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异亚丙基莽草酸脂质体的包封率测定方法比较
目的:研究异亚丙基莽草酸脂质体含量和包封率的测定方法,建立一套准确度好、简便可行的质控方案.方法:采用Agilent Eclipse Plus C18色谱柱(4.6 mm×100 mm,3.5μm),流动相乙腈-0.05％磷酸溶液(10:90),检测波长220 nm,流速1.0 mL·min-1,柱温30℃,进样量20μL.采用HPLC测定脂质体中异亚丙基莽草酸的含量；比较超滤法、凝胶色谱法和透析法用于包封率的测定.结果:异亚丙基莽草酸脂质体采用4倍量甲醇破乳并高速离心沉淀后,取上清液进行测定,药物专属性良好,线性范围1.004 ～ 150.6 mg· L-1(r =0.999 9),加样回收率(102.01±1.18)％,准确度和精密度良好,异亚丙基莽草酸对照品溶液于6h内稳定；超滤法、葡聚糖凝胶法及透析法测得的包封率分别为(92.96±1.91)％,(91.23±2.23)％,(73.66±7.10)％.结论:所建立的HPLC稳定可靠、准确度良好,可用于异亚丙基莽草酸脂质体的质量控制和体外分析；超滤法测定包封率简便快捷、测定结果与凝胶色谱法相当,可作为本品包封率测定的常规方法；透析法由于测定条件的限制,其测定结果受脂质体溶液稳定性、药物在脂质体中存在状态的影响较大,可能会造成测定结果偏低.
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仿刺参水溶性海参皂苷的分离纯化及其抑瘤活性研究
为了获得具有显著抑瘤活性的水溶性海参皂苷样品,利用大孔树脂柱、硅胶柱和葡聚糖凝胶柱对水溶性海参皂苷进行了分离纯化,并对其体内外抑瘤活性和诱导肿瘤细胞凋亡进行了检测.研究结果显示,大孔树脂柱的70%乙醇洗脱组分以及硅胶柱色谱的部分纯化组分(pSC-2和pSC-3)对HeLa细胞、A-549肺癌细胞、SGC-7901胃癌细胞和Bel-7402肝癌细胞均具有显著的抑瘤活性;经过葡聚糖凝胶柱色谱,获得了纯度均在99.6%以上、具有三萜类皂苷性质的SC-2和SC-3纯化样品,发现SC-2纯化样品不仅能浓度和时间依赖性地抑制HeLa细胞的体外增殖,还能剂量依赖性地抑制S180实体瘤的体内生长,提高荷瘤小鼠的胸腺指数和脾指数.细胞凋亡检测结果显示,SC-2纯化样品可剂量依赖性地诱导HeLa细胞凋亡,SC-2纯化样品(10和50 mg·L-1)处理12 h的HeLa细胞均出现了DNA片段化.可见,水溶性海参皂苷SC-2纯化样品具有显著的抑瘤活性,其机制可能是通过诱导肿瘤细胞发生凋亡来实现的.
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水蛭不同工艺提取物抗凝与纤溶活性比较及酶解物组成分析
目的:比较水蛭不同提取工艺的抗凝溶栓作用;初步确定水蛭酶解产物的化学成分组成.方法:通过活化部分凝血活酶时间(APTT)试验及纤维蛋白平板试验,比较水蛭胃蛋白酶酶解、胰蛋白酶酶解、仿生酶解、醇提、水煎提取物的体外抗凝与纤溶活性差异.采用Sephadex G-100凝胶柱色谱法对优选提取物进行进一步分离纯化,并采用MALDI-TOF-质谱法对其组成进行分析.结果:与生理盐水组比较,在相同的剂量下,水蛭胃蛋白酶酶解物可明显延长大鼠APTT,并具有较强的纤溶作用,其余几种提取物的作用不明显.胃蛋白酶酶解物经Sephadex G-100凝胶柱色谱分离纯化的活性部位经MALDI-TOF-质谱法检测为分子量在700～3 200之间的一组寡肽.结论:胃蛋白酶酶解是水蛭较为理想的提取方法,其有效部位的组成为寡肽.
