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大孔吸附树脂和Al2O3吸附提纯党参苷Ⅰ的比较研究
党参为桔梗科植物Codonopsis pilosula的干燥根,性味甘平、无毒,有补中益气、生津止渴等功效,为传统补益药[1].党参苷Ⅰ是其专属成分,对党参类生药的品质评价具有一定意义,韩桂茹等人已利用D-101型大孔吸附树脂在实验室提纯出党参苷Ⅰ[2].张伟燕曾用色谱Al2O3从参芪口服液中吸附纯化黄芪甲苷,并评价该法吸附提纯的黄芪甲苷溶液背景较浅有利于测定[3].本研究根据党参苷Ⅰ的结构拟选用中性色谱氧化铝与D-101型大孔吸附树脂做吸附提纯党参苷Ⅰ的对比研究.因为党参中党参苷Ⅰ的含量极低,经大孔吸附树脂(或Al2O3)吸附提纯的党参苷Ⅰ富集提纯液又通过硅胶柱富集提纯后才用HPLC-MS仪分析检测[4].
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仿刺参水溶性海参皂苷的分离纯化及其抑瘤活性研究
为了获得具有显著抑瘤活性的水溶性海参皂苷样品,利用大孔树脂柱、硅胶柱和葡聚糖凝胶柱对水溶性海参皂苷进行了分离纯化,并对其体内外抑瘤活性和诱导肿瘤细胞凋亡进行了检测.研究结果显示,大孔树脂柱的70%乙醇洗脱组分以及硅胶柱色谱的部分纯化组分(pSC-2和pSC-3)对HeLa细胞、A-549肺癌细胞、SGC-7901胃癌细胞和Bel-7402肝癌细胞均具有显著的抑瘤活性;经过葡聚糖凝胶柱色谱,获得了纯度均在99.6%以上、具有三萜类皂苷性质的SC-2和SC-3纯化样品,发现SC-2纯化样品不仅能浓度和时间依赖性地抑制HeLa细胞的体外增殖,还能剂量依赖性地抑制S180实体瘤的体内生长,提高荷瘤小鼠的胸腺指数和脾指数.细胞凋亡检测结果显示,SC-2纯化样品可剂量依赖性地诱导HeLa细胞凋亡,SC-2纯化样品(10和50 mg·L-1)处理12 h的HeLa细胞均出现了DNA片段化.可见,水溶性海参皂苷SC-2纯化样品具有显著的抑瘤活性,其机制可能是通过诱导肿瘤细胞发生凋亡来实现的.
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《中国药典》2015年版乙酰谷酰胺注射液含量测定系统适用性的修订建议
乙酰谷酰胺用于治疗脑外伤昏迷,神经外科手术引起的昏迷、肝昏迷及偏瘫、高位截瘫、小儿麻痹后遗症、神经性头痛和腰痛[1]。乙酰谷酰胺注射液现收载于《中国药典》2015年版二部,其标准〔含量测定〕系统适用性要求乙酰谷酰胺峰与谷氨酰胺峰分离度应大于7.0[2],但在实际检验中发现,使用多品牌的常规十八烷基键合硅胶柱,且调整流动相比例及其pH,分离度均不能满足要求。为此,经过试验研究,我们对该标准提出了修订建议,以供今后完善该标准作参考,使标准更加严谨及符合实际检验情况。
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折苞斑鸠菊挥发性成分的研究
折苞斑鸠菊Vernonia spirei Gandog为菊科斑鸠菊属多年生草本植物,分布在广西大瑶山、玉林、贵港、博白及云南等地.广西民间常用折苞斑鸠菊煮水内服,治疗伤口发炎、眼炎、肝炎等疾病.为了开发民间草药,本实验对折苞斑鸠菊挥发油进行了研究.分析时,为了消除不含氧的萜类化合物对生物活性较强的含氧成分的干扰,采用硅胶柱将提取得到的挥发油分离成含氧和不含氧两个部位,分别检测了总挥发油、挥发油不含氧部位及挥发油含氧部位的化学组成,为折苞斑鸠菊的药用活性提供了较好的理论依据.
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当归挥发油中内酯类成分的提取分离及结构鉴定
当归Angelica sinensis(Oliv.)Diels为伞形科当归属一种多年生草本植物,是我国常用中药材之一,有补血、和血、调经止血、润肠滑肠等多种功效[1].当归挥发油为当归药效的重要组成,而多种内酯类物质是当归挥发油的主要有效成分[1,2].本实验采用超临界流体萃取技术(supercritical fluid extraction,SFE)提取当归挥发油,用硅胶柱分离纯化得到藁本内酯、正丁烯基苯酞等6种内酯类化合物,通过核磁共振技术(NMR)分别鉴定了其结构,其中2种在当归中为首次报道.
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长期冻存和新鲜胃癌组织总RNA提取方法的比较
背景:目前两种可靠、应用广的高通量RNA分离技术是基于异硫氰酸胍-酚︰氯仿的RNA分离技术和基于硅胶柱的RNA分离技术.在临床应用非常有限的组织材料时,有必要对RNA分离技术的可重复性和可靠性分别进行先期评价.目的:系统比较采用硅胶柱法和Trizol法从冻存、新鲜胃癌组织中分离总RNA的效果.方法:硅胶柱法和Trizol法分别提取长期-80 ℃冻存的(2年以上)和新鲜胃癌组织总RNA,紫外分光光度法比较RNA纯度,琼脂糖凝胶电泳分析28 S和18 S吸光度比值,进一步通过实时反转录-聚合酶链反应对扩增距mRNA polyA尾端不同大小片段的Ct值进行比较,间接判断不同大小mRNA的拷贝数及完整性.结果与结论:硅胶柱技术和Trizol方法在总RNA提取的纯度方面都表现很好.然而在RNA完整性方面,基于硅胶柱技术的提取方法要好于Trizol法,因为其核糖体RNA形式完好而且更好地保持了不仅短的及中等大小片段,对于较大的mRNA片段也保持更好.另外,与新鲜组织相比,长时间冻存对胃癌组织总RNA提取的影响很小.
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莪术油中莪术二酮的分离和鉴定
目的:分离鉴定莪术油中莪术二酮成分.方法:采用硅胶柱色谱的方法对莪术油的化学成分进行分离;并采用红外、气相色谱/质谱和核磁共振波谱法进行结构鉴定.结果:从莪术油中分离得到3个化合物C1,C2和C3,其中C1为莪术二酮,其在莪术油中的相对含量为11.31%.结论:该分离方法简单易行,为大量分离莪术二酮进行药理学研究提供了依据.
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HPLC分析来自糖胺聚糖的不饱和二糖
介绍一种快速、简单的HPLC分析透明质酸、硫酸软骨素、硫酸皮肤素、硫酸乙酰肝素以及肝素的酶解产物—不饱和二糖的方法,采用氨基键合硅胶柱,并用磷酸二氢钠线性梯度洗脱.对于硫酸软骨素类化合物和硫酸乙酰肝素类化合物,二糖随着盐浓度的增加以非硫酸化二糖、单硫酸化二糖、二硫酸化二糖、三硫酸化二糖的顺序依次洗脱.这种分析方法能够定量分离硫酸化糖胺聚糖中的大部分组成二糖,而有利于化合物在色谱柱上直接酶解,无需任何预处理,且经由单次色谱法即可得到多种二糖的良好分离.
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固相萃取-超高效液相色谱法检测保健食品中维生素D3
目的 建立保健食品中维生素D3的固相萃取-超高效液相色谱方法.方法 样品经皂化、萃取、定容后,利用硅胶柱固相萃取的净化技术,采用C18柱分离,甲醇水混合溶液作为流动相,PDA检测器检测,检测波长为264 nm.结果 经硅胶固相萃取柱净化后,杂质能较好的去除,维生素D3的浓度为0.1 μg/ml ~ 5.0 μg/ml时,其峰面积与质量浓度呈良好的线性关系回归方程为y=46152x-1 735.1,相关系数(r)为0.999 6,回收率为87.8%~105.8%,相对标准偏差(RSD)为1.28% ~3.58%(n=6),方法的检出限为1.0 μg/100 g.结论 利用本方法,可以测定保健食品中维生素D3含量,经净化后可消除杂峰的干扰且峰形较好,回收率高、快速简便,是测定保健食品中维生素D3含量的有效定量方法.
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气相色谱-质谱联用测定实验室用水中邻苯二甲酸酯类化合物
目的 建立一种实验室用水中邻苯二甲酸酯类化合物的气相色谱-质谱测定方法.方法 取20 ml水样于25.0 ml比色管中,加入0.1 ml 10.0 mg/L的D4-DEHP的内标溶液后充分混匀,将水样经硅胶柱净化后(硅胶柱预先用5.0 ml二氯甲烷,5.0 ml乙腈和5.0 ml水活化柱子),乙腈洗脱硅胶柱并收集洗脱液,洗脱液用氮气吹至近干(50.0 ℃水浴),后以正己烷定容至1.0ml,上气相色谱-质谱联用仪进行测试,内标法定量.结果 在该实验条件下,16种邻苯二甲酸酯类化合物的色谱分离效果、线性方程相关性和方法精密度均良好,满足实验要求.其相关系数(r)为0.998 9 ~0.999 8,检出限为0.03 mg/L ~0.10 mg/L,加标回收率为81.8%~104.0%,相对标准偏差(RSD)为3.1%~10.1%.结论 该方法方便、快捷、灵敏度高,适用于水中邻苯二甲酸酯类化合物的测定,同时对测定邻苯二甲酸酯类化合物时实验室选择用水有一定的指导意义.
关键词: 邻苯二甲酸酯美化合物 水 气相色谱-质谱法 硅胶柱 -
高效液相色谱法同时测定玉米及土壤中莠去津和绿麦隆的残留量
目的:建立玉米及土壤中残留的莠去津和绿麦隆高效液相色谱法同时测定方法.方法:样品经提取后,利用硅胶柱固相萃取净化技术,采用C18柱分离,甲醇-水梯度洗脱,检测波长216 nm.结果:在2种基质中,莠去津和绿麦隆能得到良好分离,莠去津在3.2~200 ng呈线性,r=0.9999,绿麦隆在6.5~80 ng呈线性,r=0.9999,回收率为93.3%~103.3%,RSD为1.72%~3.76%(n=6),方法检出限为莠去津0.03 mg/kg,绿麦隆0.02 mg/kg.结论:利用本方法,2种除草剂能得到良好的分离,经净化后利用梯度洗脱,可消除杂峰的干扰,分离完全且峰形较好,回收率高,易于操作,是测定玉米及土壤中2种除草剂的有效定量方法.