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补肾益髓方及其拆方对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠的神经保护作用及NF200和CSPGs表达的影响
目的:观察补肾益髓(BSYS)方及其拆方补肾(BS)和化痰活血(HTHX)方对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠的神经保护作用及脑和脊髓神经丝蛋白(NF) 200和硫酸软骨素蛋白多糖(CSPGs)表达的影响.方法:雌性C57BL/6小鼠随机分为正常对照组、模型组、醋酸泼尼松组、梓醇组、BSYS组、BS组和HTHX组.各造模小鼠以髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(MOG) 35-55诱导EAE模型.各治疗组小鼠每日予相应药物灌胃,共40d.醋酸泼尼松和梓醇为阳性对照药物.每日观察小鼠神经功能评分.取小鼠脑和脊髓,HE染色观察其病理变化,透射电镜观察轴突和髓鞘变化,免疫组化法测定NF200和CSPGs蛋白表达.结果:发病第25-40天,BSYS方和BS方明显降低小鼠神经功能评分(P＜0.05,P＜0.01);第37--40天,BSYS方优于BS方(P＜0.05).BSYS方及BS方可明显减轻小鼠脑和脊髓内炎细胞浸润评分(P＜0.05,P＜0.01);降低髓鞘/轴突面积比值(P＜0.05,P＜0.01),明显减轻髓鞘及轴突损伤;升高NF200蛋白表达(P＜0.05,P＜0.01);下调CSPGs表达(P＜0.05,P＜0.01).HTHX方只升高NF200蛋白表达(P＜0.05).结论:补肾益髓方及其拆方补肾方具有明显的神经保护作用.并通过上调NF200及下调CSPGs促进轴突修复及再生,化痰活血方的作用不明显.
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运动训练对脑梗死大鼠行为学及NF200表达变化的影响
目的:研究运动训练对脑梗死大鼠行为学的影响并从神经可塑性角度探讨其机制.方法:用线栓法制作大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)脑梗死模型,56只Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组和康复组.康复组于手术后5天开始进行滚筒、转棒、平衡木、网屏训练,每日40min,每周6次,共5周,假手术组与模型组则维持原来生活状态.对大鼠进行神经功能、运动能力和学习记忆能力测评观察其行为学变化,免疫组化法观察缺血区神经丝蛋白200(NF200)的表达变化.结果:康复组大鼠神经功能、运动能力、学习记忆能力优于模型组,神经功能在3周差异有显著性意义(P＜0.05),其转棒实验和平衡木实验在3周、5周(P＜0.01-0.05)差异有显著性意义,网屏实验在3周、5周差异有显著性意义(P＜0.05),学习记忆能力在5周有极显著性意义(P＜0.01).康复组大鼠缺血区NF200蛋白质阳性表达较模型组增多,在3周时差异有显著性意义(P＜0.05),5周时有极显著性意义(P＜0.01).结论:运动训练促进脑梗死大鼠神经功能、运动能力、学习记忆能力的恢复,其机制可能与缺血区NF200蛋白质表达上调有关.
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慢性前脑缺血致血管性痴呆大鼠不同脑区NF200的经时变化研究
目的 研究神经丝蛋白200(NF200)在慢性前脑缺血致血管性痴呆大鼠额、颞叶皮质和皮质下白质的经时变化.方法 采用双侧颈总动脉永久结扎方法制备慢性前脑缺血动物模型;采用免疫组织化学方法检测痴呆鼠不同脑区NF200的经时变化情况;采用同济大学研制的HPIAS-1000高清晰彩色病理图文分析系统对不同脑区NF200阳性信号的面积密度进行分析.结果 实验发现双侧颈总动脉永久结扎后不同脑区NF200的表达随时间变化.缺血1 m,2 m,4 m后NF200的表达阳性面积逐渐减少,与对照组相比有统计学意义.在形态学变化方面,1 m时NF200轻度变化,提示为可逆性损伤.随着缺血时间的延长,NF200免疫组化染色越来越淡.至4m时,NF200免疫组化染色基本消失,提示为不可逆损伤.结论 慢性持续性脑血流量下降致NF200的改变在血管性痴呆的病理生理过程中起一定作用.
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大鼠脊髓损伤组织中Mst3b和NF-200的表达及意义
目的 研究大鼠脊髓损伤组织中哺乳动物ste20样蛋白激酶3b(Mst3b)和神经丝蛋白200(NF-200)的表达及其意义.方法 64只SD大鼠随机均分为假手术组(B组)、单纯损伤组(C组)、肌苷治疗组(D)组、6-硫代鸟嘌呤组(E组)；另选4只大鼠作为正常对照(A组).术后3、7、14、28 d,用免疫组化法检测Mst3b和NF-200表达,BBB评分法对各组大鼠左后肢进行评分.结果 A组大鼠脊髓中Mst3b、NF-200无表达,其余各组术后7d的Mst3b阳性表达率高,14d的NF-200阳性表达率高(P＜0.01).与C组相比,D组Mst3b、NF-200表达及BBB评分明显增加(P＜0.01),而E组各指标显著减少(P＜0.05).Mst3b与NF-200表达呈正相关(r=0.864,P＜0.01).结论 Mst3b、NF-200可能在脊髓损伤修复过程中起重要作用.
关键词： 脊髓损伤 哺乳动物ste20样蛋白激酶3b 神经丝蛋白200 神经再生 -
大鼠视网膜缺血-再灌注损伤后视觉传导通路中神经丝蛋白200的表达
背景 神经丝蛋白200(NF200)是特异性分布于神经元轴突内,维持神经元形态、反映其功能、检测轴突再生状况的一个间接指标.NF200是否参与了视网膜缺血-再灌注损伤(RIRI)后整个视觉传导通路的异常变化有待进一步研究. 目的 研究RIRI后各时间点大鼠视觉传导通路中视网膜、外侧膝状体、上丘脑及视皮质等部位NF200的表达.方法 应用随机数字表法将40只SD大鼠随机分为RIRI1、2、3、4、6、8周组,伪手术组和正常对照组,每组5只大鼠.RIRI组采用前房灌注生理盐水法制作RIRI模型,以右眼为损伤眼；伪手术组仅行前房穿刺而不灌注生理盐水.于RIRI后1、2、3、4、6、8周处死大鼠,摘除大鼠眼球,并取外侧膝状体、上丘脑及视皮质组织制备冰冻切片,采用免疫组织化学法检测NF200在上述大鼠各部位神经元及轴突中的表达. 结果 大鼠RIRI 1、2、3、4、6、8周组、伪手术组和正常对照组损伤眼视网膜神经节细胞(RGCs)层NF200的表达量(A值)总体比较差异有统计学意义(F=78.855,P=0.000),其中RIRI 1周组NF200表达较正常对照组明显减少,差异有统计学意义(t=36.563,P＜0.01).RIRI 1周后可见损伤眼对侧外侧膝状体NF200的表达较正常对照组明显减少,差异有统计学意义(t=6.483,P＜0.01),而损伤4周、6周后对侧外侧膝状体NF200的表达较正常对照组明显增加,差异有统计学意义(t=2.904、4.313,P＜0.01).RIRI1周可见损伤眼对侧上丘脑NF200的表达较正常对照组明显减少,差异有统计学意义(t=2.966,P＜0.05),2周对侧上丘脑NF200的表达较正常对照组明显增加,差异有统计学意义(t=7.397,P＜0.01).RIRI 2、3、4周后双侧视皮质NF200的表达较正常对照组明显增加,差异均有统计学意义(对侧:t=18.728、18.213、15.088,P＜0.01；同侧:t=8.690、5.704、7.805,P＜0.01).结论 RIRI可造成损伤眼的RGCs、对侧外侧膝状体、上丘脑及双侧视皮质神经元轴突的损伤.
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HIF-1α基因修饰神经干细胞移植对大鼠损伤脊髓NF200和GFAP表达的影响
目的 研究低氧诱导因子-1α(HIF-1α)基因修饰的神经干细胞移植对大鼠脊髓损伤后神经丝蛋白200(NF200)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的影响及意义.方法 采用电控脊髓损伤打击装置制作大鼠脊髓损伤模型.按随机数字表将120只SD大鼠平均分为4组:假手术组(Sham组),单纯损伤组(SCI组),神经干细胞组(NSC组)和HIF-1α基因修饰NSC组(HIF-NSC组).应用免疫组化法检测受伤脊髓中HIF-1α、NF200和GFAP的表达.结果 HIF-Nsc组中HIF-1α免疫阳性细胞平均光密度值比其他各组各时间点均高(P<0.01),且表达高峰延迟至移植后14d;除第1天外,HIF-NSC组NF200表达比SCI组和NSC组明显增高(P<0.05),移植后28 dNF200免疫阳性轴突数目也比SCI组和NSC组明显增多(P<0.01);移植后7d、14d、28 dGFAP免疫阳性细胞面积均比SCI组和NSC组明显减少(P.<0.01).结论 HIF-1α基因修饰NSC移植可引起HIF-1α在损伤脊髓内有效表达,且能明显的促进NF200的表达,并能在脊髓损伤的后期抑制GFAP的表达.这提示HIF-1α基因修饰的NSC移植可减少受伤脊髓中胶质细胞的增生和胶质疤痕的形成,促进轴突再生.
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FK506对大鼠弥漫性轴索损伤后神经元凋亡及轴突再生相关蛋白表达的影响
目的 研究FK506对大鼠弥漫性轴索损伤后神经元凋亡及轴突再生相关蛋白神经丝蛋白200(NF200)、神经生长相关蛋白43(GAP-43)、凋亡相关蛋白激酶1(DAPK1)表达的影响.方法 通过头颅瞬间旋转损伤装置建立大鼠弥漫性轴索损伤模型,90只SD成年雄性大鼠随机分为假手术组、DAI模型组、FK506干预组(各组又分为6h、1d、7d亚组,各组n=10);各组于预定时间点采用mNSS法评估神经功能,免疫组化染色法检测DAPK1、NF200的表达变化,Western blot法检测GAP-43的表达变化、TUNEL检测神经元凋亡,实验数据以均数±标准差记录,使用统计学SPSS 18.0软件进行单因素方差分析,以P＜0.05为差异有统计学意义.结果 FK506干预组较DAI组损伤后的NF200标记轴索病理改变显示,形成轴索肿胀、轴索球数目明显降低;FK506干预组较DAI组各时间点DAPK1蛋白表达明显降低,神经元凋亡数目明显减少,GAP-43、NF200蛋白表达明显升高.结论 FK506能够在DAI后减少神经元细胞凋亡与轴索病理改变,减轻神经组织损伤;FK506能够加速神经元再生,促进脑组织损伤的修复.
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骨形态发生蛋白7促进大鼠急性脊髓损伤后神经功能修复的研究
目的 探讨骨形态发生蛋白7(bone morphogenetic protein 7,BMP7)是否具有促进大鼠急性脊髓损伤后神经功能修复的作用.方法 清洁级Wistar大鼠分为假手术组(SO组)、阴性对照组(NC组)和BMP 7实验组.假手术组仅暴露第10胸椎硬脊膜,但并不对其进行损伤.NC组以Allences′s打击器进行第10胸椎脊髓损伤模型,造模成功后,每天给第10胸椎硬脊膜处注射生理盐水,连续7天.BMP7组造模成功后,每天给损伤处注射BMP 7蛋白50 ng,连续7天.各组分别于术后6小时、3天、1周、2周、4周和8周进行BBB量表评分及利用Western blot检测损伤节段脊髓神经丝蛋白200(neurofilament protein 200,NF200)及胶质纤微酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)表达量的变化,于术后1周和8周采用生物信号采集和处理系统检测运动诱发电位(MEP).结果 BBB评分结果显示SO组后肢运动功能基本正常.NC组和BMP 7组后肢运动功能在术后完全丧失,3天后逐渐恢复,在1周、2周、4周和8周,BMP 7组的BBB评分均高于NC组(P<0.05).神经电生理测试结果显示,SO组胸10水平的MEP波形为正常,即P1-N1-P2.术后1周NC组和BMP 7组MEP波N1波均低于正常值,术后8周BMP 7组和NC组以M形双峰波为主,且前者波幅高于后者,但其较术后1周都明显增高.WesternBlot结果显示,NC组NF 200的表达一直无变化,BMP7组NF 200表达在术后3天明显升高,且持续增长直至至第4周;NC组和BMP 7组GFAP表达水平在2w达到高峰,随后下降,两组间无显著差异.结论 BMP7蛋白具有促进大鼠脊髓损伤后神经功能修复的作用.
