一种新的可杀灭肺炎链球菌的酶-Pal酶

上颌窦炎及咽炎患者肺炎链球菌带菌及耐药性调查

目的调查急慢性上颌窦炎及咽炎患者肺炎链球菌带菌及耐药情况. 方法用E-test法及纸片扩散法测定耐药情况. 结果 86株肺炎链球菌中,对青霉素敏感64株(74.4%),低度耐药18株(20.9%),高度耐药4株(4.7%),青霉素耐药菌株对红霉素、氯霉素、复方新诺明及四环素的耐药率比青霉素敏感株高,所有菌株对万古霉素敏感. 结论了解细菌耐药性的变化是合理应用抗生素的重要依据.

美国科学家绘制出肺炎链球菌基因全图

123株肺炎链球菌血清分型及耐药性研究

目的 了解成都地区123株肺炎链球菌(Streptococcus Pneumoniae,S.p)对常用抗菌药物的耐药性及血清分型.方法 用Kirby-Bauer纸片扩散法测定S.p对6种抗菌药物的敏感性,用荚膜肿胀试验进行血清分型.结果 123株S.p中,耐阿奇霉素发生率为100%;对米诺环素、复方新诺明、氯霉素、利福平、氧氟沙星的耐药率分别为65.04%、78.05%、19.51%、0.81%、0;血清分型共涉及11个血清型/群,主要集中在19、6、14、15、23血清群,5株S.p未能分型,多重耐药菌株分布在6、19血清群.结论 S.p耐药严重,且大多数菌株呈多重耐药趋势:血清分型居前6位的是19F、6、14、15B/C、23F、19A,尤其是多重耐药株以6、19血清群为主.

上海市某区老年人肺炎链球菌血清抗体水平调查

目的 了解上海市某区无肺炎疫苗免疫史的老年人肺炎链球菌血清抗体水平,探寻老年人肺炎链球菌抗体水平可能的影响因素.方法 选择2013年7月底至11月中旬体检的60岁以上无肺炎疫苗免疫史的老年人开展问卷调查,并采集血清检测肺炎链球菌抗体.采用Logistic回归方法分析影响肺炎链球菌抗体水平的因素.结果 在590名老年人中,肺炎链球菌抗体总阳性率为7.3％;其中吸烟者和非吸烟者分别为4.5％、7.6％,有、无哮喘者分别为12.5％、7.1％,2012年起患过、未患肺炎者分别为7.7％、7.3％;近一年有、无感冒史者分别为9.3％、5.9％.Logistic回归分析未发现调查的相关因素对肺炎链球菌抗体阳性率有显著影响.结论 全区无肺炎疫苗免疫史的老年人肺炎链球菌抗体阳性率整体处于较低水平.

上呼吸道感染患儿肺炎链球菌血清群/型及耐药分析

目的 了解患上呼吸道感染的0～5岁儿童肺炎链球菌的血清群/型及其对抗生素耐药情况.探讨肺炎链球菌疫苗在中国儿童使用的意义.方法 取患儿鼻咽分泌物,分离出137株肺炎链球菌.采用荚膜肿胀法(Quellinng test)进行血清群/型分析.E-test及K-B纸片扩散法检测对青霉素等13种抗生素的敏感性.结果 疫苗相关血清型占63%,常见的血清群/型为19、6、23、14.青霉素不敏感率为33%,较往年增高.青霉素耐药菌株对头孢类抗生素有交叉耐药性,红霉素、阿奇霉素耐药率达94%,应引起临床高度重视.结论 疫苗相关血清群/型在0～5岁儿童覆盖率较高,肺炎链球菌疫苗的使用有利于降低儿童肺炎链球菌感染的发病率,有助于减少抗生素耐药的产生.

河北省2014年43株侵袭性肺炎链球菌血清型分析

目的 利用分子生物学方法了解河北省侵袭性肺炎链球菌血清型的流行特征.方法 收集河北省儿童医院的43株侵袭性肺炎链球菌,应用聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)检测cpsA基因确定种属,应用多重PCR检测血清型.结果 在43株侵袭性肺炎链球菌中,19F型11株(25.58％),19A型7株(16.27％)、6A/6B型6株(13.95％)、14型5株(11.62％)、1型4株(9.30％),其余血清型数量较少.结论 河北省侵袭性肺炎链球菌的血清型别呈现多样性特点,19F型和19A型为主要血清型别.建议结合优势血清型、针对不同人群特点合理应用肺炎链球菌疫苗,同时应关注肺炎链球菌血清型替换现象.

241株肺炎链球菌血清分型及耐药性研究

目的 了解肺炎链球菌(Strptococcus pneumoniae,S.p)对常用抗菌药物的敏感性及血清型构成.方法 采用纸片扩散法检测241株S.p对6种常用抗菌药物的敏感性；采用荚膜肿胀试验对菌株进行血清学分型.结果 241株S.p对利福平、米诺环素、氧氟沙星、复方新诺明、阿奇霉素、氯霉素的耐药率分别为0.41％、77.18％、0％、78.00％、95.44％、22.00％.229株S.p可分为24个血清型/群,主要的流行血清型/群为19F、6B、19A、23F、15、14、6A、3、6C;12株S.p未能分型.多重耐药菌株分布在6B、19A、19F、23F血清型.结论 S.p的耐药情况严重,大多数菌株呈多重耐药特征.

世界卫生组织对肺炎结合疫苗的意见书

肺炎链球菌能够引发肺炎、脑膜炎和菌血症发热等严重疾病,也能引发较轻和常见的中耳炎、鼻窦炎和支气管炎等疾病.

中国儿童肺炎链球菌疾病研究回顾

肺炎链球菌(Streptococcuspneumoniae,S.p)又名肺炎(双)球菌,是儿童社区获得性感染的首位致病病原.适当的疫苗可有效预防其感染,并可以降低儿童人群鼻咽部S.p携带率.20世纪60年代中期以前,国内对S.p疾病的研究表明,S.p性脑膜炎占化脓性脑膜炎(化脑)的11.1%～22.1%,是仅次于流行性脑脊髓膜炎的第2种常见化脑(不计入结核性脑膜炎).S.p是小儿肺炎的重要病原之一,其所致的大叶性肺炎在小儿并不少见.S.p还是小儿脓胸与败血症的重要病原之一.1980年后的病原学和流行病学研究表明,S.p是8.0%～21.0%化脑的病原.以合肥市为例,＜5岁的儿童S.p脑膜炎的发生率为1.5/10万.S.p仍然是儿童肺炎的常见且重要的病原.中国儿童中S.p血清型分布与国外不同,上呼吸道感染儿童中分离的菌株血清型＜50%包括在欧美已推广应用的7价S.p结合疫苗内,开发适合中国国情的S.p疫苗还需要进一步研究血清型分布情况.中国儿童人群中S.p的耐药形势已经非常严峻,S.p的多重耐药状况也很常见.总之,中国儿童中S.p的疾病负担尚缺乏足够的确切资料,为了证明S.p在儿童感染中的作用,还有很多工作要做.

泉州地区19F型肺炎链球菌耐药性分析及多位点序列分型研究

目的 了解泉州地区临床分离株19F血清型肺炎链球菌(Streptococcuspneumoniae,SP)的耐药特征及多位点序列分型. 方法 19F血清型采用多重PCR进行筛选分析,采用OP纸片法进行药敏试验测定其MIC值,采用PCR方法检测耐药基因ermB,mefE,mefA及转座子家族Tn1545转座酶基因,采用多位点序列分型(MLST)技术分析菌株序列型(ST). 结果 52株SP均表现出对利奈唑胺、替考拉宁、万古霉素的敏感;对红霉素、克林霉素、四环素、复方新诺明、青霉素G、阿莫西林、头孢噻肟、头孢吡肟、美洛培南、氯霉素、左旋氧氟沙星的耐药率分别为98.1％、98.1％、98.1％、92.3％ 、41.8％ 、38.4％ 、29.1％、22.6％ 、13.5％、9.6％、7.7％. ermB、int Tn916/Tn1545、mefE、mefA基因检出率分别为为98.1％、94.2％,75.0％、65.4％,4种耐药基因同时检出占57.7％,对红霉素、克林霉素、四环素、复方新诺明的耐药率为100％.52株SP MLST分型共分出 14种STs,存在2个优势型,分别为ST271(占38.5％)和ST320(占19.2％),其中一个新的ST已被MLST数据库录入为ST10228. 结论 泉州地区SP耐药较为严重,且存在多重耐药,19F血清型ST271和ST320为主要流行型.

铜绿假单胞菌及肺炎链球菌诱发AECOPD大鼠血清PCT和IL-6水平的变化及意义

目的 探讨铜绿假单胞菌、肺炎链球菌分别诱发慢性阻塞性肺疾病急性加重期(AECOPD)不同时间点血清降钙素原(procalcitionin,PCT)和白介素6(interleukin-6,IL-6)的动态变化及意义. 方法 SPF级SD大鼠50只,随机选取10只作为健康对照组,其余大鼠采用单纯炯熏法建立COPD模型.在此模型上通过气管插管分别接种铜绿假单胞菌和肺炎链球菌混悬液建立AECOPD大鼠模型.所有实验大鼠分别于接种0、6、12、18、24 h时检测血清中PCT和IL-6浓度;24 h后处死大鼠,取右肺组织行病理组织学检查,取左肺做肺组织匀浆进行培养细菌. 结果 COPD组,铜绿假单胞菌组和肺炎链球菌组SD大鼠肺组织病理切片均可见不同程度的炎性细胞浸润、支气管壁破坏及肺泡融合.铜绿假单胞菌组和肺炎链球菌组肺组织匀浆分别培养出铜绿假单胞菌和肺炎链球菌.接种0h时血清PCT,COPD组(572.9±13.6)pg/ml,铜绿假单胞杆菌组(592.4±27.5)pg/ml,肺炎链球菌组(595.6±31.9)pg/ml,健康对照组(462.4±46.8)pg/ml,差异有统计学意义(P＜0.05);接种12 h时PCT浓度达峰值,铜绿假单胞杆菌组为(659.9±26.0)pg/ml,肺炎链球菌组为(605.1±34.5)pg/ml.铜绿假单胞杆菌组血清PCT在接种细菌后不同时间点质量浓度与肺炎链球菌组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).接种细菌0h时血清IL-6,COPD组(134.3±7.0) pg/ml,铜绿假单胞杆菌组(135.3±10.7)pg/ml,肺炎链球菌组(133.8±9.0)pg/ml,健康对照组(102.8±7.2)pg/ml,差异有统计学意义(P＜0.05).接种6h时IL-6浓度达峰值,铜绿似单胞杆菌组为(192.1±12.6)pg/ml,肺炎链球菌组为(184.5±8.2)pg/ml.接种细菌后不同时间点铜绿假单胞杆菌组血清IL-6浓度与肺炎链球菌组比较差异无统计学意义(P＞0.05). 结论 铜绿假单胞杆菌及肺炎链球菌感染SD大鼠血清PCT和IL-6水平升高,检测血清PCT水平可为AECOPD细菌感染类型的判定提供可靠证据,检测血清IL-6水平有利于AECOPD的早期诊断.

肺炎链球菌Tpx蛋白的原核表达、纯化及活性分析

目的 原核表达、纯化肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)Tpx蛋白并测定其活性. 方法 利用生物信息学方法分析Tpx蛋白的生物学特性.设计特异性引物,PCR扩增Tpx基因并对进行双酶切,酶切片段连接到表达质粒pET28a.将重组质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3),利用IPTG诱导重组Tpx蛋白表达,使用Ni2+亲和层析进行纯化,采用氧化铁二甲酚橙法(FOX)测定其活性. 结果 生物信息学分析Tpx蛋白无信号肽,无跨膜结构域.α-螺旋、延伸主链、β-转角和无规卷曲的含量分别为30％、27.6％、11.6和30.7％.晶体结构在蛋白结构数据库(PDB)中的登陆号为1psq.1.A.PCR扩增Tpx基因片段大小为492 bp,连接到pET28a后获得重组质粒pET28a-Tpx.重组质粒转化DE3后经IPTG诱导表达分子质量单位约为22 ku的重组蛋白,经亲和层析得到高纯度的重组Tpx蛋白,该蛋白能分解H2O2和叔丁基过氧化氢(t-BHP). 结论 成功构建pET28a-Tpx质粒,表达的重组Tpx蛋白具有氧化酶活性,为研究肺炎链球菌的抗氧化机制奠定了实验基础.

耐红霉素肺炎链球菌的分子生物学研究

目的 研究耐红霉素肺炎链球菌的分子生物学特点. 方法 社区获得性肺炎呼吸道标本分离的肺炎链球菌共45株,进行抗生素药物敏感性试验,对耐药菌株采用PCR方法检测红霉素的耐药基因ermA/ermB/mefA,同时采用脉冲场凝胶电泳技术和青霉素结合蛋白基因多态性追踪耐药菌株之间的同源性,以获得耐药菌株的分子流行病学特点.结果 45株肺炎链球菌中对红霉素耐药24株,均为多耐药肺炎链球菌;青霉素耐药14株,其中11株(78.6%)同时耐红霉素.22株(92%)的红霉素耐药株为MLS表型,即同时耐克林霉素,2株为M型耐药.经PCR扩增,20株(83.3%)具有ermA/B基因,6株(25.0%)同时有erm和mef基因,2株(8.3%)只有mef基因,2株未能检测到erm或mef基因.脉冲场凝胶电泳和青霉素结合蛋白基因多态性检测未发现不同地区相同的耐药克隆株. 结论 erm基因编码的核糖体突变是肺炎链球菌耐红霉素的主要机制,本研究未发现不同地区相同的耐药克隆株.

鼻腔滴注法建立小鼠肺炎链球菌性脑膜炎模型

目的 鼻腔滴注法建立小鼠肺炎链球菌性脑膜炎模型,为研究肺炎链球菌致脑膜炎的分子机制奠定基础.方法 将冻存的TIGR4在新鲜TSA血平板上培养16 h～18 h后,刮取细菌并稀释成3种不同密度的菌液,每种密度分成2份,其中1份加入一定量的透明质酸酶,另1份不加.对小鼠行浅麻醉,用卡介苗注射器将上述菌悬液缓缓滴入小鼠鼻腔,待其自动吸入,每只小鼠50 μl.每天观察小鼠情况,分别于感染后24、48和72 h处死小鼠,取心脏血和一半脑组织匀浆,做细菌计数,另一半脑组织用于组织病理学检查.结果 加透明质酸酶的TIGR4 3个剂量组小鼠脑膜炎发生率分别为20.00%、65.00%和46.67%,对照组分别为13.33%、53.33%和66.67%,差异无统计学意义(P=1.000 0);其中3×107CFU组和3×108CFU组差异无统计学意义(P=0.462 1),两组合并后与3×106CFU组差异有统计学意义(P =0.019 6).结论 1)透明质酸酶不能促进鼻腔滴注TIGR4致小鼠脑膜炎的发生;2)小鼠脑膜炎的发生率与鼻腔感染TIGR4剂量有关,适宜剂量为3×107CFU,低于该剂量脑膜炎的发生率显著降低.

广东省575株肺炎链球菌的毒力因子psaA、ply基因检测分析

目的 采用PCR检测肺炎链球菌(S.pn)毒力基因psaA和ply,研究分析两个毒力基因的特异性,为S.pn临床诊断提供依据. 方法 对广东省12家医疗机构诊断为S.pn感染患者的654份标本,经过细菌培养和乳胶凝集试验筛选出575株,以psaA、ply基因核心区域序列设计合成扩增引物,以抽提的S.pn分离株DNA为模板,采用常规聚合酶链反应(PCR)扩增目标基凶psaA、ply片段,长度分别为838 bp和209 bp,调查分析不同来源标本的分离株psaA和ply基因检出率;采用乳胶凝集试验与多重PCR分型,比较两种结果中S.pn菌株psaA和ply检出率差异,以及广东S.pn主要血清型与非主要血清型菌株的psaA和ply检出率情况. 结果 经乳胶凝集试验鉴定为S.pn的560株菌株中,psaA和ply基因检出率分别为78.21％和83.57％,ply基因检出率高于psaA基因,psaA基因阳性的S.pn菌株,其ply基因均阳性;来源于血液和脑脊液标本的S.pn分离株的psaA和ply基因检出率分别为93.18％和95.45％,脓液标本分离的S.pn菌株psaA和ply基因检出率为100％.在荚膜肿胀反应和多重PCR检测为S.pn可分型血清型菌株中,前者psaA和ply基因阳性率分别为93.90％和98.57％,后者为96.34％和98.31％;而在多重PCR检定为不可分型血清型菌株中,psaA和ply基因检出率分别为47.06％和57.84％,显著低于荚膜肿胀试验的68.59％和74.64％,但ply基因检出率也均比psaA高;可分型血清型中主要血清型菌株的psaA和ply基因检出率高于非主要血清型. 结论 广东地区S.pn临床分离株中ply基因检出率比psaA高,保守性高,但其他链球菌亦能扩增出ply基因从而出现假阳性,因此,对于S.pn菌株的鉴定,采用PCR同时扩增psaA和ply基因,并结合临床常规实验,鉴定更为可靠.此外,血液和脑脊液psaA和ply基因阳性率高可能与psaA和ply是S.pn入侵血和脑的关键因子有关.

肺炎链球菌重组蛋白LytA体外抗菌效应探讨

目的 构建肺炎链球菌(ATCC49619)自溶素lytA基因的原核表达载体,并在大肠埃希菌表达系统中表达,获取LytA重组蛋白(rLytA),初步探讨其体外抗菌效应. 方法 根据GenBank中的肺炎链球菌M66菌株lytA基因序列(FN549899.1)设计合成特异性引物,采用PCR技术从肺炎链球菌ATCC49619标准株基因组中扩增lytA基因序列,分别构建克隆载体PGM-T/lytA和表达载体pET32a(+)/lytA,将pET32a(+)/lytA转化至感受态细胞E coli BL21(DE3),经IPTG诱导后用透析袋等电点洗脱技术纯化目的蛋白rLytA;采用微量肉汤稀释法测定rLytA和青霉素G对肺炎链球菌及其青霉素G耐药株的低抑菌浓度(MIC),动态测定肺炎链球菌及其耐药株对rLytA和青霉素G的药物敏感性,评价rLytA的体外抗菌活性. 结果 成功构建了原核表达载体pET32a(+)/lytA,获得的rLytA对肺炎链球菌标准株和青霉素G耐药株的MIC分别为8μg/ml和16 μg/ml;以rLytA对标准株及耐药株MIC的3倍浓度,分别作用于标准株及耐药株,与未加药物的对照组相比,rLytA作用于标准株3h后细菌数显著减少(P＜0.05),且效果持续至7 h(P＜0.05);对青霉素G耐药株作用3h时显示具有抑菌效果(P＜0.01),且抑菌作用持续至7 h(P＜0.01). 结论 一定浓度的rLytA对肺炎链球菌标准株和耐药株均显示出抑菌作用,且持续时间长,具有作为抗菌药物的可能性.

肺炎链球菌不同生长时间自溶素lytA基因表达的差异性分析

目的 探讨肺炎链球菌lytA基因在细菌生长的不同时间点的表达差异. 方法 根据GenBank中肺炎链球菌M66株的lytA基因序列(FN 549899.1)设计并合成引物,选取17个生长时间点,分别提取肺炎链球菌的总RNA,采用实时荧光定量PCR技术(QRT-PCR)检测lytA基因在不同生长时间点的相对表达量,利用溶解曲线观察扩增反应特异性,采用双标准曲线法进行数据分析. 结果 经过内参基因16S RNA校正后,肺炎链球菌lytA基因相对表达量从生长的18 h-96 h呈现逐渐升高的趋势,96 h时达到高峰,与其他时间点比较差异有统计学意义(P＜0.05).之后开始下降,144 h生长点出现第二次升高趋势. 结论 不同生长时间点肺炎链球菌lytA基因表达量存在差异,与细菌培养时菌落表现的自溶现象相关,为进一步研究lytA基因与肺炎链球菌自溶现象的相关性奠定了基础.

肺炎链球菌自溶素LytA研究进展

自溶素是一种内源性酶,广泛存在于细菌表面,参与细菌分裂、细胞黏附、细菌自溶以及细胞壁的更新等重要生理活动.本文对肺炎链球菌自溶素LytA结构、功能、调控及应用研究现状进行了综述.

神经内科住院患者感染肺炎链球菌耐药基因分析

目的 了解神经内科患者医院感染病原菌分布情况,检测肺炎链球菌的耐药基因,为临床合理用药提供依据.方法 收集本院神经内科住院患者创口无菌棉拭子及创口周围标本,进行肺炎链球菌的培养、分离及鉴定;采用K-B法分析肺炎链球菌的耐药性;采用PCR扩增法检测肺炎链球菌的耐药基因分布情况. 结果 共分离病原菌377株,主要感染类型为革兰阳性菌(占63.13％),其次为革兰阴性菌(占36.87％).在238株革兰阳性菌中,肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌、酿脓链球菌、屎肠球菌以及其他革兰阳性菌的分离率分别为23.87％、14.06％、10.08％、6.90％和8.22％;在139株革兰阴性菌中,肺炎克雷伯菌、鲍氏不动杆菌、阴沟肠杆菌、铜绿假单胞菌以及其他革兰阴性菌的分离率分别为11.94％、9.02％、6.10％、2.92％和6.90％;分析90株肺炎链球菌的耐药性,其对红霉素耐药率为100.00％,对青霉素、四环素、左氧氟沙星的耐药率分别为32.22％、74.44％、16.67％,对万古霉素耐药率为0.PCR检测肺炎链球菌耐药基因erm、tetM、mefA、gyrA和pbp2b基因大小分别为616、406、346、382和682 bp.各耐药基因的检出率分别为62.86％、71.88％、30.77％、10.88％和28.91％. 结论 神经内科感染病原菌以革兰阳性菌为主,其中又以肺炎链球菌居多.肺炎链球菌的tetM基因和erm基因的检出率较高,治疗肺炎链球菌感染应首选万古霉素.