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复方健耳剂对国产DBA/2J小鼠耳蜗组织脑源性神经营养因子表达影响的初步研究
目的:研究中药复方健耳剂对小鼠耳蜗组织脑源性神经营养因子(BDNF)表达的影响,探讨其保护老年性耳蜗感音神经性损害机制.方法:选择断奶DBA/2J小鼠10只,随机分为对照组和中药组,各5只,对照组小鼠为常规饲料与日常饮水喂养;中药组小鼠为常规饲料与中药溶液喂养;至105d龄时两组同时终止实验,取出耳蜗,利用Real-Time PCR技术定量检测两组耳蜗组织BDNF的表达,并统计分析.结果:中药组BDNF的表达比对照组高(P<0.01).结论:复方健耳剂对BDNF的表达影响可能是其有效对抗老年性耳蜗感音神经性损害的重要机制之一.
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DBA/2J小鼠耳蜗毛细胞静纤毛早期的形态结构变化
目的:观察低周龄DBA/2J小鼠耳蜗毛细胞静纤毛形态结构的变化,探讨DBA/2J小鼠早期听力受损的原因.方法:检测DBA/2J小鼠2、4周龄和8同龄听觉脑干反应,扫描电镜下观察耳蜗底回毛细胞静纤毛的形态结构特征.结果:听觉脑干反应显示DBA/2J小鼠在4周龄后表现为渐进性的听力受损.扫描电镜可见2周龄时高倍镜下纤毛束融合并伴有纤毛束软化,4周龄时纤毛束融合、软化和倒伏更为严重,8周龄低倍镜下纤毛束缺失数目较多,尚存纤毛融合倒伏更为严重.结论:DBA/2J小鼠耳蜗毛细胞静纤毛出现纤毛束融合、软化、弯曲、倒伏甚至缺失,可能是导致其早发性听力受损的主要原因.
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DBA/2J小鼠对糖尿病诱导剂STZ反应的性别差异
目的 研究DBA/2J小鼠对糖尿病诱导剂链脲佐菌素(STZ)反应的性别差异.方法 DBA/2J小鼠经STZ腹腔注射后2、6、10周,分别测定体质量、空腹血糖(FBG)、尿蛋白含量.结果 与雌性小鼠比较,雄性小鼠体质量降低,FBG水平及尿蛋白含量升高.结论 单独STZ注射未能引起雌性DBA/2J小鼠的糖尿病反应.
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β-连接蛋白在DBA/2J小鼠视网膜的表达
目的 DBA/2J (D2)小鼠是遗传性色素性青光眼动物模型,目前广泛用于青光眼实验研究.本实验研究β-连接蛋白在D2小鼠视网膜的表达和定位,探讨其在青光眼发病过程中的作用.方法 根据眼压、视盘病理改变和视神经轴突损害情况,将3 ~12个月龄D2小鼠分为正常组、高眼压组、青光眼组,并采用3个月龄和12个月龄的C57 BL/6J(B6)小鼠作为青年和老年对照组.采用Tonopen AVIA笔式眼压计测量眼压,HE染色观察视盘病理改变,对苯二胺染色评价视神经轴突损害情况.Western blot法和免疫组织化学染色检测视网膜中β-连接蛋白表达水平和定位情况.结果 正常组、高眼压组、青光眼组D2小鼠月龄分别为(3.50±0.45)个月、(7.63±0.53)个月、(11.50±0.45)个月;眼压分别(13.11±0.96)mmHg(1 kPa =7.5 mmHg)、(23.69 ±0.69) mmHg、(23.56±0.23) mmHg,青年对照组和老年对照组眼压分别为(12.90±0.40) mmHg、(13.01±1.06)mmHg.青年对照组、老年对照组、正常组、高眼压组和青光眼组的β-连接蛋白表达量分别为0.81±0.08、0.89±0.06、0.80±0.07、0.50±0.07、0.32±0.03,差别有统计学意义(F=41.55,P<0.01).与正常组相比,高眼压组和青光眼组视网膜β-连接蛋白表达水平显著下降,差异有统计学意义(均为P <0.01).免疫组织化学结果显示,β-连接蛋白阳性信号主要定位于内丛状层、外丛状层和外界膜,在青光眼发病过程中,β-连接蛋白在视网膜各层表达均下降,外丛状层阳性信号表达下降明显.结论 β-连接蛋白随着青光眼发病进程表达逐渐下降,提示其可能参与青光眼的病理生理改变过程.
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青光安颗粒剂对自发性青光眼模型小鼠的降眼压作用及房水动力学的影响
背景 研究表明青光眼的眼压增高与转化生长因子-β(TGF-β)促进小梁网细胞外基质的堆积以及黏附分子CD44导致房水排出阻力增加有关.传统中药青光安颗粒剂是中医临床上常用的降眼压药物,其是否通过小梁网通路发挥作用尚不清楚.目的 研究青光安颗粒剂对自发性青光眼模型DBA/2J小鼠房水动力学的影响及其作用机制.方法 选取10只眼压正常的3月龄雌性DBA/2J小鼠作为对照组,采用计算机随机数字分配法将20只9月龄自发性眼压升高的DBA/2J小鼠随机分为高眼压组和青光安组,青光安组小鼠采用2.5 g/kg复方青光安颗粒剂灌胃,每天2次,连续15d,对照组和高眼压组小鼠以相同剂量生理盐水灌胃.采用经前房注入/抽吸系统进行眼压测量,分别以2.5、5.0 μl/min的速率继续灌注,计算房水流畅系数(C)值和房水流出阻力(R)值.将3月龄DBA/2J小鼠60只按计算机随机数字分配法分为高剂量青光安组、中剂量青光安组、低剂量青光安组和空白对照组,每组各15只,分别用25.00、12.50和6.25g/kg青光安颗粒剂灌胃,空白对照组用等容量生理盐水灌胃,给药后7d麻醉条件下提取各组小鼠含青光安药物血清和空白对照动物血清,然后收集各组小鼠含小梁网巩膜组织进行培养,采用纤连蛋白(FN)、层黏连蛋白(LN)和神经元特异性烯醇化酶(NSE)免疫组织化学染色鉴定小梁网细胞.终质量浓度为0、5、10、20、50和100 ng/ml的TGF-β处理小梁网细胞24h,采用MTT比色法检测各组细胞活性;用不同质量浓度含药血清培养经20 ng/mlTGF-β处理的小梁细胞,分别于培养后24、48和72 h采用ELISA法检测细胞上清液中TGF-β2受体质量浓度,采用Western blot法检测各组小梁网细胞中CD44蛋白的相对表达量.结果 对照组、高眼压组和青光安组小鼠在2.5 μl/min和5.0μl/min灌注速率下眼压明显不同,高眼压组小鼠眼压值明显高于青光安组和对照组,青光安组小鼠C值较高眼压组明显降低(1.08±0.36 vs.2.35±1.34),R值明显增加(1.05±0.47 vs.0.64±0.55),差异均有统计学意义(均P<0.01).原代培养的细胞呈长梭形,FN、LN和NSE均呈阳性表达.5、10和20 ng/ml TGF-β处理组细胞活力值明显低于0 ng/ml TGF-β处理组细胞,差异均有统计学意义(均P<0.05).与空白对照组比较,TGF-β组小梁网细胞上清液中TGF-β2受体质量浓度和细胞中CD44蛋白相对表达量均明显升高,差异均有统计学意义(均P<0.01);细胞培养后24、48和72 h TGF-β+高剂量含药血清组细胞上清液中TGF-β2受体质量浓度和细胞中CD44相对表达量均明显低于TGF-β组和TGF-β+低剂量含药血清组,差异均有统计学意义(均P<0.01).结论 青光安颗粒剂通过影响房水动力学因素达到降低青光眼眼压的作用.青光安含药血清能明显降低体外培养的鼠小梁网细胞中TGF-β2受体和CD44的表达.