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帕金森病大鼠模型的建立
目的 应用6-羟多巴胺建立帕金森病大鼠模型并对其进行行为学评估.方法 采用立体定向技术,将6-羟多巴胺注入大鼠前脑内侧束和腹侧被盖区,观察阿朴吗啡诱发大鼠旋转行为的变化.结果 50只大鼠中有39只(78%)经阿朴吗啡诱导后恒定向健侧旋转(旋转速度>7 r/min),帕金森大鼠模型复制成功.结论 成功建立帕金森病大鼠模型,为进一步开展细胞移植治疗帕金森病的实验研究奠定基础.
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应用6-羟多巴胺建立鼠帕金森病动物模型的研究
目的:建立稳定的类似人类帕金森病病理改变的PD动物模型.方法:于黑质致密部,黑质旁部及纹状体区等不同部位采用不同剂量神经毒素6-羟多巴胺注射,造成黑质多巴胺神经元不同程度损伤.运用免疫组织化学方法,对各种不同程度损伤的帕金森病鼠黑质区和纹状体TH阳性神经元及神经纤维进行计数,并观察其与旋转行为,注射部位及剂量的关系.结果:(1).单侧黑质致密部6-羟多巴胺8 μg注射,可以造成注射侧黑质区TH神经元95%以上的缺失.(2).单侧黑质旁部6-羟多巴胺8 μ g注射,可以造成注射侧黑质区TH神经元70%以上的缺失.(3).单侧纹状体区6-羟多巴胺三点注射,可造成注射侧黑质区TH神经元30%～40%的缺失.结论:6-羟多巴胺不同部位和不同剂量注射,可以建立模拟临床上不同病程时期PD动物模型,其症状稳定,为帕金森病的发病机制的研究,药物治疗及各种移植治疗提供了条件.
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α-硫辛酸对6-羟多巴胺诱导PC12细胞损伤的保护作用
目的:研究α-硫辛酸(LA)对6-羟基多巴胺(6-OHDA)诱导PC12细胞损伤的保护作用.方法:体外培养PC12细胞,通过CCK-8实验筛选出诱导PC12细胞建立帕金森病(PD)细胞模型的6-OHDA佳浓度及对PD细胞模型保护的LA佳浓度,Western blot法检测LA预处理后对PD模型细胞中酪氨酸羟化酶(TH)表达的影响.结果:75μmol/L 6-OHDA作用于PC12细胞共培养18h后,PC12细胞活力下降35％;而经10 μmol/L LA预处理PC12细胞1h后,再用75 μmol/L 6-OHDA与PC12共培养18 h,则PC12细胞活力下降20％,提示75 μmol/L 6-OHDA与10 μmol/L LA为佳处理浓度;经过LA的干预,6-OHDA诱导PC12建立的PD细胞模型中TH表达显著升高(P＜0.05).结论:LA对6-OHDA诱导的PC12细胞损伤具有保护作用.
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硫辛酸对6-羟多巴胺诱导的帕金森模型大鼠的保护作用
目的:探讨硫辛酸(LA)对6-羟多巴胺(6-OHDA)诱导的帕金森病(PD)模型大鼠的神经保护功能.方法:健康雄性SD大鼠30只,随机分为假手术组、PD模型组和PD干预组,采用立体定位技术向PD模型组和PD干预组大鼠右侧大脑纹状体注射6-OHDA诱导建立PD大鼠模型,假手术组注射抗坏血酸的生理盐水;术后第4周开始,PD干预组腹腔连续注射LA14d,PD模型组和假手术组注射生理盐水;建模后第4周和第7周进行阿扑吗啡(APO)诱导的旋转行为学检测,建模后第4、5、6和7周通过圆筒实验测试大鼠左前肢的使用率;行为学检测结束后,免疫组化染色观察各组大鼠酪氨酸羟化酶(TH)阳性细胞表达.结果:注射APO后,PD模型组和PD干预组均出现向健侧旋转的行为,在第4周时旋转速度均≥3 r/min,表明PD大鼠复制成功;LA干预后(造模后第7周),PD干预组比PD模型组大鼠的旋转速度明显减慢,亦比本组干预前(第4周)减慢,差异具有统计学意义(P＜0.05);与假手术组大鼠比较,造模后第5周开始,PD模型和PD干预大鼠的左前肢使用率减少(P＜0.05),PD干预组大鼠左前肢的使用率比PD模型组增加(P＜0.05);免疫组化示,PD干预组TH染色阳性细胞数较PD模型组多.结论:LA对6-OHDA诱导的PD模型大鼠的黑质多巴胺能神经元具有神经保护作用.
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香椿子多酚通过p38MAPK通路抑制6-OHDA诱导的神经炎症反应
目的:研究香椿子多酚(PTSS)通过调节p38促分裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路抑制神经毒素6-羟多巴胺(6-OHDA)所诱导的PC12细胞帕金森病(PD)模型的神经炎症反应.方法:将PC12细胞分为四组:对照组、模型组(6-OHDA 100 μmol/L)、PTSS低剂量组(6-OHDA+ PTSS 100 μmol/L)、PTSS高剂量组(6-OHDA+ PTSS 200 μmol/L).倒置显微镜下观察各组PC12细胞形态学的变化;采用细胞计数CCK-8法检测细胞活性;免疫细胞化学染色法和Western Blot检测诱导性一氧化氮合酶(iNOS)、环氧化酶-2(COx-2)、核因子κB p65(NF-κB p65)、p38 MAPK和p-p38 MAPK的表达变化.结果:(1)细胞形态观察显示:与对照组相比,6-OHDA模型组细胞胞体出现空泡,皱缩变形颜色暗淡,部分细胞折光性增高,细胞死亡数目明显增多,细胞聚集成片.PTSS低剂量组,细胞状态明显改善.(2)模型组PC12细胞活力显著降低,而PTSS能有效抑制PC12细胞活力的降低(P＜0.05),PTSS低剂量组比高剂量组改善效果更为显著(P＜0.05).(3)与对照组比较,模型组细胞iNOS、COX-2、NF-κB p65、p38 MAPK和p-p38 MAPK表达明显升高,而PTSS组上述分子表达明显降低.结论:PTSS可有效逆转6-OHDA导致的PC12细胞损伤,其机制可能与下调p38 MAPK信号通路从而抑制神经炎症反应有关.
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香椿子多酚提取物对6-OHDA诱导的PC12细胞损伤的保护作用
目的:研究香椿子多酚提取物(polyphenols from toona sinensis seeds,PTSS)对神经毒素6-羟多巴胺(6-OHDA)诱导的PC12细胞损伤的保护作用.方法:体外培养PC12细胞,实验分为对照组、PTSS组、6-OHDA组及PTSS+ 6-OHDA组,倒置显微镜下观察各组细胞形态;MTT法检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡情况;免疫组织化学染色法检测各组细胞Caspase-3、COX-2和TNF-α的表达变化.结果:PTSS可有效地降低6-OHDA引起的PC12细胞的损伤,增加细胞存活率,减少细胞早期凋亡;降低Caspase-3、COX-2及TNF-α的表达.结论:PTSS对6-OHDA引起的PC12细胞损伤具有明显的保护作用.
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胞二磷胆碱对原代培养的中脑多巴胺能神经元的保护作用及其机制
为了研究胞二磷胆碱(citicoline,CC)对6-羟多巴胺(6-OHDA)诱导的Parkinson病体外细胞模型中的多巴胺能神经元的保护作用及其机制,本研究采用 MTT法检测细胞活力;应用Fluo3/AM荧光染料,并通过流式细胞仪检测细胞内钙离子[Ca2+]i浓度;罗丹明123检测线粒体膜电位(△ψm);罗丹明123和PI荧光双染,在荧光显微镜下观察细胞膜通透性和细胞凋亡;乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测培养上清中LDH的漏出;TH免疫组化染色鉴定多巴胺能神经元.实验分成三组:(1)对照组:即原代培养细胞;(2)6-OHDA损伤组:即原代培养细胞加6-OHDA;(3)CC保护组:原代培养细胞中分别加2、1、0.1、0.01和0.001 mmol/LCC后,再加6-OHDA.结果显示:与6-OHDA组相比,1、0.1、0.01和 0.001 mmol/LCC组细胞活力增加(P＜001);[Ca2+]i浓度下降和△ψm升高(P＜0.01);除了0.001 mmol/LCC组外,各CC组LDH漏出率明显低于6-OHDA组(P＜0.01).以上结果提示:在体外Parkinson病细胞模型中,CC可能通过保护神经元细胞膜,提高线粒体膜电位,增加细胞活力,降低[Ca2+]i浓度,减少LDH漏出等途径削弱6-OHDA的神经毒性作用,发挥其对神经元的保护作用.
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损毁单侧黑质-纹状体通路的大鼠SVZ、纹状体和黑质神经前体细胞的变化
研究成年大鼠脑室下区(SVZ)神经前体细胞(neural precursors)在黑质-纹状体通路损伤后的反应,本研究用6-羟多巴胺单侧纹状体注射以损毁黑质-纹状体通路,损毁10 d后腹腔注射BrdU,连续4 d,每日两次;在SVZ、纹状体和黑质部位用免疫组化方法检测BrdU、nestin以及GFAP阳性细胞.结果显示:(1) 6-羟多巴胺损毁黑质-纹状体通路后,伤侧SVZ的BrdU阳性细胞数明显增多,并成簇分布nestin和GFAP阳性细胞数也增多,但以GFAP阳性细胞增多明显;(2)伤侧纹状体可见大量Br-dU、GFAP以及少量nestin阳性细胞分布,而健侧只有少量GFAP阳性细胞;(3)伤侧可见BrdU阳性细胞在SVZ和纹状体之间呈条带样分布;(4)伤侧黑质除酪氨酸羟化酶阳性神经元减少外,未见BrdU、GFAP和nestin阳性细胞表达.上述结果表明,6-羟多巴胺损毁黑质-纹状体通路后,SVZ神经前体细胞活动增强,有向纹状体迁移的趋势.
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外源性kynurenic acid对大鼠黑质多巴胺能神经元损伤的保护作用研究
目的观察评价预先应用谷氨酸(Glu)受体拮抗剂kynurenic acid(KYNA)对黑质多巴胺(DA)能神经元及神经传导纤维损伤的保护性作用. 方法雌性SD大鼠40只,随机分为4组,每组10只,应用江湾I型C立体定向仪,在单侧黑质致密部及中脑被盖腹侧部, A组注射生理盐水,B组注射KYNA,C组注射KYNA和6-羟基多巴胺(6-OHDA), KYNA先于6-OHDA 30 min, D组注射6-OHDA.注射药物3 d后,进行症状观察,4周后处死大鼠.切片HE染色观察黑质细胞的形态特点,冰冻切片免疫组化特殊染色观察酪氨酸羟化酶(TH)阳性细胞及TH阳性纤维着色情况.结果正常黑质细胞体形较大,富含黑色素颗粒,可见尼氏体.TH着色结果提示B组与A组之间无显著差异,P>0.05.实验组C与A、B、D组比较均有显著性差异,P<0.01.结论外源性Glu受体拮抗剂KYNA通过阻滞Glu受体一定时间阶段内能减轻6-OHDA诱导的黑质DA能神经元毒性损害.
关键词： 帕金森病 kynurenic acid 酪氨酸羟化酶 谷氨酸 6-羟多巴胺 -
帕金森病模型大鼠腹内侧前额叶皮层神经元的活动变化
目的:观察和分析帕金森状态下腹内侧前额叶皮层中神经元的活动变化.方法:以6-羟多巴胺(6-OHDA)毁损黑质致密部(SNc)建立的PD模型大鼠为研究对象,采用玻璃微电极细胞外记录方法,记录和分析了PD状态下腹内侧前额叶皮层中神经元的电活动变化.结果:对照组与PD组大鼠腹内侧前额叶皮层神经元的放电频率分别为(2.3±0.9) Hz和(4.2±2.0) Hz.与对照组相比,PD模型大鼠腹内侧前额叶皮层神经元的放电频率显著增高(P《0.001).结论:6-OHDA单侧毁损SNc的DA能神经元后,腹内侧前额叶皮层神经元的放电频率显著增高,表明正常大鼠中黑质对腹内侧前额叶皮层起抑制性作用.
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帕金森病大鼠脚桥核中胆碱能M_2受体的表达变化及意义
目的 通过免疫组织化学方法观察胆碱能M_2受体在帕金森病(Parkinson's disease, PD)模型大鼠脚桥核(pedunculopontine nucleus, PPN)中的表达变化,探讨胆碱能M_2受体在PD发病机制及病理生理改变中的作用.方法 选用健康雄性SD大鼠16只,随机分为2组.取脑组织固定后作连续冠状冰冻切片.以鼠源M_2单克隆抗体为一抗,采用免疫组化SP法,镜下控制显色.以阳性细胞计数及平均光密度为分析指标,对M_2受体在PD模型大鼠PPN中的表达变化进行观察分析.结果 对照组大鼠PPN部位及PD大鼠未损毁侧PPN部位均表达比较丰富的M_2受体阳性细胞.PD大鼠损毁侧PPN部位M_2受体阳性细胞明显稀疏.与对照组和PD大鼠未损毁侧相比有明显差异(P<0.05).3组间阳性部位的表达强度无明显差异(P>0.05).结论 PD状态下PPN内存在表达M_2受体的神经元变性死亡或受体脱失.而其余未发生变性死亡或受体脱失的M_2受体阳性神经元其表达强度并不受影响.同时发现,影响PPN内M_2受体阳性细胞变化的因素具有单侧性.
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帕金森病模型大鼠杏仁基底外侧核神经元电活动的研究
目的 观察单侧黑质纹状体通路毁损后杏仁基底外侧核(basolateral nucleus of amygdala, BLA)投射神经元电活动的变化.方法 应用6-羟多巴胺单侧毁损黑质致密部建立帕金森病(Parkinson's disease, PD)大鼠模型.采用玻璃微电极细胞外记录法,记录BLA投射神经元的电活动.结果 对照组和PD组大鼠BLA投射神经元的放电频率分别是(0.66±0.13)Hz(0.08-2.73Hz, n=25)和(0.46±0.1)Hz(0.08-2.34Hz, n=24),PD组大鼠的放电频率较正常组降低,但无统计学差异(P>0.05).对照组大鼠96%的BLA投射神经元呈现爆发式放电,4%为不规则放电;PD组大鼠90%的投射神经元显示爆发式放电,10%为不规则放电.PD组大鼠BLA投射神经元的放电形式与对照组相比无明显差异(P>0.05).结论 帕金森病大鼠BLA投射神经元的放电频率和放电形式未发生改变.
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止颤胶囊对帕金森大鼠血清中细胞因子IL-1β和IL-6水平的影响
目的 探讨止颤胶囊对帕金森病(PD)大鼠细胞因子IL-1β和IL-6表达的影响.方法 采用立体定位法将6-羟多巴胺(6-hydroxy dopamine,6-OHDA)注入大鼠黑质部位,制备帕金森大鼠模型.实验分3组,包括正常对照组、模型对照组和止颤胶囊组.采用酶联免疫吸附试验(ELI SA)法对实验大鼠血清中细胞因子IL-1β和IL-6进行分析.结果 与正常对照组相比,止颤胶囊组血清中IL-1β、IL-6基因的表达差异无显著性.与PD模型对照组相比,止颤胶囊治疗组IL-1β和IL-6的表达均有降低.结论 止颤胶囊对PD大鼠血液中IL-1β和IL-6的表达有下调作用,表明止颤胶囊对PD有一定的治疗作用.
