表达明显降低，PTEN 表达升高；下游 p-AKT 表达受到显著抑制；PTEN 抑制剂处理组 PTEN 表达受到显著抑制，下游 p-AKT 的表达明显增强；MSP 法检测结果显示，干扰组与空白对照组及空载体对照组比较，PTEN 发生明显的去甲基化，表明抑制 COMMD7表达可诱导 PTEN 去甲基化。CKK8实验结果显示，干扰组细胞较空白对照组、空载体对照组和 PTEN 抑制剂处理组增殖速度明显降低，差异均有统计学意义（P ＜0．05）；Transwell 实验实验结果显示，干扰组穿膜细胞数（17．4±2．7），较空载体对照组（36．2±3．2）、空白对照组（41．6±4．5）及 PTEN 抑制剂处理组（47．6±1．8）明显减少，差异均有统计学意义（P ＜0．05）。结论siRNA 干扰下调 COMMD7基因的表达，可诱导 HepG2细胞内抑癌基因 PTEN 的去甲基化，增加 PTEN 蛋白的表达而抑制 PI3K／AKT 信号通路，以降低 HepG2细胞的增殖、迁移及侵袭能力。
关键词： 肝细胞癌 COMMD7 PI3K/AKT 信号通路 PTEN 去甲基化
