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基于抑制单核巨噬细胞增殖活性检测的注射用骨肽质量控制
目的:通过建立注射用骨肽抑制单核巨噬细胞(THP-1)增殖的生物活性测定法,以补充完善其质量控制方法.方法:采用CCK-8法以体外抑制THP-1增殖作用来考察注射用骨肽的生物活性.以A01160410批次注射用骨肽作为对照物质进行效价测定.结果:注射用骨肽对THP-1的增殖具有一定的抑制作用.采用量反应平行线(2·2)法作为注射用骨肽抑制THP-1增殖的生物效价检测方法,重复性较好,样品检测结果均能通过可靠性检验(回归P＜0.01,偏离平行P＞0.05).A20160102批次注射用骨肽效价94.50 U· mL-1,可信限率(FL)=6.14％,可信限范围为88.87～100.47 U·mL-1;A01160401批次注射用骨肽效价为92.04 U· mL-1,FL=4.36％,可信限范围为88.12～96.15 U·mL-1;A01160406批次注射用骨肽效价为83.25 U·mL-1,FL=8.52％,可信限范围为76.46 ～ 90.65 U· mL-1.3个批次注射用骨肽实验结果合并分析结果显示,注射用骨肽抑制THP-1的效价为90.37 U· mL-1,FL=8.63％,可信限范围为82.91～98.51U·mL-1.不同操作人员对注射用骨肽的效价测定结果没有明显差别,具有良好的可重复性.结论:该研究建立的生物效价检测方法可以补充作为注射用骨肽生物评价的质控方法之一.
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注射用鹿茸多肽生物活性测定方法研究
目的:建立注射用鹿茸多肽生物活性测定方法.方法:采用Wistar乳鼠颅盖骨成骨细胞原代培养和成骨样细胞株MG63(人骨肉瘤细胞)培养的方法,通过MTT比色法检测.结果:成功地分离、纯化并培养了Wistar乳鼠颅骨成骨细胞,采用稳定的人成骨样细胞株MG-63(人骨肉瘤细胞)进行生物活性检测,确定5×104的细胞密度,0.1 mg/ml的给药剂量,培养72h为佳培养时间.结论:MTT比色法准确、可靠,可用于注射用鹿茸多肽的质量控制.
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基于生物活性测定开展中药质量控制的研究进展
在化学含量测定的基础上,开展中药复方的生物活性测定,可以综合评价并控制其质量.该文对近年来发表的有关生物活性测定文献进行了综合分析,标准对照物质的选择和实验体系的建立是目前中药生物活性测定的难点.目前生物活性测定标准对照物质主要包括:成分基本相似的不同来源产品、检定用标准药材、道地药材、以临床常用且具有相同药理作用的化学药品或者是生物制品,以及通过生物制品活性换算中药效价等.文章从活血化瘀和清热解毒临床功效角度总结了常用的生物活性测定体系.逐步建立从企业内控到行业认可的中药生物活性测定平台将是中药工业化生产的重要内容之一.
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人甲状旁腺素1-34及其聚乙二醇修饰物对鸡血钙含量的影响
目的:通过观察人甲状旁腺素(hPTH1-34)及其聚乙二醇修饰物对鸡血钙含量的影响判断它们的体内活性.方法:12日龄的小鸡分别翼静脉注射赋形剂,hPTH1-34,Cys(mPEG5000-MAL)-hPTH1-34和hPTH1-34-Cys(mPEG5000-MAL)-NH2.60 min和120 min后翼静脉采血,分离血清并测定钙含量.结果:给药后60 min,hPTH1-34,Cys(mPEG5000-MAL)-hPTH1-34和hPTH1-34-Cys(mPEG5000-MAL)-NH2组静脉血清钙含量均明显升高;120 min后,Cys(mPEG5000-MAL)-hPTH1-34组血清钙含量仍维持升高水平,而hPTH1-34和hPTH1-34-Cys(mPEG5000-MAL)-NH2组血清钙含量则明显回落.结论:合成人甲状旁腺素(hPTH1-34)及其聚乙二醇修饰物可以明显升高小鸡的血清钙水平;N端聚乙二醇修饰的hPTH1-34维持血钙升高的时间较长.
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注射用肌氨肽苷的生物活性测定
目的:采用生物活性测定法加强控制注射用肌氨肽苷的质量.方法:取健康合格猫,体重2.0～3.5 kg,雄性,参照<中国药典)2005年版二部降压物质检查法测定.结果:比较dt与d80.05?,ds0.05,dt之间的降压幅度,可作为生物活性测定的指标.结论:该法准确,可靠,可用于注射用肌氨肽苷的质量控制.
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不同来源灯盏花素注射液"生物活性"质量的比较研究
目的:比较不同厂家生产的含量测定合格的灯盏花素注射液在不同生物活性试验中的反应情况,以探讨"生物活性测定"在中药注射剂质量控制中应用的可行性.方法:选择小鼠脑血栓形成试验和小鼠脑循环障碍试验作为"生物活性测定"方法,确定生物活性检测限值;并比较两种规格4个样品"生物活性"测定结果.结果:以临床人用剂量的20倍(6.7mg/kg),给予实验动物可以得到样品"生物活性"的阳性结果,以此剂量作为生物活性试验的检测限值.在同样的检测限值下,灯盏花素注射液Ⅰ号样品对小鼠脑血栓形成有显著性对抗作用,而Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ号样品则未见对抗作用.Ⅲ、Ⅳ号样品对小鼠急性脑循环障碍改善有明显作用,而Ⅰ、Ⅱ号样品则差异不显著.另外,Ⅰ号样品无细胞毒性反应的浓度与其他3个样品有明显差异.结论:在相同检测限度值下,由不同药厂或同一药厂生产的不同规格和批号的灯盏花素注射液虽然"含量测定"均符合规定,但"生物活性"却存在着明显的差异,表明"生物活性测定"与理化分析控制质量的不同.因此,结合理化分析手段,"生物活性测定"能够通过综合和分析的结合达到控制中药注射剂质量的目的.
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肝炎灵注射液的生物活性测定方法研究
目的:建立肝炎灵注射液生物活性的测定方法,以探讨用生物活性测定控制其质量的可行性.方法:测定CCI4肝损伤小鼠ALT水平,并对模型的影响因素进行研究,比较了同一厂家多批样品和不同厂家样品的生物活性.结果:雄性小鼠ig 0.1%CCI4造模,并于造模后于1、24、48 h分别ip肝炎灵注射液5 mg·kg-1.给药组与模型组比较,ALT均明显降低.同时两个厂家8个批号肝炎灵注射液均显示出生物活性.结论:生物活性测定能有效控制肝炎灵注射液的内在质量.
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关于中药标准采用"生物活性测定"项目的建议
中药是天然环境条件中产生的生物制品,具有成分复杂,可变因素多、活性成分多、作用靶点多、药效成分和毒性成分不清晰等特点.因此,中药质量标准中仅川理化方法测定指标成分有一定的局限性,而通过生物检定方法可测定与临床相关的生物学活性,生物检定正适用于中药这样具有多种相似生物活性成分的药品.本文讨论了对中药制剂,尤其对中药注射剂、危重病症用药品质量标准中采用生物活性测定法的必要性和可行性:探讨了进行中药生物活性测定方法学研究的基本步骤.本文建议:中药"生物活性测定"应结合中药的"功能主治",参考其主要药效学试验方法,首先开展生物活性测定方法和测定限值的研究.研究过程可采用方法筛选一方法和限值确定研究一方法验证一内控标准一质量标准的步骤;本文用某中药注射剂对人鼠血小板聚集试验、小鼠脑血栓形成试验等约效学试验方法、举例作为对只有活血化瘀功能,主冶脑血栓中风后遗症药物进行生物学活性质量的内控测定方法,也可作为开展其他类似"功能主治"中药生物学活性方法研究的参考.
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重组人干细胞生长因子(rhSCF)生物活性测定方法研究
目的建立rhSCF生物活性测定方法.方法分别采用MTT比色法与琼脂集落培养法进行rhSCF生物活性测定.结果两种方法对同批次rhSCF成品测定结果无显著性差异.结论由于MTT比色法操作简便、稳定性好,可以替代琼脂集落培养法,使rhSCF测定更加准确、可行.
关键词： 重组人干细胞生长因子 生物活性测定 MTT比色法 琼脂集落培养法 -
注射用脑蛋白水解物的生物活性测定
目的 采用生物活性测定法加强控制注射用脑蛋白水解物的质量.方法 选用18～20g小鼠,雌雄各半,尾静脉注射注射用脑蛋白水解物93.6mg·kg-1,给药后30min记录小白鼠断头后的呼吸时间和小白鼠常压耐缺氧时间.结果 给药组小鼠显著延长断头后的喘气时间(P<0.05);给药组小鼠显著延长小鼠常压耐缺氧时间(P<0.05).结论 该法准确,可靠,可用于注射用脑蛋白水解物的质量控制.
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生、熟地黄的体外抗氧化活性测定方法研究
目的 探索建立地黄的体外抗氧化活性测定方法.方法 用不同浓度乙醇采用超声法制备生地、熟地提取液,用二苯代苦味酰基自由基(DPPH*)法测定提取液的抗氧化活性,以维生素E 为阳性对照,评价其抗氧化能力,并对所建立方法的重复性进行考察.结果 生、熟地黄有清除DPPH* 作用,生地75% 乙醇提取液、熟地75% 乙醇提取液、维生素E 溶液的ED50 分别为2.51mg/mL 、1.88mg/mL 、5.9mg/mL,其清除能力的次序为:熟地＞生地＞维生素E;本法可以测定出mg 级地黄提取物的抗氧化活性,五次实验结果值变异较小(RSD ＜ 5%).结论 DPPH* 法用于生地、熟地的体外抗氧化活性测定具有灵敏度高、重复性好等特点.经后期系统的方法学研究后,有望成为用于生地黄、熟地黄质量控制的生物检定方法之一.
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抗癌佳蔬——莼菜
莼菜,自古以来就被视为蔬菜中的珍品,以嫩茎叶供食用.每100克鲜莼菜,含蛋白质745毫克,还含有多种维生素、矿物质和胶质,以及氨基酸.莼菜生长在水中,性寒,有清热解毒作用,用莼菜煮汤可清火排毒.把莼菜茎叶捣烂外敷,可治痈疽疔疮.据日本医学杂志报告,莼菜叶背分泌的一种类似琼脂的黏液,含大量的多糖,对实验动物的某些移植性肿瘤有抑制作用.国内有报道说,有人对太湖莼菜进行化学分析、生物活性测定及药理研究后认为,莼菜含有一种酸性的杂多糖,这种多糖是一种较好的免疫促进剂,它不仅能增加免疫器官——脾脏的重量,而且能明显地促进巨噬细胞吞噬异物的功能.临床上,大多数患有恶性肿瘤病人的巨噬细胞功能显著下降.而莼菜所含的多糖能增强免疫功能,达到防治癌症的目的.下面介绍3款抗癌食谱.
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红花注射液生物活性测定方法的筛选
目的 筛选红花注射液生物活性测定的方法.方法 选择小鼠体内血栓实验、家兔体外抗血小板聚集实验作为测定红花注射液生物活性的方法,用4个不同厂家生产的红花注射液进行试验.结果 小鼠体内血栓实验、家兔体外抗血小板聚集实验测定红花注射液生物活性时试验设计较为合理、试验操作简便、试验指标明确、试验灵敏度较高、试验的可重复性较好.结论 可以通过小鼠体内血栓实验、家兔体外抗血小板聚集实验来测定红花注射液生物活性.
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人精浆免疫抑制因子的分离、提取及生物活性测定
目的从人精浆中分离提取精浆免疫抑制因子(SP IF).方法取常规检测正常精液50份, 离心分离精子和精浆,将精浆低温高速离心,取上清液,经Sephadex G-100层析, 收集第1峰, 作DEAE纤维素离子交换层析, 收集第2峰, 浓缩, 经SDS-PAGE分析呈单带.在体外对其生物活性进行了测定,并以其为抗原经ELISA间接法对100例不育男子和50例生育男子精浆中抗SPIF IgG和IgA进行了测定.结果测定分子量为52kd.当浓度分别为50、100、200μg/ml时,对PHA诱导的人外周血淋巴细胞转化抑制率、NK细胞活性抑制率分别为27.1%、33.9%、66.9%和23 .7%、32.4%、57.4%.ELISA结果, 不育组与生育组间抗SPIF IgG和IgA分别为38%、26% 和6%、2%.结论该实验提取的52kd的蛋白达到电泳纯且在体外具有一定的生物活性.ELISA间接法结果显示,不育组与生育组间存在显著性差异(P＜0.05).
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新药合成和筛选的高效方法-组合化学
传统的药物研制方法是,根据天然先导化合物,逐个地进行合成、纯化,然后进行结构鉴定、生物活性测定等,一般每推出一个新药约需6～10a的时间,耗资也相当大,周期长、成本高.随着酶和受体作为药物治疗靶点的不断阐明,药物自动化快速筛选方法的不断出现,筛选的效率已非常高,但样品的来源却远远跟不上,科学家们便把注意力转入合成大数目的化合物群,即化合物库.组合化学应运而生.
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棉铃虫颗粒体病毒增效蛋白基因2.6kb片段的表达
以棉铃虫颗粒体病毒(Helicoverpa armigera granulosis virus,简称HaGV)基因组的DNA为模板设计引物,PCR扩增病毒增效蛋白(Enhanicn)基因,然后经BamHI/Pst I双酶切消化,得到近乎全长的约2.6kb的增效蛋白基因片段,再与pQE32质粒连接,构建了重组表达载体pQE2/En,转化大肠杆菌M15(pREP4),在IPTG诱导下表达出分子量约为102kD的融合蛋白并命名为P102,纯化的P102包涵体显示了明显的增效活性,在感染后168h时统计可提高HaNPV对棉铃虫幼虫的感染死亡率6.25%～27.09%,缩短LT5012.3h以上;在感染后72h时统计可提高Bt对棉铃虫幼虫的感染死亡率28.18%,缩短LT5o12.33h.
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基于耐缺氧能力的参芎葡萄糖注射液生物活性测定方法的建立
目的:建立参芎葡萄糖注射液生物活性的测定方法并用于质量控制.方法:采用小鼠皮下注射异丙肾上腺素(Iso)诱导心肌缺血建立常压耐缺氧模型,观察参芎葡萄糖注射液对小鼠存活时间的影响.以小鼠耐缺氧试验作为参芎葡萄糖注射液生物活性测定方法和限值剂量确定依据,并对10批参芎葡萄糖注射液生物活性进行测定.结果:参芎葡萄糖注射液以临床人用剂量的20倍(56.0 mg·kg1,以川芎嗪计)连续给药3d,可明显延长缺氧小鼠的存活时间,且10批样品均显示出较好的生物活性.结论:基于耐缺氧能力的参芎葡萄糖注射液生物活性测定方法准确、可靠,能有效控制参芎葡萄糖注射液的内在质量.
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骨瓜提取物注射液的生物活性测定
目的 采用生物活性测定法加强骨瓜提取物注射液的质量控制.方法 建立巴豆油致小白鼠耳廓肿胀的实验模型来评价骨瓜提取物注射液消炎的功能.结果 骨瓜提取物注射液能显著降低巴豆油所致小鼠耳廓肿胀度,其肿胀度明显低于模型对照组,表明骨瓜提取物注射液具有明显的抗炎作用.结论 成功建立了测定骨瓜提取物注射液生物活性的动物模型,可用于骨瓜提取物注射液的生物活性测定.
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红花注射液生物活性测定方法的建立与质量评价
目的:建立基于生物活性测定的红花注射液质量评价方法,探究红花注射液不良反应的物质基础.方法:建立挑丝法测定不同批次的红花注射液对凝血酶的抑制作用;采用紫外分光光度法测定不同批次红花注射液中总黄酮;采用相关分析考察抗凝血酶效价与总黄酮之间的相关性.结果:部分不良反应批次的红花注射液抗凝血酶活性比正常批次强;抗凝血酶活性与总黄酮含量有显著相关.结论:所建立的基于抗凝血酶活性的红花注射液质量评价方法重复性好,灵敏简便,可作为现行红花注射液质量控制标准的补充方法;红花注射液的不良反应与总黄酮含量有关,总黄酮含量过高为部分红花注射液引起不良反应的原因.
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重组人Era蛋白的可溶性表达、纯化及生物学活性测定
目的:为了得到可溶性表达的人Era(hEra)蛋白,并检测其生物学活性.方法:把人era的cDNA基因从pUC19质粒亚克隆人表达质粒pMAL-p2x中.pMAL-hEra转化大肠杆菌TB1,用异丙基硫代-B-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达.结果:pMAL-hEra载体表达的融合蛋白是以可溶状态存在,表达量占菌体总蛋白的23.9%.再利用直链淀粉亲和色谱柱对表达的融合蛋白进行纯化,接着用因子X将融合部分切除,但切除后的hEra蛋白不稳定,随着时间的延长而被降解.活性测定结果表明人Era蛋白能与GTP结合,并具有GTP酶的活性.结论:可溶性表达了人Era蛋白,并用体外实验证实人Era蛋白是一种G蛋白,这对人era基因的功能研究具有重要意义.
