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急性脑出血大鼠肠系膜淋巴结IRAK-4、CD14mRNA的表达与肠道屏障损伤的关系及星蒌承气汤的干预研究
目的:研究白细胞分化抗原14( CD14),白细胞介素一1受体相关激酶-4(IRAK-4)活性在急性脑出血痰热腑实证肠内内毒素信号转导通路的作用,以及星萎承气汤的干预作用.方法:采用大脑注射Ⅶ型胶原酶法建立SD大鼠急性脑出血模型,随机分为正常组,脑出血组,脑出血痰热腑实证组,星蒌承气汤组,每组分24h,48h,72h3个时相亚组,实时荧光定量PCR观察肠系膜淋巴结组织CD14、IRAK-4 mRNA表达,并观察结肠HE染色结果.结果:脑出血急性期肠系膜淋巴结组织CD14、IRAK-4 mRNA mRNA表达升高,星蒌承气汤能明显减轻结肠组织病理损伤.结论:CD14、IRAK-4 mRNA在介导急性脑出血内毒素信号转导中起重要作用,为肠道屏障损伤重要因素,星蒌承气汤对脑出血急性期痰热腑实证结肠组织具有一定的保护作用.
关键词： 白细胞分化抗原14 白细胞介素-1受体相关激酶-4 急性脑出血 痰热腑实证 大鼠 -
活体/离体门静脉灌注转染IRAK-4-shRNA对大鼠移植肝脏再灌注损伤的影响
目的通过观察活体或冷保存期离体门静脉灌注供肝转染白细胞介素-1受体相关激酶-4(IRAK-4)特异短发夹RNA(shRNA)对再灌注后受体TNF-α产生的影响,判断以IRAK-4为肝移植缺血再灌注损害(I/RI)治疗靶点的可行性并探索可行的shRNA治疗途径.方法雄性SD大鼠,随机分为冷缺血转染组、活体转染组、对照组,以两袖套法建立同种异体肝移植模型.冷缺血转染组于冷缺血期经门静脉灌注转染携带染IRAK-4-shRNA的转染质粒pSIIRAK-4;活体转染组在门静脉袖套吻合完成后,经门静脉分支注入pSIIRAK-4;对照组不予任何处理.按门静脉血流恢复后第0 min、60 min及180 min分为三个亚组,逆转录-聚合酶链式反应及蛋白免疫印记法测定肝组织的染IRAK-4 mRNA和蛋白表达水平;酶连免疫吸附法检测肝组织NF-κB活性及血清TNF-α含量.结果再灌注后活体转染组、对照组的IRAK-4蛋白与mRNA表达水平、NF-κB活性以及TNF-α含量均高于冷缺血转染组(P＜0.01);冷缺血转染组的IRAK-4表达明显抑制,再灌注后各时点差异无显著性(P＞0.05).结论以IRAK-4为靶点的冷缺血shRNAs转染途径能有效减轻肝移植时的I/RI,但能否以IRAK-4作为预防其他器官的I/RI的治疗靶点尚需深入研究.
关键词： 肝移植 缺血再灌注损伤 白细胞介素-1受体相关激酶-4 内毒素 -
脂多糖预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用
目的 探讨脂多糖(LPS)预处理对大鼠心肌缺血再灌注(L/R)损伤的保护作用及机制.方法 建立大鼠在体心肌I/R模型,24只SD大鼠随机分为3组:假手术组(Sham组),缺血再灌注组(I/R组),LPS预处理组(ET组).HE染色观察各组心肌形态学改变,RT-PCR法检测心肌组织中白细胞介素-1受体相关激酶-4(IRAK-4) mRNA水平,Western-Blot法检测心肌组织IRAK-4蛋白水平,免疫组化方法检测心肌组织中NF-KB的表达,ELISA法检测血清TNF-α含量.结果 HE染色提示ET组心肌细胞损伤较I/R组明显减轻.ET组及I/R组心肌组织IRAK-4mRNA水平及蛋白水平、NF-KB及血清TNF-α含量明显高于Sham组(均P＜0.01),并且ET组的表达水平又明显低于I/R组(P＜0.01).结论 抑制IRAK-4表达进而抑制NF-KB及TNF-α的表达,可能是LPS预处理减轻心肌I/R的重要机制之一.
关键词： 脂多糖 缺血再灌注 白细胞介素-1受体相关激酶-4 心肌 -
白细胞介素-1受体相关激酶-4在血吸虫病门脉高压小鼠肠系膜静脉的表达变化及其意义
目的 探讨血吸虫病门脉高压小鼠肠系膜静脉组织白细胞介素-1受体相关激酶-4(IRAK-4)的表达变化及意义.方法 将55只雄性昆明小鼠随机分为对照组(n=15)和感染组(n=40).感染组采用腹部敷贴法感染日本血吸虫尾蚴,分别于感染后12、20周随机分为12周组(n=20)、20周组(n=20)；采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测肠系膜静脉IRAK-4 mRNA表达与肿瘤坏死因子(TNF)-α mRNA表达,Western blot法检测肠系膜静脉IRAK-4蛋白表达.结果 感染组小鼠肠系膜静脉IRAK-4 mRNA表达强度值(12周组0.734±0.081,20周组0.682±0.069)和IRAK-4蛋白表达水平(12周组:1034.52±89.72,20周组:989.56±69.35)较对照组(IRAK-4mRNA表达强度值0.163±0.031,IRAK-4蛋白表达水平667.45±72.22)明显升高(P＜0.01,P＜0.05);20周组IRAK-4 mRNA和蛋白表达与12周组比较差异无统计学意义(P＞0.05)；各组IRAK-4mRNA的表达与其效应分子TNF-α mRNA的表达呈显著正相关(r=5.56,P＜0.01).结论 门静脉高压症小鼠内脏血管IRAK-4在转录和翻译水平的表达升高,并激活下游炎性反应,是参与门静脉高压性血管病变的重要因素.
关键词： 门静脉高压症 内毒素血症 血管病变 白细胞介素-1受体相关激酶-4 -
脂多糖预处理对大鼠急性胰腺炎IRAK-4表达的影响
目的:观察脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)预处理后白细胞介素-1受体相关激酶-4(Interleukin-1 receptor-associated kinase 4,IRAK-4)表达在大鼠急性胰腺炎(Acute pancreatitis,AP)早期的变化,探讨LPS预处理减轻AP的可能机制.方法:雄性SD大鼠63只,随机分为3组:假手术组(Sham组)、急性胰腺炎(AP组)和LPS预处理组(LPS组),LPS组经腹腔注射LPS,其余两组均给予等体积生理盐水.Sham组造模后3h取材,其余两组分别于造模后3、6、12、24h取材.HE染色显微镜下观察各组病理改变,Western blot及RT-PCR法测定胰腺组织IRAK-4蛋白和mRNA表达,免疫组化法检测胰腺组织NF-kB表达,ELISA法检测血浆中TNF-α含量.结果:病理损伤AP组＞LPs组＞Sham组.AP组IRAK-4 mRNA及蛋白的表达于12 h达到高峰,随后降低,而LPS预处理后其表达明显低于AP组(P＜0.01),且随时间的延长无明显改变(P＞0.05).LPS组各时间点NF-κB及血液TNF-α表达明显低于AP组(P＜0.01),两组均于12h达到高峰(P＜0.01).结论:抑制IRAK-4表达,进而抑制NF-kB及TNF-α等的表达,可能是脂多糖预处理对AP保护作用的重要机制之一.
关键词： 白细胞介素-1受体相关激酶-4 急性胰腺炎 脂多糖 -
牛磺酸预处理抑制IRAK-4信号通路对大鼠移植肝脏再灌注损伤的保护机制
目的 观察牛磺酸预处理后SD大鼠移植肝脏的白细胞介素-1受体相关激酶-4(interleukin-1 receptor aasociated kinase-4,IRAK-4)表达水平的变化,探讨牛磺酸预处理抑制肝脏缺血再灌注损害的相关机制.方法 雄性SD大鼠128只,完全随机化分为生理盐水对照组(NS组)和牛磺酸预处理组(TA组),每组64只,用Kamada's袖套法经行肝移植.NS组切取供肝前10 min经腰静脉注射生理盐水1.5 ml,TA组切取供肝前10 min经腰静脉注射牛磺酸(300 mmol/L)1.5 ml.于再灌注后0、60 min及180 min,蛋白免疫印记法及实时荧光定量PCR测定肝组织中IRAK-4 mRNA和蛋白表达水平;凝胶电泳迁移率分析法(EMSA)检测肝组织NF-κB活性及血清TNF-α含量;全自动血清自动生物化学仪检测血清转氨酶;光镜切片检测肝脏组织学.结果 牛磺酸预处理能明显提高大鼠1周生存率(P＜0.01),改善肝功能,减轻肝组织病理学改变.再灌注后0 min,血清转氨酶、IRAK-4 mRNA与蛋白表达水平、NF-κB活性以及TNF-α含量2组间比较差异无统计学意义(P＞0.05);NS组各项指标水平于再灌注60 min出现峰值,但TA组各项指标水平明显低于NS组(P＜0.01);再灌注后180 min,2组IRAK-4 mRNA与蛋白表达水平、NF-κB活性以及TNF-α含量均较60 min时有所下降,且TA组下降水平较NS组更为明显(P＜0.01).结论 牛磺酸对大鼠移植肝脏的缺血再灌注损伤有明显抑制作用,抑制IRAK-4及其下游的NF-κB、TNF-α表达是牛磺酸预处理减轻肝脏缺血再灌注损害的重要机制之一.
关键词： 肝移植 缺血再灌注损伤 牛磺酸 白细胞介素-1受体相关激酶-4 NF-κB -
缺氧增加小鼠小胶质细胞IRAK-4的表达
目的 观察缺氧后小鼠小胶质细胞株N9对白细胞介素-1受体相关激酶4( interleukin-1 receptor associated kinase-4, IRAK-4)表达的变化,探讨小胶质细胞内炎症反应的相关机制.方法 将培养的N9细胞置于低氧(3%O2,5%CO2,92%N2)条件下培养1、3、6、12、24 h,用Western blot检测蛋白表达的变化,用激光共聚焦技术观察IRAK-4在细胞内表达变化情况,用酶联免疫吸附法检测培养液上清肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量.结果 N9细胞IRAK-4的蛋白表达随缺氧时间延长而逐渐增高,1 h开始增加,3 h增加明显(P<0 01),6 h达高峰,12 h仍维持在较高水平(P<0 01),24 h 下降与常氧无显著性差异(P>0 05).激光共聚焦也显示随着缺氧时间的延长,荧光强度逐渐加强.培养液上清TNF-α含量的变化也符合相似的变化趋势.IRAK-4蛋白表达水平与培养液上清TNF-α含量的变化呈显著的正相关(r=0.863, P<0 05).结论 缺氧可以增加小鼠小胶质细胞内IRAK-4的蛋白表达,提示中枢神经系统内存在对免疫反应起着调控作用的TLR/IL-1R家族信号转导系统,调控下游炎症反应.
关键词： 缺氧 白细胞介素-1受体相关激酶-4 小胶质细胞 继发性脑损伤
