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慢性饮酒及戒断对大鼠学习记忆及海马PSD-95表达的影响
目的 探讨慢性饮酒及戒断对大鼠学习记忆及海马PSD-95表达的影响.方法 36只成年雄性SD大鼠随机分为对照组、乙醇组和戒断7d组,对照组正常饮水饲养,乙醇组以6％ (v/v)的酒精作为大鼠唯一饮水来源,持续30 d,戒断7d组以6％ (v/v)的酒精作为大鼠唯一饮水来源,持续30 d后,恢复正常饮水7d.戒断症状评分评价大鼠的酒精戒断行为体征,Morris水迷宫实验观察不同组别大鼠学习记忆成绩,免疫组化和Western blot检测不同组别大鼠海马PSD-95蛋白表达的变化.结果柳田知评分显示:乙醇组显著性高于对照组(g=22.31,P＜0.01),戒断7d组显著性低于乙醇组(q=19.19,P＜0.01).Morris水迷宫实验结果显示:与对照组比较,乙醇组大鼠逃避平台潜伏期时间连续4个实验日均显著延长(qdl=5.87,qd2 =6.61,qd3 =7.54,qd4 =6.43,P均＜0.01),目标象限停留显著变短(q=17.15,P＜0.01),穿越平台明显减少(q=7.35,P＜0.01);与乙醇组比较,戒断7d组大鼠逃避平台潜伏期时间连续4个实验日均显著变短(qdl =4.12,qd2 =3.92,qd3=5.37,qd4 =4.38,P均＜0.01),目标象限停留显著延长(q =7.83,P＜0.01),穿越水下平台明显增加(g=3.55,P＜0.05).免疫组化和Western blot结果均显示:与对照组比较,乙醇组海马PSD-95的表达显著减少(g=16.49,P＜0.01),与乙醇组比较,戒断7d组海马CA1区PSD-95的表达显著升高(q =6.98,P＜0.01).结论 酒精依赖可使大鼠的学习记忆能力减退,实施戒断之后学习记忆能力可以得到改善,可能与海马PSD-95蛋白的表达变化有关.
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野生型/突变型PSD-95真核表达载体的构建及其表达
目的 构建野生型和突变型PSD-95(postsynaptic density protein 95)的真核表达质粒载体,并在COS-7细胞系中表达.方法 采用RT-PCR扩增大鼠PSD-95的cDNA,以PSD-95-GW1为模板,以PCR扩增PSD-95序列的突变体Myc-ΔSG(-SH3-GK)和Myc-ΔG(-GK),分别克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+).以脂质体法将重组质粒转入COS-7细胞,免疫印迹法鉴定PSD-95及其突变体的蛋白表达.结果 限制性内切酶酶切和测序结果表明,扩增出的野生型/突变型PSD-95基因完全正确;免疫印迹法检测表明,转染的重组质粒能在COS-7细胞中高效表达.结论 构建的PSD-95-pcDNA3.1(+)、Myc-ΔSG-pcDNA3.1(+)和Myc-ΔG-pcDNA3.1(+)重组载体在COS-7细胞系中高效地表达,为深入研究PSD-95在缺血性脑损伤中的作用及机制打下基础.
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不同时程吗啡依赖戒断大鼠海马CA1区BDNF 及PSD-95的表达
目的 观察不同时程吗啡依赖大鼠戒断1周后海马CA1区脑源性神经生长因子(BDNF)及突触后致密质95(PSD-95)的表达变化,探讨吗啡依赖戒断对海马CA1区的影响.方法 建立不同时程(1周、2周、4周)吗啡依赖大鼠模型并自然戒断1周后,应用RT-PCR方法观察海马CA1区BDNF及PSD-95的表达情况.结果 吗啡依赖1周戒断组大鼠海马CA1区的BDNF及PSD-95表达较生理盐水对照组下降(P<0.01),吗啡依赖2周戒断组大鼠海马CA1区的BDNF及PSD-95表达较吗啡依赖1周戒断组大鼠有所上升(P<0.05).但仍低于生理盐水对照组(P<0.01).吗啡依赖4周戒断组大鼠海马CA1区的BDNF及PSD-95表达较吗啡依赖1周戒断组大鼠、吗啡依赖2周戒断组大鼠均下降(P<0.01).结论 BDNF及PSD-95在吗啡依赖大鼠自然戒断1周后的海马CA1区的表达降低,吗啡依赖戒断对海马CA1区损伤明显.
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AD样大鼠模型海马内PSD-95表达与学习记忆变化的研究
目的:研究阿尔茨海默病(AD)样大鼠模型海马内突触后致密物-95(PSD-95)表达与学习记忆损伤的元素.方法:健康成年雄性SD大鼠随机分为正常对照组、模型对照组和AD模型组.AD样大鼠模型的建立采用Aβ1-40/AlC13双干预法.采用Morris水迷宫和跳台实验检测大鼠的学习记忆能力,采用刚果红染色和尼氏染色观察大鼠海马病理变化,采用免疫印迹的方法检测大鼠海马PSD-95的表达情况.结果:与正常对照组和模型对照组相比,AD模型组大鼠Morris水迷宫逃避潜伏期明显延长(P＜0.05),跳台实验的反应时间、基础错误次数和错误次数均增加,潜伏期缩短(P＜0.05).AD模型组大鼠海马可观察到明显的病理改变,正常对照组和模型对照组中则观察不到.与正常对照组和模型对照组相比,AD模型组大鼠海马PSD-95的表达明显降低(P＜0.05).结论:PSD-95在AD样大鼠海马表现为病理性低表达,并且这种病理性低表达很可能与AD样学习记忆损伤存在联系.
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PSD-95参与大鼠孕期铅暴露对子代海马突触影响的实验研究
目的:研究大鼠孕期铅暴露后子代海马突触变化与PSD-95表达改变的相关性,探讨铅暴露损伤学习记忆功能的机制.方法:通过饮用0.02％醋酸铅水溶液建立孕期铅暴露模型,利用原子吸收分光光度仪检测血铅,透射电镜技术检测海马突触密度,蛋白印记技术检测子代大鼠海马组织中VGLUT、VGAT和PSD-95的表达.结果:对照组和铅暴露组雄性21 d大鼠体重分别为(55.73±4.23)g和(56.01 ±5.97)g,无显著差异(P＞0.05);对照组与铅暴露组雄性21 d大鼠血铅分别为(10.2 ±2.1)μg/L和(301.2±34.8) μg/L,血铅水平明显升高(P＜0.01);对照组与铅暴露组雄性21 d大鼠单位面积突触数目分别为32.79±2.03和23.46±1.97,突触密度明显减少(P＜0.01);铅暴露后,VGAT的表达量没有明显变化(P＞0.05),VGLUT和PSD-95的表达量明显减少(P＜0.01).结论:PSD-95表达减少引起海马兴奋性突触数目的下降是发育期铅暴露损伤学习记忆功能的可能机制.
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NR1、NR2A与PSD-95在生后大鼠海马发育中的表达
目的:探讨N-甲基-D-天冬氨酸受体亚单位1(N-methy1-D-aspartate receptor subunit1,NR1)、N-甲基-D-天冬氨酸受体亚单位2A(N-methyl-D-aspartate receptor subunit2A,NR2A)与突触后密度蛋白-95(Postsynaptic density protein 95,PSD-95)在Wistar大鼠海马生后发育过程中的表达.方法:应用免疫荧光染色方法检测NR1、NR2A与PSD-95在生后不同时期大鼠海马CA1、CA3区和齿状回(DG)中的表达情况.结果:NR1于生后各期海马CA1、CA3区和DG的表达均增强,P14-P21达高峰期后减弱.NR2A于生后在海马CA1和CA3区的表达略有减弱,P4后增强至高峰期P14,然后轻微减弱,在DG中NR2A的表达生后略有减弱,P4后在增强的趋势中于P7、P14和P28后均有不同程度的减弱,高峰期在P28.PSD-95于生后各期海马CA1、CA3区和DG的表达均增强,P21-P28达高峰期后轻微减弱.结论:NR1、NR2A和PSD-95在CAI、CA3区和DG中的表达具有特异的时空分布模式,此模式可能与其在生后发育中发挥的不同生理功能相关.
