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益母草注射液主要提取成分对凝血系统影响的筛选
目的:探索益母草注射液中主要提取成分对凝血系统的影响.方法:通过体外实验测定凝血四项值、血小板聚集率和纤溶活性探索益母草注射液主要成分对凝血系统的影响.结果:体外实验表明,葫芦巴碱具有明显延长活化部分凝血酶时间(APTT)的作用,氯化胆碱和葫芦巴碱均具有抗血小板聚集的作用,均无明显的纤溶活性.结论:氯化胆碱和葫芦巴碱为益母草注射液抗凝的有效成分.有效成分的提取分离为扩大益母草注射液的临床应用以及控制益母草注射液的质量提供了很好的科学依据.
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“壮根灵”类药剂检测及植物生长延缓剂在根及根茎类道地药材栽培中使用情况调查
植物生长延缓剂是植物生长调节剂的一类,具有抑制植物茎部近顶端分生组织细胞的分裂、伸长和生长速度等作用,并可被赤霉素逆转,可以调节光合产物向根和根茎部位转移,从而促进作物根部位的生长和增大.常用的植物生长延缓剂有多效唑(paclobutrazol),烯效唑(uniconazole),矮壮素(chlorocholine chloride),缩节胺(mepiquat chloride),氯化胆碱(choline chloride),丁酰肼(daminozide)等6种.在农业上,用于根类作物的常称为“壮根灵”、“膨大素”、“膨大剂”等.具有单一或复合植物生长调节剂标示的登记为农药者,称为农药“壮根灵”.而登记为叶面肥或冲施肥的具有促进根类生长的药剂,统称农肥“壮根灵”.作者于2012年至2014年走访调查了四川绵阳花园镇(川麦冬)、彭州敖平镇(川芎)、彭山谢家镇(泽泻)、江油市太平镇和彰明镇(附子),云南文山州(三七)、河南武陟大封镇(地黄、牛膝和山药),甘肃岷县(党参和当归)、礼县(大黄)等中药道地产区在根和根茎类药材种植过程中使用“壮根灵”的情况,发现“壮根灵”在这些药材种植过程中除大黄外均有应用,其中川麦冬、泽泻、牛膝、党参在调查地应用极为普遍,地黄、当归中较常应用,川芎、附子、三七和山药中有应用.搜集了产区应用的农药“壮根灵”和农肥“壮根灵”药剂共53份,其中农药“壮根灵”15份,占28％,来自川麦冬的有11份;农肥“壮根灵”38份,占72％.用UPLC-MS方法检测了38份农肥“壮根灵”中6种植物生长延缓剂的含量,均有检出,仅有2份检测量低于10 μg·g-1.表明农肥“壮根灵”在根类药材种植中占主流,且农肥“壮根灵”中隐性添加植物生长延缓剂具有普遍性.全部调查区域内使用“壮根灵”类药剂在使用种类、使用数量、使用次数和使用方法等方面呈现严重的盲目和滥用状态,使用后对目标药材部位的产量均有一定的促进作用,增产量在20％ ～ 200％,但对于药材质量的影响无论是从研究方面还是产业方面的评价严重缺失.植物生长调节剂已经成为药材种植中除了化肥、杀虫杀菌农药外,又一类值得高度重视的化控物质.
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正交实验法优化明党参中氯化胆碱的提取工艺
优化中药材明党参中氯化胆碱的提取工艺.采用酸水的浓度、提取时间、提取所用酸水的体积、提取次数设计四因素三水平的正交实验,以氯化胆碱的含量为考察指标优化明党参药材中氯化胆碱的提取工艺.优化后的工艺条件为明党参60℃干燥粉碎后用0.5％,20倍的硝酸溶液加热回流分解提取1次,每次5小时,滤液用40％NaOH溶液调节PH至9～10,加入过量甲醇,冰箱放置过夜,抽滤后得滤液,浓缩加入雷氏铵盐甲醇溶液,生成粉红色片状结晶,将结晶溶解定容后应用紫外分光光度测定氯化胆碱的含量.经过三批样品工艺验证,明党参药材中氯化胆碱的平均含量为37.02％,RSD值为2.8％,说明该工艺稳定可行.
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氯化胆碱对尾吊大鼠比目鱼肌肌萎缩对抗效果的观察
目的 探讨氯化胆碱对尾吊大鼠比目鱼肌肌萎缩的影响.方法 按体重配对原则将24只雌性SD大鼠分为对照组(CON)、尾吊组(TS)与尾吊给药组(TS+Cch),每组8只.尾部悬吊法建立模拟失重模型,1/2尾吊大鼠按150 mg/kg 的剂量用氯化胆碱灌胃,连续14 d.Ca2+-ATPase法测定比目鱼肌(SOL)的mATPase活性,常规方法制作石蜡组织切片.结果 1)以氯化胆碱灌胃后,尾吊大鼠SOL中Ⅰ型肌纤维比例明显升高,Ⅱ型肌纤维比例明显降低,P＜0.001;2)以氯化胆碱灌胃后,尾吊大鼠SOL的肌束之间间隙减小,Ⅰ型肌纤维横截面积(CSA)明显升高,P＜0.001,Ⅱ型肌纤维CSA和单根肌纤维的平均CSA亦明显高于尾吊组,P＜0.05;3)以氯化胆碱灌胃后,尾吊大鼠SOL的梭内肌纤维中,一核链纤维的mATPase染色呈阴性,其它各纤维与尾吊组相同,均呈阳性.结论 氯化胆碱对模拟失重条件下大鼠SOL慢肌向快肌的转化与模拟失重引起的肌萎缩均有显著的对抗作用.
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氯化琥珀胆碱注射液中有关物质的检查
目的 建立氯化琥珀胆碱注射液中有关物质的测定方法.方法 用薄层色谱法检查注射液中的氯化胆碱,用滴定法检查水解产物.结果 薄层色谱法可以有效分离氯化琥珀胆碱注射液中的氯化胆碱和其它杂质,氯化胆碱的低检出限为0.2μg,氯化琥珀胆碱对照品、1批氯化琥珀胆碱原料和3批氯化琥珀胆碱注射液中氯化胆碱的杂质量均＞2.0%.3批氯化琥珀胆碱注射液中的水解产物含量均＜3.0%.结论 本法简便、快速,能控制氯化琥珀胆碱注射液中有关物质.
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氯化胆碱与制动性骨骼肌萎缩肌肉生成抑制素mRNA的表达
背景:研究发现类胆碱物质可增加乙酰胆碱的弥散及终板电流的幅度,对神经肌肉接点功能退化有一定的对抗作用.目的:观察氯化胆碱对制动性骨骼肌萎缩的防治作用及对骨骼肌萎缩大鼠肌肉生成抑制素mRNA表达的影响.方法:将30只雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组和治疗组,每组10只.采用可塑性石膏固定模型组和治疗组大鼠右后肢制备肌萎缩模型.治疗组每日灌胃氯化胆碱(150 mg/kg),对照组和模型组灌胃等体积蒸馏水.4周后解剖右后肢腓肠肌,检测腓肠肌收缩张力、肌湿质量、蛋白质水平及肌肉生成抑制素mRNA的表达.结果与结论:与对照组比较,模型组大鼠腓肠肌的收缩张力、肌湿质量、蛋白质水平均显著降低(P < 0.05或P < 0.01),肌肉生成抑制素mRNA表达显著增高(P < 0.01).与模型组比较,治疗组大鼠腓肠肌的收缩张力、肌湿质量、蛋白质水平均显著升高(P < 0.05),肌肉生成抑制素mRNA表达显著降低(P < 0.05).说明氯化胆碱能够显著提高制动性萎缩骨骼肌的收缩张力、肌湿质量、蛋白质水平,减少肌肉生成抑制素mRNA的表达,从而有效抑制骨骼肌制动性萎缩的发生.
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胆碱对酒精中毒孕鼠神经元保护作用的实验研究
目的:观察不同剂量胆碱对孕期酒精中毒大鼠生仔后神经元的影响,探讨其机制.方法:将孕鼠分为酒精组、大剂量胆碱组、小剂量胆碱组及对照组.用灌胃法建立酒精中毒动物模型.在分娩当天进行行为测试,分别观察母鼠的舔仔行为和哺乳行为,计算各行为时间,比较各组母鼠的行为的差异.用免疫组化方法检测下丘脑室旁核催产素神经元数量变化.结果:酒精组母鼠的行为持续时间与对照组比较差异有显著性(P＜0.01或P＜0.05);胆碱组的行为持续时间与酒精组比较差异有显著性(P＜0.01或P＜0.05);与对照组比较,酒精组和小剂量胆碱保护组PVN区催产素神经元阳性细胞数目减少(P＜0.05).结论:怀孕期大量饮酒能够明显损伤相关的催产素神经元,而胆碱对神经元有一定的保护作用,并具有一定的剂量依从性,其机制可能是足量的胆碱为脑细胞提供了一定的营养,有效的保持了细胞结构.
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氯化胆碱对异丙肾上腺素诱导大鼠心肌成纤维细胞增殖及胶原合成的影响
目的 探讨氯化胆碱对异丙肾上腺素(Iso)诱导的心肌成纤维细胞(CFs)增殖和胶原合成的影响.方法 体外培养新生Wistar大鼠心肌成纤维细胞,分为对照组、Iso组和Iso+氯化胆碱组.各组药物分别作用48 h.应用MTF实验方法检测心肌成纤维细胞增殖,羟脯氨酸试剂盒检测胶原合成.结果 10-4 mol/L Iso明显促进CFs增殖(P＜0.05),1 mmol/L氯化胆碱明显抑制10-4 mol/L Iso诱导的成纤维细胞增殖(P＜0.05)与胶原合成(P＜0.05).结论 氯化胆碱抑制异丙肾上腺素诱导的心肌成纤维细胞增殖及胶原合成.
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氯化胆碱对吗啡依赖大鼠母爱行为保护作用的探讨
目的:观察不同剂量胆碱对吗啡依赖大鼠生仔后母爱行为的影响,探讨其机制.方法:将孕鼠分为吗啡组、正常组、大、小剂量胆碱组.连续8d递增剂量皮下注射吗啡建立吗啡依赖模型.在分娩当天进行母爱行为测试,计算母鼠的舔仔和哺乳行为时间,比较母爱行为的差异.用免疫组化方法检测下丘脑室旁核催产素神经元数量变化.结果:吗啡组母鼠的母性行为持续时间与正常组比较差异有显著性(P＜0.01或P＜0.05);胆碱组的母性行为持续时间与吗啡组比较差异有显著性(P＜0.01或P＜0.05);与正常组比较,吗啡组和小剂量胆碱保护组PVN区催产素神经元阳性细胞数目减少(P＜0.05).结论:怀孕期大量吸毒能够明显损伤相关的催产素神经元,而胆碱对神经元有一定的保护作用,并具有一定的剂量依从性,其机制可能是足量的胆碱为脑细胞提供了一定的营养,有效地保持了细胞结构.
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一氧化氮和烟碱型乙酰胆碱受体在大鼠学习记忆中的联合作用
本文旨在探讨一氧化氮(NO)和烟碱型乙酰胆碱受体(nicotinic acetylcholine receptor,nAChR)在大鼠学习记忆过程中的相互作用.大鼠侧脑室注射NO前体左旋精氨酸(L-Arg)(L-Arg组)或α7nAChR激动剂氯化胆碱(choline chloride,CC组),以及联合注射L-Arg和氯化胆碱(L-Arg+CC组),和先给予~nAChR拮抗剂甲基牛扁亭(methyllycaconitine,MLA)再联合注射L-Arg和氯化胆碱(MLA+L-Arg+CC组)、先给一氧化氮合酶抑制剂Nω-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME)再联合注射L-Arg和氯化胆碱(L-NAME+L-Arg+CC组),侧脑室注射生理盐水(NS组)作为对照.用Y型迷宫刺激器检测大鼠的学习和记忆行为能力;用NO试剂盒、免疫组织化学和Western blot分别检测大鼠海马NO含量和α7nAChR及神经元型一氧化氮合酶(neuronal nitric oxidesynthase,nNOS)的表达.结果显示,L-Arg+CC组与L-Arg或CC组比较,Y迷宫学习和记忆行为能力均明显增强,同时大鼠海马NO含量、nNOS和α7nAChR表达的光密度值均明显增多;而MLA+L-Arg+CC或L-NAME+L-Arg+CC组与L-Arg+CC组相比较,大鼠学习和记忆行为能力明显减弱,并且海马NO含量及nNOS和α7nAChR的表达均降低.以上结果表明,侧脑室联合应用L-Arg和氯化胆碱可明显提高其单独应用时的大鼠海马NO含量及nNOS和α7nAChR表达,并增强大鼠学习和记忆行为能力;而提前阻断α7nAChR或抑制nNOS后,其联合应用L-Arg和氯化胆碱的效应也得到了抑制.因此推测,NO和nAChR在学习记忆中可能存在着相互协同作用.
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对《中国药典》2010年版茺蔚子薄层鉴别方法的改进
目的 对《中国药典》2010年版中茺蔚子的薄层鉴别方法进行修订.方法 以盐酸水苏碱、氯化胆碱为对照品,采用硅胶G薄层板,以乙酸乙酯-无水乙醇-甲酸(3:2:2)为展开剂,以稀碘化铋钾溶液为显色剂进行鉴别.结果 采用改进后的薄层鉴别方法对茺蔚子中的盐酸水苏碱、氯化胆碱进行鉴别,斑点清晰,分离度好.并首次增加了氯化胆碱特征鉴别,可区分茺蔚子与益母草.结论 改进后的薄层鉴别方法操作简便、准确、专属性强.
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添加Triton-X100及氯化胆碱对红霉素组分的影响
以红霉素生产菌红色链霉菌HD为研究对象,根据红霉素生物合成机理,以促进羟基化和甲基化为主要手段,在利用摇瓶生产红霉素的过程中,96h添加Triton-X100,可使终发酵液的EM B组分百分含量降低7.1%.但EM C与对照相比增加.120h添加甲基化试剂氯化胆碱0.8g/l,可使终发酵液的EM C组分百分含量降低6.4%,但EM B有所积累.继而添加Triton-X100的同时加入甲基化试剂氯化胆碱,发现EM B、EM C分别降低6.4%、8.9%,红霉素有效组分EM A比对照提高13.2%
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一氧化氮对大鼠学习记忆和胆碱能系统的影响
目的:探讨一氧化氮(nitric oxide,NO)在大鼠空间学习和记忆过程中的作用及其对胆碱能受体作用机制.方法:大鼠侧脑室分别注射NO前体左旋精氨酸(L-arginine,L-Arg,L-Arg组)、α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7nicotinic acetylcholine receptor,α7 nAChR)拮抗剂甲基牛扁亭(methyllycaconitine,MLA,MLA组)、α7 nAChR激动剂氯化胆碱(choline chloride,CC组)、一氧化氮合酶抑制剂Nω-硝基-L-精氨酸甲酯(nω-nitro-L-arginine methylester,L-NAME,L-NAME组)以及先注射MLA再注射L-Arg(ML组)、先注射L-NAME再注射氯化胆碱(NC组),并以等量生理盐水(NS组)作为对照.用Y型迷宫刺激器、硝酸还原酶法、免疫组织化学以及Western-Blot等技术分别检测大鼠空间学习和记忆行为能力、大脑皮质和海马NO含量和α7nAChR的表达.结果:与对照组比较,Y迷宫空间学习能力达标次数和24 h后30次测试记忆行为中错误反应次数在L-Arg组和CC组均减少,而在MLA组和L-NAME组均增多；大脑前额叶皮质和海马NO含量和α7nAChR阳性细胞数以及蛋白含量在L-Arg组和CC组均明显增多,而在MLA组和L-NAME组均明显减少.ML组和NC组分别与L-Arg和CC组相比较,大鼠学习和记忆行为能力均明显减弱,并且大脑前额叶皮质和海马NO含量以及α7nAChR的表达均减少.结论:侧脑室应用MLA或L-NAME可减弱L-Arg或氯化胆碱对大鼠空间学习和记忆行为能力的促进作用；NO通过α7nAChR促进大鼠空间学习和记忆能力.
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离子色谱法检测氯化琥珀胆碱注射液中的氯化胆碱的含量
目的:采用抑制型离子色谱建立一种全新的方法检测氯化琥珀胆碱注射液中氯化胆碱的含量.方法:采用强亲水件的lonPeac CS17阳离子交换分离柱分离,甲烷磺酸淋洗液梯度洗脱,抑制电导检测氯化胆碱的含量.结果:氯化胆碱的线性范围为0.1～100mg·L~(-1);线性相关系数为0.9997;检出限(S/N=3)为0.02 mg·L~(-1);样品加标回收率介于80%～110%之间.结论:方法操作简单,选择性好,灵敏度高,结果可靠,完全满足氯化琥珀胆碱注射液的质量监测需要.
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益母草注射液指纹图谱的研究
目的:建立益母草注射液指纹图谱测定方法.方法:采用高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定益母草注射液指纹图谱.使用阳离子交换色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以甲醇-[0.3％醋酸铵-冰醋酸(500∶277),pH 2.20](35∶65)为流动相,流速0.8 mL· min-1,柱温30℃,ELSD漂移管温度80℃,载气流速2.0 L· min-1.并进行方法学验证.结果:本方法重复性、稳定性良好;采用中药指纹图谱相似度评价软件,建立了益母草注射液标准指纹图谱,确定其成分有Cl-、5-羟甲基-2糠酸、水苏碱、Na+、K+、胆碱;对31批样品进行测定,相似度范围为0.957～1.000.结论:方法学验证结果表明,本文建立的HPLC-ELSD指纹图谱分析法稳定可行,可用于益母草注射液指纹图谱的测定.
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离子色谱法检测饲料级氯化胆碱含量的测量不确定度评定
本文对影响离子色谱法检测饲料级氯化胆碱含量的不确定度产生来源进行了分析,建立相应的数学模型,并对数学模型中各个不确定度分量进行了评定.利用测量不确定度理论,计算不确定度分量和合成不确定度,得到离子色谱法检测饲料级氯化胆碱含量的扩展不确定度为0.816%.
